车前子多糖的提取方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物提取技术领域，具体涉及车前子多糖的提取方法。
【背景技术】
[0002] 车前子为车前科植物Plantago asiatica L或平车前Plantago depressa Willd.的干燥成熟种子，具有利水、清热、明目、祛痰的功效，用于小便不通，淋浊带下，尿 血，暑湿泻痢，咳嗽多痰。研究表明车前子多糖是由木糖、阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄 糖、半乳糖醛酸等组成的杂多糖，该多糖是一种部分发酵性膳食纤维，其分子量为几千到上 百万不等。众所周知，采用不同的提取方法，所得到的车前子多糖的成分不同，最终带来的 功效也不同。目前常规的车前子多糖的提取工艺包括以下步骤：1)将车前子破碎用6~12 倍重量的80~95%乙醇回流2~3次，每次回流2~3h，除去脂溶性杂质；2)将残渣加6~ 12倍重量的蒸馏水回流提取2~3次，每次回流提取2~3h，滤液浓缩至药材0. 2~I. 0 体积，加入80~95 %乙醇沉淀，离心得沉淀；3)沉淀依次用2~4倍重量的无水乙醇、丙 酮分别洗涤；4)洗涤后的沉淀用0. 5~2倍重量的蒸馏水溶解，以分子量大小为3X IO3~ I. 2 X IO4的透析袋透析24~72h ;5)将透析液浓缩，加入乙醇沉淀，离心得沉淀；沉淀依 次用2~4倍重量的无水乙醇，丙酮分别洗涤，洗涤后的沉淀用蒸馏水溶解，采用弱酸弱碱 性阴、阳离子交换树脂串联法脱去色素和蛋白质，减压浓缩洗脱液，即得车前子多糖。经验 证，该多糖不仅具有整肠通便、降低血脂、调节血糖的功效，还具有良好的免疫促进作用。然 而，本申请人在上述提取方法的基础上加以改进，提取的车前子多糖的免疫促进作用明显 提尚。
【发明内容】
[0003] 本发明要解决的技术问题是提供一种车前子多糖的提取方法，该方法提取的车前 子多糖具有较强的免疫促进作用。
[0004] 本发明提供的技术方案是车前子多糖的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：
[0005] 1)车前子破碎，加入其20~30倍重量的水，回流提取2~3次，每次提取1~3h， 过滤，收集滤液备用；
[0006] 2)将滤液浓缩至60°C下相对密度为I. 1~1. 3的浸膏，加入乙醇沉淀，离心得沉 淀；
[0007] 3)将步骤2)所述的沉淀依次用2~4倍重量的无水乙醇、丙酮分别洗涤，将洗涤 后的沉淀用2~4倍蒸馏水溶解，加入蛋白酶酶解1~3h，灭酶，得到酶解液；
[0008] 4)将酶解液经分子量为80000~200000的透析袋进行第一次透析24~72h，取 保留液经分子量为1500000~2000000的透析袋进行第二次透析24~72h，取第二次渗出 液浓缩，乙醇沉淀，离心得到沉淀；
[0009] 5)将步骤4)所述的沉淀依次用2~4倍重量的无水乙醇、丙酮分别洗涤，将洗涤 后的沉淀用2~4倍蒸馏水溶解，加入活性炭脱色，过滤，喷雾干燥，即为车前子多糖。
[0010] 上述步骤2)中，加入90~95v%的乙醇至混合液中醇含量为80~85v%。
[0011] 上述步骤3)中，所述蛋白酶的加入量为洗涤后的沉淀重量的1~2%。蛋白酶可 以将提取物中的大分子蛋白质酶解为多肽和氨基酸。
[0012] 步骤4)中，酶解液先经截留分子量为80000~200000的透析袋进行第一次透析， 小分子色素、多肽和氨基酸和蛋白酶将透过透析袋滤除，大大提高保留液的纯度；而将第一 次透析得到的保留液经截留分子量为1500000~2000000的透析袋进行第二次透析，分子 量低于1500000~2000000这个范围内的物质将滤出得到透析液。
[0013] 本发明提取的车前子多糖分子量上限为1500000~2000000,下限为80000~ 200000,其免疫促进作用远远超出普通车前子多糖。同时，本发明提取的车前子多糖纯度很 高，经HPLC检测，纯度高达99. 2 %以上，颜色为白色。
【具体实施方式】
[0014] 以下具体实施例对本发明作进一步阐述，但不作为对本发明的限定。
[0015] 实施例1
[0016] 1)车前子破碎，加入其20倍重量的水，回流提取2次，每次提取lh，过滤，收集滤 液备用；
[0017] 2)将滤液浓缩至60°C下相对密度为I. 1的浸膏，加入90v%的乙醇至混合液中醇 含量为SOv %，离心得沉淀；
[0018] 3)将步骤2)所述的沉淀依次用2倍重量的无水乙醇、丙酮分别洗涤，将洗涤后的 沉淀用2倍蒸馏水溶解，并加入经洗涤后的沉淀重量1%的蛋白酶酶解lh，灭酶，得到酶解 液；
[0019] 4)将酶解液以分子量为80000的透析袋进行第一次透析24h，取保留液以分子量 为1500000的透析袋进行第二次透析24h，取第二次渗出液浓缩，乙醇沉淀，离心得到沉淀；
[0020] 5)将步骤4)所述的沉淀依次用2倍重量的无水乙醇、丙酮分别洗涤，将洗涤后的 沉淀用2倍蒸馏水溶解，加入活性炭脱色，过滤，喷雾干燥，即为车前子多糖。经苯酚-硫酸 法检测，纯度高达99. 2%，颜色为白色。
[0021] 实施例2
[0022] 1)车前子破碎，加入其30倍重量的水，回流提取3次，每次提取3h，过滤，收集滤 液备用；
[0023] 2)将滤液浓缩至60°C下相对密度为1. 3的浸膏，加入95v%的乙醇至混合液中醇 含量为85v%，离心得沉淀；
[0024] 3)将步骤2)所述的沉淀依次用4倍重量的无水乙醇、丙酮分别洗涤，将洗涤后的 沉淀用4倍蒸馏水溶解，并加入经洗涤后的沉淀重量2%的蛋白酶酶解3h，灭酶，得到酶解 液；
[0025] 4)将酶解液以分子量为200000的透析袋进行第一次透析72h，取保留液以分子量 为2000000的透析袋进行第二次透析72h，取第二次渗出液浓缩，乙醇沉淀，离心得到沉淀；
[0026] 5)将步骤4)所述的沉淀依次用4倍重量的无水乙醇、丙酮分别洗涤，将洗涤后的 沉淀用4倍蒸馏水溶解，加入活性炭脱色，过滤，喷雾干燥，即为车前子多糖。经苯酚-硫酸 法检测，纯度高达99. 23 %，颜色为白色。
[0027] 实施例3
[0028] 1)车前子破碎，加入其25倍重量的水，回流提取2次，每次提取2h，过滤，收集滤 液备用；
[0029] 2)将滤液浓缩至60°C下相对密度为1. 2的浸膏，加入95v%的乙醇至混合液中醇 含量为85v%，离心得沉淀；
[0030] 3)将步骤2)所述的沉淀