无菌大培养皿并用Parafilm-M膜密封后,于4 °C条件下黑暗保存。
[0032]本实施例的方法能够使黑木相思幼苗生产不受季节限制,还具有更好的营养供应和抗病能力和方便贮藏和运输的特点,通过本实施例的方法得到的黑木相思人工种子栽培出的黑木相思幼苗成活率100%,且无表型变异。在步骤(3)的增殖培养基中继代30代,未发现有变异苗出现,说明可以高继代培养。
[0033]实施例2
[0034]本实施例的黑木相思人工种子制备方法,包括如下步骤:
[0035](I)外植体处理:将采回的黑木相思枝条剪去叶片,用1%洗衣粉溶液浸泡清洗7分钟,再用自来水冲洗干净;在超净工作台上用70%的乙醇震荡漂洗50秒,用无菌水冲洗3次后,用0.08%的升汞溶液消毒10分钟,用无菌水冲洗7次,吸干水。
[0036](2)诱导培养:截取带I?2个腋芽茎段接种于诱导培养基上,上述诱导培养基为MS+0.3mg/L 6-BA+0.08mg/L IBA+25g/L蔗糖+琼脂,进行暗培养8天后转到光照下培养,每天12小时灯光,光照强度1500?2000Lux,25°C?28°C,培养25?30天诱导产生出不定芽。
[0037](3)增殖培养:将上述诱导培养产生的不定芽转到增殖培养基上,上述增殖培养基为MS+0.5mg/L 6-BA+0.15mg/L NAA+25g/L蔗糖+琼脂,光照下培养,每天12小时灯光,光照强度1500?2000Lux,25°C?28°C,培养25?30天诱导产生出丛生芽;在上述增殖培养条件下,每25?30天继代培养一次,上述继代培养使用上述增殖培养基。
[0038](4)人工种子制作:将1/2MS+0.3mg/L IBA+3.0%海藻酸钠+1.0%壳聚糖溶液注入试管,将上述步骤(3)中增殖得到的丛生芽移进上述试管中的溶液内部,用2.0% CaCl2溶液注入上述试管内壁,凝固5?lOmin,用清水冲洗出上述试管内的固化凝胶即得人工种子。
[0039](5)人工种子贮藏:将上述⑷制作的人工种子盛入无菌大培养皿并用Parafilm-M膜密封后,于4 °C条件下黑暗保存。
[0040]本实施例的方法能够使黑木相思幼苗生产不受季节限制,还具有更好的营养供应和抗病能力和方便贮藏和运输的特点,通过本实施例的方法得到的黑木相思人工种子栽培出的黑木相思幼苗成活率99%,且无表型变异。在步骤(3)的增殖培养基中继代30代,未发现有变异苗出现,说明可以高继代培养。
[0041]实施例3
[0042]本实施例的黑木相思人工种子制备方法,包括如下步骤:
[0043](I)外植体处理:将采回的黑木相思枝条剪去叶片,用3%洗衣粉溶液浸泡清洗3分钟,再用自来水冲洗干净;在超净工作台上用75%的乙醇震荡漂洗10秒,用无菌水冲洗2次后,用0.12%的升汞溶液消毒5分钟,用无菌水冲洗3次,吸干水。
[0044](2)诱导培养:截取带I?2个腋芽茎段接种于诱导培养基上,上述诱导培养基为MS+0.7mg/L 6-BA+0.12mg/L IBA+35g/L蔗糖+琼脂,进行暗培养6天后转到光照下培养,每天12小时灯光,光照强度1500?2000Lux,25°C?28°C,培养25?30天诱导产生出不定芽。
[0045](3)增殖培养:将上述诱导培养产生的不定芽转到增殖培养基上,上述增殖培养基为MS+0.7mg/L 6-BA+0.25mg/L NAA+35g/L蔗糖+琼脂,光照下培养,每天12小时灯光,光照强度1500?2000Lux,25°C?28°C,培养25?30天诱导产生出丛生芽;在上述增殖培养条件下,每25?30天继代培养一次,上述继代培养使用上述增殖培养基。
[0046](4)人工种子制作:将1/2MS+0.5mg/L IBA+5.0 %海藻酸钠+3.0 %壳聚糖溶液注入试管,将上述步骤(3)中增殖得到的丛生芽移进上述试管中的溶液内部,用3.0% CaCl2溶液注入上述试管内壁,凝固5?lOmin,用清水冲洗出上述试管内的固化凝胶即得人工种子。
[0047](5)人工种子贮藏:将上述⑷制作的人工种子盛入无菌大培养皿并用Parafilm-M膜密封后,于4 °C条件下黑暗保存。
[0048]本实施例的方法能够使黑木相思幼苗生产不受季节限制,还具有更好的营养供应和抗病能力和方便贮藏和运输的特点,通过本实施例的方法得到的黑木相思人工种子栽培出的黑木相思幼苗成活率98%,且无表型变异。在步骤(3)的增殖培养基中继代30代,未发现有变异苗出现,说明可以高继代培养。
[0049]以上内容是结合具体的实施方式对本发明所作的进一步详细说明,不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干简单推演或替换,都应当视为属于本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种黑木相思人工种子制备方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤: (1)外植体处理:将采回的黑木相思枝条剪去叶片,用1-3%洗衣粉溶液浸泡清洗3-7分钟,再用自来水冲洗干净;在超净工作台上用70-75%的乙醇震荡漂洗10-50秒,用无菌水冲洗1-3次后,用0.08-0.12%的升萊溶液消毒5-10分钟,用无菌水冲洗3-7次,吸干水; (2)诱导培养:截取带I?2个腋芽茎段接种于诱导培养基上,所述诱导培养基为MS+0.3-0.7mg/L 6-BA+0.08-0.12mg/L IBA+25_35g/L 蔗糖 + 琼脂,进行暗培养 6-8 天后转到光照下培养,每天12小时灯光,光照强度1500?2000Lux,25°C?28°C,培养25?30天诱导产生出不定芽; (3)增殖培养:将所述诱导培养产生的不定芽转到增殖培养基上,所述增殖培养基为MS+0.5-0.7mg/L 6-BA+0.15-0.25mg/L NAA+25_35g/L 蔗糖 + 琼脂,光照下培养,每天 12 小时灯光,光照强度1500?2000Lux,25°C?28°C,培养25?30天诱导产生出丛生芽;任选地,在所述增殖培养条件下,每25?30天继代培养一次,所述继代培养使用所述增殖培养基; (4)人工种子制作:将1/2MS+0.3-0.5mg/L IBA+3.0 ?5.0 % 海藻酸钠 +1.0 ?3.0%壳聚糖溶液注入试管,将所述步骤(3)中增殖得到的丛生芽移进所述试管中的溶液内部,用2.0?3.0% CaCl2S液注入所述试管内壁,凝固5?lOmin,用清水冲洗出所述试管内的固化凝胶即得人工种子; (5)人工种子贮藏:将所述(4)制作的人工种子盛入无菌大培养皿并用Parafilm-M膜密封后,于4°C条件下黑暗保存。2.根据权利要求1所述的黑木相思人工种子制备方法,其特征在于,所述步骤(I)的外植体处理具体为:将采回的黑木相思枝条剪去叶片,用2%洗衣粉溶液浸泡清洗5分钟,再用自来水冲洗干净;在超净工作台上用75%的乙醇震荡漂洗30秒,用无菌水冲洗I次后,用0.1 %的升汞溶液消毒7分钟,用无菌水冲洗5次,吸干水。3.根据权利要求1所述的黑木相思人工种子制备方法,其特征在于,所述步骤⑵的诱导培养具体为:截取带1-2个腋芽茎段接种于诱导培养基上,所述诱导培养基为MS+0.5mg/L 6-BA+0.lmg/L IBA+30g/L蔗糖+琼脂,进行暗培养7天后转到光照下培养,每天12小时灯光,光照强度1500?2000Lux,25°C?28°C,培养25?30天诱导产生出不定芽。4.根据权利要求1所述的黑木相思人工种子制备方法,其特征在于,所述步骤(3)的增殖培养具体为:将所述诱导培养产生的不定芽转到增殖培养基上,所述增殖培养基为MS+0.6mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖+琼脂,光照下培养,每天12小时灯光,光照强度1500?2000Lux,25°C?28°C,培养25?30天诱导产生出丛生芽;任选地,在所述增殖培养条件下,每25?30天继代培养一次,所述继代培养使用所述增殖培养基。5.根据权利要求1所述的黑木相思人工种子制备方法,其特征在于,所述步骤(4)的人工种子制作具体为:将1/2MS+0.4mg/L IBA+4.0%海藻酸钠+2.0 %壳聚糖溶液注入试管,将所述步骤(3)中增殖得到的丛生芽移进所述试管中的溶液内部,用2.5% CaCl2S液注入所述试管内壁,凝固5?lOmin,用清水冲洗出所述试管内的固化凝胶即得人工种子。6.根据权利要求1所述的黑木相思人工种子制备方法,其特征在于,所述步骤⑶中进行30代所述继代培养。
【专利摘要】本发明公开了一种黑木相思人工种子制备方法,包括外植体处理、诱导培养、增殖培养、人工种子制作和人工种子贮藏的步骤,其中诱导培养使用的诱导培养基为MS+0.3-0.7mg/L?6-BA+0.08-0.12mg/L?IBA+25-35g/L蔗糖+琼脂,增殖培养使用的增殖培养基为MS+0.5-0.7mg/L?6-BA+0.15-0.25mg/L?NAA+25-35g/L蔗糖+琼脂,最终制作的人工种子盛入无菌大培养皿并密封后,于4℃条件下黑暗保存。本发明的方法不受季节限制,具有更好的营养供应和抗病能力,并且方便贮藏和运输,人工种子栽培出的幼苗成活率近100%,且无表型变异。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105165606
【申请号】
【发明人】王立, 黄宏健, 谭沛涛, 胡杨
【申请人】江门市新会区林业科学研究所
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年8月4日