五指毛桃及其提取物的新应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药技术领域，具体的说是涉及五指毛桃及其提取物的新应用。
【背景技术】
[0002] 肤色是人们审美的标准之一。对于亚洲女性，白皙肤色更是一种普遍追求。为此， 各种产品应运而生，如：增白产品、防紫外线产品和膜产品等。经研究，皮肤颜色由皮肤细胞 中所含的各种色素综合决定。在众多色素中，黑素细胞中所含的黑色素量是最主要的决定 因素。进一步研究证实，酪氨酸酶（EC1. 14. 18. 1)是黑色素合成的关键酶。由此，通过抑制 酪氨酸酶活性，以减少黑色素生成，从而达到美白的护肤效果成为研发护肤产品的重要依 据之一（实用医学杂志[J]，2005, 21，1364-1366 ;厦门大学学报（自然科学版）[J]，2007， 46,274-282)。在这些产品中常用的美白剂如：氢醌、曲酸、熊果苷等几种，这些物质或多或 少具有相当的细胞毒性。因此，酪氨酸酶抑制剂的安全性是美白护肤产品研发过程中需要 并重考虑的因素，而中草药的选择无疑在这方面更加易于被消费者接受。
[0003] 五指毛桃，别名五指牛奶、五爪龙、牛奶根、南芪，广西、广东、云南等多个民族 有药用记载，主产广西、广东等地，被誉为"广东人参"。五指毛桃是桑科榕属植物粗叶 格（Ficushirtavahl.)的根。五指毛桃在民间用于保健养生，有健脾去湿、止咳化痰、通 经活络的功效，在广东民间有上千年的使用历史。北京大学的张宝旭等（专利【申请号】 200510002111.7)公开了五指毛桃在制备肝炎辅助治疗药物以及保健食品中的新用途。南 方医科大学的袁立霞（申请号 ：201010274140.X)公开了一种防治病毒性心肌炎的药物组 合物及其制备方法。王晓平等（王晓平等，五指毛桃水提液体外抗菌作用的实验研究，时珍 国医国药，2010, 21 (7) =1692-1693.)报道了五指毛桃水提液对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、 金黄色葡萄球菌均具有抑制作用，最低抑菌浓度均为lg/ml。此外也有报道五指毛桃提取物 具有抗炎症，抗酸化和抗老化的作用。但是目前五指毛桃主要应用仅限于上述几个方面，对 其提取物的其它应用价值也还未见深入的研究报道。
[0004] 中国专利CN103877283A公开了一种美白祛斑、排毒养颜的中药液，其以包括五指 毛桃在内的10种中药组成复方水煎获得，可以抑制酪氨酸酶活性，具有美白祛斑和排毒养 颜的功效。但是，该功效的实现建立在整个中药复方共同作用基础上，该专利并未公开五指 毛桃或五指毛桃提取物单独能够抑制酪氨酸酶活性，并具有美白皮肤的效果。
[0005] 五指毛桃在中药记载中并未出现美容美白相关功效的记载，现有技术中也未见五 指毛桃作为酪氨酸酶抑制剂的用途，以及五指毛桃应用于美白化妆品的报道。
【发明内容】
[0006] 有鉴于此，本发明的目的在于提供五指毛桃及其提取物在一系列美容美白相关的 应用，主要包括在制备酪氨酸酶抑制剂、黑色素生成抑制剂、美白化妆品以及皮肤美白、防 止黑色素沉积中的新应用。
[0007] 在中药领域，五指毛桃的功效记载仅限于具有健脾补肺、行气利湿、舒筋活络之 功，岭南地区的中医或少数民族民间医生常用于治疗脾虚浮肿、食少无力、肺痨咳嗽、盗汗、 带下、产后无乳、月经不调、风湿痹痛、水肿等症。而本发明经过创造性研究发现，五指毛桃 提取物具有较好地抑制酪氨酸酶活性的能力，能够用于皮肤美白和相关化妆品的制备。
[0008] 作为优选，所述五指毛桃提取物为其水提物或醇提物。
[0009] 更优选地，本发明所述五指毛桃提取物通过以下方法获得：
[0010] 步骤1、五指毛桃粉碎后加入乙醇水溶液提取，提取后除去溶剂获得五指毛桃粗提 物；
[0011] 步骤2、五指毛桃粗提物加去离子水溶解，然后上样至大孔吸附树脂，依次用去离 子水、由低到高的梯度浓度乙醇溶液进行梯度洗脱，分别收集其中的60v/v% -95v/v%浓 度乙醇洗脱的洗脱液，减压脱除乙醇和水，获得五指毛桃提取物。
[0012] 本发明所述五指毛桃提取物可以是来自60v/v% -95v/v%浓度中各单一浓度乙 醇洗脱的洗脱液，也可以是它们的混合物。
[0013] 在本发明的一些实施方式中，步骤2中分别收集其中的60v/v% -95v/v%浓度乙 醇洗脱的洗脱液可以为60v/v%乙醇洗脱的洗脱液（也可称为60v/v%乙醇洗脱部位，以 下类同）、80v/v%乙醇洗脱的洗脱液、90v/v%乙醇洗脱的洗脱液、95v/v%乙醇洗脱的洗脱 液。
[0014] 作为优选，步骤1所述提取为超声提取、搅拌提取或逆流循环提取。
[0015] 作为优选，步骤2所述由低到高的梯度浓度乙醇溶液为20v/v% -95v/v%浓度的 梯度浓度乙醇溶液。更优选地，所述步骤2所述由低到高的梯度浓度乙醇溶液为由20v/v% 乙醇溶液、30v/v%乙醇溶液、40v/v%乙醇溶液、60v/v%乙醇溶液、80v/v%乙醇溶液、90v/ v%乙醇溶液和95v/v%乙醇溶液组成的梯度浓度乙醇溶液。此外，在本发明的一些具体实 施方式中，所述由低到高的梯度浓度乙醇溶液还可以如下之一选择：
[0016] (l)20v/v%乙醇溶液、40v/v%乙醇溶液、60v/v%乙醇溶液、80v/v%乙醇溶液、 95v/v%乙醇溶液；
[0017] (2)40v/v%乙醇溶液、60v/v%乙醇溶液、80v/v%乙醇溶液；
[0018] (3) 30v/v%乙醇溶液、60v/v%乙醇溶液、90v/v%乙醇溶液。
[0019] 作为优选，所述大孔吸附树脂为AB-8型大孔吸附树脂、D301型大孔吸附树脂或 X-5型大孔吸附树脂。
[0020] 作为优选，步骤1所述提取的提取时间为0. 5_2h，在本发明的一些【具体实施方式】 中，可以选择〇. 5h、lh或2h。
[0021] 作为优选，步骤1中五指毛桃和乙醇水溶液的质量体积比为lg: 10_20mL，在本发 明的一些【具体实施方式】中，可以以40g和400mL、40g和800mL、20g和400mL来表示。
[0022] 作为优选，步骤1所述乙醇水溶液的乙醇浓度为50v/v% -90v/v%，在本发明的一 些【具体实施方式】中，可以选择50v/v%、70v/v%或90v/v%。
[0023] 作为优选，所述五指毛桃提取物的总黄酮含量为7. 9-17. 5%。
[0024] 将本发明制备方法获得五指毛桃提取物和现有的酪氨酸酶抑制剂以及美白剂熊 果苷相比较，熊果苷的酪氨酸酶抑制率在43%，而本发明所述五指毛桃提取物的酪氨酸酶 抑制率在45-69%，明显高于现有产品熊果苷的抑制效果。
[0025]同时，本发明所述五指毛桃提取物中含有较多的总黄酮，而在清除自由基效果方 面，本发明所述五指毛桃提取物具有高达65-77%的自由基清除率，能够应用美白产品中。
[0026] 此外，将本发明所述五指毛桃提取物作用于斑马鱼胚胎，结果显示，本发明所述五 指毛桃提取物对斑马鱼黑色素生成具有抑制活性，能够防止肌肤黑色素沉积。优选地，具 有黑色素生成抑制活性的五指毛桃提取物为按照本发明五指毛桃提取物制备方法获得的 80v/v%浓度乙醇洗脱部位。
[0027] 本发明所述五指毛桃提取物既可以单独作为活性物质应用于本发明所述各应用 领域中，也可以配合其他活性物质一同使用。
[0028] 由以上技术方案可知，五指毛桃及其提取物具有优异的酪氨酸酶抑制活性，特别 是五指毛桃提取物具有与现有的酪氨酸酶抑制剂以及美白剂熊果苷相比更显著的酪氨酸 抑制活性，同时具有防止黑色素沉积作用和较高的自由基清除率，含有较多的总黄酮，能够 更好地应用于美容美白领域中。
【附图说明】
[0029] 图1所示为斑马鱼胚胎表观黑色素抑制效果的镜检图；其中1-A表示空白对照镜 检结果；1-B为采用五指毛桃80v/v%乙醇洗脱部位处理的镜检结果。
【具体实施方式】
[0030] 本发明实施例公开了五指毛桃及其提取物的新应用。本领域技术人员可以借鉴本 文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术 人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的应用已经通过较佳实施例 进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
【发明内容】
、精神和范围内对本文所述的产品及方 法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0031] 为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明提供的五指毛桃及其提取物的 新应用进行详细说明。
[0032] 实施例1 :本发明所述五指毛桃提取物的制备
[0033] 将40g五指毛桃干燥后粉碎，与400mL70v/V%乙醇溶液混合，超声提取0. 5小时， 分离出粗提液，经减压脱除溶剂后，得到五指毛桃粗提物2. 6g。
[0034] 取五指毛桃粗提物1. 6g，用去离子水溶解后，上样到AB-8树脂填充柱，依次用去 离子水、20v/v%乙醇、40v/v%乙醇、60v/v%乙醇、80v/v%乙醇和95v/v%乙醇梯度洗脱， 分别收集60v/v%乙醇、80v/v%乙醇、95v/v%乙醇的洗脱液，减压脱除乙醇和水，获得五指 毛桃提取物，收集-20 °C下冷冻保存。
[0035] 实施例2 :本发明所述五指毛桃提取物的制备
[0036] 将20g五指毛桃干燥后粉碎，与400mL50v/V%乙醇溶液混合，搅拌提取2小时，分 离出粗提液，经减压脱除溶剂后，得到五指毛桃粗提物1. 7g。
[0037] 取五指毛桃粗提物1. 0g，用去离子水溶解后，上样到D301树脂填充柱，依次用去 离子水、40v/v%乙醇、60v/v%乙醇、80v/v%乙醇梯度洗脱，分别收集60v/v%乙醇、80v/ v%乙醇的洗脱液，减压脱除乙醇和水，获得五指