1] 供试品溶液制备精密吸取供试品25. 0ml(分别为实施例1~4制备的复方鱼腥草 合剂），用水饱和正丁醇分3次振摇提取，每次25ml，合并提取液，蒸干，残渣加水10ml使溶 解，过D101大孔树脂柱（内径1. 5cm，柱高12cm)，先用水100ml洗脱，弃去水洗液，再用30% 乙醇50ml洗脱，弃去洗脱液，继续用70%乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加50% 甲醇转移，定容至25ml。
[0082]检测条件照高效液相色谱法（《中国药典》2010版附录VID)，以AgilentZ0RBAX SB-Phenyl(柱长为250mm，内径为4. 6mm，填料粒径为5ym)为色谱柱；柱温为40°C;检测 波长为277nm;以体积比为18. 5%的乙腈和81. 5%的0. 5%乙酸溶液为流动相；流速为 1. 5ml/min，分别取对照品溶液和供试品溶液10yL注入液相色谱仪，测定，即得。
[0083] (3)不同复方鱼腥草合剂含量测定
[0084] 表1不同复方鱼腥草合剂含量测定结果
[0085]
[0086] 注：140305、140306、140307为市售产品（浙江康恩贝中药有限公司生产）。
[0087] 实施例6 :复方鱼腥草合剂对急性咽炎大鼠咽部黏膜及其下组织病变等级的影响 (药效实验）
[0088] 仪器及材料：双目生物显微镜（南京麦迪森仪器有限公司）；Wistar大鼠，体重 (250±20)g，雌雄各半，均由浙江大学医学院实验动物中心提供；
[0089] 本发明所用复方鱼腥草合剂为本发明的实施例4所制备，其药效成分鱼腥草素含 量18. 5yg/ml，槲皮苷含量85. 7yg/ml，黄芩苷含量1. 53mg/ml，连翘苷含量23. 1yg/ml。 阳性药（即市售复方鱼腥草合剂）为浙江康恩贝中药有限公司生产，批号为140306,其药效 成分鱼腥草素含量0yg/ml，槲皮苷含量21. 2yg/ml，黄苳苷含量0. 82mg/ml，连翘苷含量 15. 6yg/ml〇
[0090] 将60只大鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组、复方鱼腥草合剂低、中、高剂 量组6组，每组10只。除空白组外，其余5组于第1~3天上、下午各用15%氨水喷大鼠咽 部1次，每次用喷雾器喷3下，相当于6y115%氨水留在大鼠咽部；空白组咽部喷蒸馏水。 分别对动物造模后出现的一般症状、体征以及咽部病理形态学等方面进行考察，以评价动 物造模是否成功。
[0091]将复方鱼腥草合剂以2. 5, 5,10. 0ml?kg4个剂量组灌胃给药（ig)，每日1次，连 续给药5d;阳性对照组iglO. 0ml?kg1的市售复方鱼腥草合剂，每日1次，连续5d;空白组 及模型组每天ig蒸馏水10. 〇ml?kg、
[0092] 观察指标：
[0093] 1.-般状态观察：
[0094] 观察记录大鼠的饮水、饮食、活动、体重、精神状态及被毛等情况。
[0095] 2.病理切片观察：
[0096] 空白组、模型组、治疗药物组于末次给药后24h，从大鼠腹主动脉取血处死动物，摘 取咽部组织，用10%甲醛溶液固定，次日取材后经常规脱水，石蜡包埋，切片，HE染色后在 光学显微镜下观察。
[0097]I.正常结构，黏膜、固有膜层无水肿，无炎性细胞浸润，记为（_)，积0分。
[0098]II.咽喉上皮增生不明显，固有膜水肿，上皮下轻度炎症细胞浸润，记为（+)，积1 分。
[0099]III.咽喉上皮明显增生，上皮下有炎症细胞浸润，记为（++)，积2分。
[0100] IV.咽喉上皮中度增生，并形成钉突，记为（+++)，积3分。
[0101] V.咽喉上皮严重增生腺上皮坏死，并形成钉突，上下皮有炎症细胞浸润，记为 (++++)，积 4 分。
[0102] 结果：
[0103] 1. -般观察：从造模第2天开始，大部分大鼠逐渐出现搔抓口部、饮水频繁、进食 减少、咽部充血呈鲜红色、肿胀等症状与体征，到造模第3天症状更明显。
[0104] 2.病理切片观察。
[0105] 表2对急性咽炎大鼠咽部黏膜及其下组织病变等级影响（x土s，n= 10)
[0106]
[0107] 注：与空白组比##P〈0. 01，与模型组比*P〈0. 05广P〈0. 01，与阳性组比$P〈0. 05
[0108] 结果表明，本发明提供的复方鱼腥草合剂治疗急性咽炎的药效活性显著，与市售 复方鱼腥草合剂相比，其量效范围更大，效果更显著。
【主权项】
1. 一种高含量复方鱼腥草合剂的制备工艺，以鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘和金银花为 主药药材制备，其特征在于，该合剂含有的药效成分及其含量为：鱼腥草素10~25iig/ml、 槲皮苷50~100yg/ml、黄苳苷1~2mg/ml、连翘苷15~40yg/ml;其制备步骤如下； (1) 闪提：取鱼腥草，加5~10倍体积量30~70%乙醇溶液浸泡0. 5~2h后进行闪 提，闪提时间1~5min，闪提转速3500~5000rpm，过滤，药渣再重复提取1~2次，合并滤 液浓缩至60°C~80°C下相对密度为1. 08~1. 10的清膏； (2) 水蒸气蒸馏：取黄芩、板蓝根、连翘、金银花和步骤（1)中的鱼腥草药渣，加8~15 倍体积量水，水蒸气蒸馏1~3h，提取1~3次，收集挥发油备用，提取液过滤，合并滤液浓 缩至60°C~80°C下相对密度为1. 18~1. 20的清膏； (3) 醇沉：取步骤（2)所得的清膏，加入80~90%乙醇溶液调节至含醇量为70%，醇沉 过夜，醇沉液过滤，沉淀离心后过滤，合并滤液并浓缩至60°C~80°C下相对密度为1. 08~ 1. 10的清膏； (4) 水沉：取步骤（3)所得的清膏与步骤（1)所得的清膏，合并，加入稀盐酸溶液调节 pH至2. 0~4. 0,离心，分离得滤液； (5) 制剂：取蔗糖，制成单糖浆，加入步骤（4)中的滤液，加入蜂蜜、苯甲酸钠、羟苯乙酯 及步骤（2)中的挥发油，混匀，过滤，滤液加入NaOH溶液调节pH至4. 6~4. 9,调整总量至 目标量，搅匀，滤过，灌装，灭菌，即得。2. 如权利要求1所述的高含量复方鱼腥草合剂的制备工艺，其特征在于，所述的步骤 ⑴中，闪提条件为：取鱼腥草，加6~8倍体积量40~60%乙醇溶液，浸泡0. 5~lh，闪 提时间为2~3min，闪提转速为4000~4500rpm，过滤，药渣重复提取2次。3. 如权利要求2所述的高含量复方鱼腥草合剂的制备工艺，其特征在于，所述的步骤 (1) 中，闪提条件为：取鱼腥草，加8倍体积量50%乙醇溶液浸泡lh，闪提时间为2min，闪提 转速为4500rpm，过滤，药渣重复提取2次。4. 如权利要求1所述的高含量复方鱼腥草合剂的制备工艺，其特征在于，所述的步骤 (2) 中，水蒸气蒸馏条件为：加10~11倍体积量的水，水蒸气蒸馏1~3h，提取2~3次。5. 如权利要求4所述的高含量复方鱼腥草合剂的制备工艺，其特征在于，所述的步骤 (2) 中，水蒸气蒸馏条件为：加11倍体积量的水，水蒸气蒸馏2h，提取2次。6. 如权利要求1所述的高含量复方鱼腥草合剂的制备工艺，其特征在于，所述的步骤 (3) 中，乙醇溶液为80~85%乙醇溶液。7. 如权利要求6所述的高含量复方鱼腥草合剂的制备工艺，其特征在于，所述的步骤 (3) 中，乙醇溶液为85 %乙醇溶液。8. 如权利要求1所述的高含量复方鱼腥草合剂的制备工艺，其特征在于，所述的步骤 (4) 中，加入稀盐酸溶液调节pH至2. 0~3. 0。9. 如权利要求8所述的高含量复方鱼腥草合剂的制备工艺，其特征在于，所述的步骤 (4)，加入稀盐酸溶液调节pH至2. 5。
【专利摘要】本发明公开了一种高含量复方鱼腥草合剂的制备工艺，以鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘和金银花为主药药材制备，该合剂含有的药效成分及其含量为：鱼腥草素10～25μg/ml、槲皮苷50～100μg/ml、黄芩苷1～2mg/ml、连翘苷15～40μg/ml；其制备步骤包括：(1)闪提；(2)水蒸气蒸馏；(3)醇沉；(4)水沉；(5)制剂。本发明提供的制备工艺，不仅可以有效提高复方鱼腥草合剂中鱼腥草素、槲皮苷等药效成分含量，而且能去除药材中的多糖、蛋白质、鞣制等成分，降低销售贮藏过程中产生的沉淀，提高了药物的稳定性和安全性，而且单独使用即可有效治疗外感风热引起的咽喉疼痛和急性咽炎、扁桃腺炎。
【IPC分类】A61P11/00, A61P11/04, A61K36/78
【公开号】CN105168509
【申请号】
【发明人】王建方, 姚建标, 印晓红, 吴健, 王如伟, 金汉台, 陈卿, 兰文一
【申请人】浙江康恩贝中药有限公司
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年7月15日