一种缺血修饰白蛋白检测试剂及其检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于医学检验技术领域，具体涉及一种缺血修饰白蛋白检测试剂及其检测 方法。
【背景技术】
[0002] 缺血修饰白蛋白（ischemiamodifiedalbumin，IMA)是人血清白蛋白在氧自由基 作用下，其氨基酸末端结构发生改变，导致其与某些外源性金属钴、铜、镍结合能力减弱的 白蛋白。近年来，随着对缺血修饰白蛋白的深入研究，许多研究显示缺血修饰白蛋白是急性 心肌缺血的一种理想的生化标志物。与传统的急性心肌缺血标志物相比，缺血修饰白蛋白 (IMA)在缺血发作的短时间内血液中浓度就会升高，但此时心肌细胞的不可逆性损伤还未 发生，因此IMA更具早期诊断价值，能够辅助临床医生尽早明确心肌缺血的诊断，从而进 行早期干预和治疗。
[0003] 目前，IMA的测定方法一般采用白蛋白钴结合试验方法。由于白蛋白钴结合试验 的检测原理是依据IMA较正常白蛋白结合金属钴离子能力降低，在反应系统中加入一定量 的钴离子，并通过测定游离钴离子的浓度，推算出IMA的含量。由于该检测结果存在检测结 果不明显，检测结果不稳定的缺点。随着对白蛋白钴结合试验方法的深入研究，人们对白蛋 白钴结合试验方法进行了改造，在检测的过程中加入显色剂与游离钴反应产生颜色，用分 光光度计测定吸光度值大小，从而间接表示血清中IMA含量，以提高检测结果的明显性和 准确性。
[0004] 中国专利申请201210331744. 2公开了缺血修饰白蛋白组合测定试剂、测定方法 及试剂盒，该缺血修饰白蛋白组合测定试剂以二硫苏糖醇作为游离钴离子的显色剂，可以 提高检测结果的清晰度。但是，二硫苏糖醇容易受外源性金属离子干扰，而且二硫苏糖醇易 被空气氧化，稳定性差，难以保存，不利于该检测试剂的推广和应用。
[0005] 中国专利申请201310537922. 1公开了一种缺血修饰白蛋白检测试剂及检测方 法，该检测试剂以噻二唑偶氮二甲氨基苯酚作为游离钴离子的显色剂，噻二唑偶氮二甲氨 基苯酚可以有效避免Pd、Ni、Zn和Cu等金属离子的干扰，而且噻二唑偶氮二甲氨基苯酚具 有稳定、低毒、易于保存的优点，大大增强了试剂的稳定性。但是，该检测试剂的动力学曲线 不佳，线性范围狭窄，影响了实验的重现性和稳定性。
[0006] 因此，研究发开出一种重复性好、检测敏感度高和稳定性好的缺血修饰白蛋白检 测试剂是目前亟需解决的难题。
【发明内容】
[0007] 为了克服现有技术缺血修饰白蛋白检测试剂存在测定结果重复性差、检测敏感度 低和稳定性差的缺点，本发明的目的是提供一种缺血修饰白蛋白检测试剂及其检测方法， 以解决上述的问题。
[0008] 本发明提供的缺血修饰白蛋白检测试剂包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1包括 以下组分： 三羟甲基氨基甲烷缓冲液80-150mmol/L、氯化钴40-80mmol/L、三乙醇胺0.l-5mol/L和防腐剂 〇. 05-0. 3mol/L; 所述试剂R2包括以下组分： MES缓冲液 80-150mmol/L、1-亚硝基-2-萘酚 10-50mmol/L、三乙醇胺 0?l-5mol/L、谷 胱甘肽 2-10mmol/L和防腐剂 0. 05-0. 3mol/L。
[0009] 优选地，本发明提供的缺血修饰白蛋白检测试剂包括试剂R1和试剂R2,所述试剂 R1包括以下组分： 三羟甲基氨基甲烷缓冲液100mm〇l/L、氯化钴50mmol/L、三乙醇胺2mol/L和防腐剂 0.lmol/L； 所述试剂R2包括以下组分： MES缓冲液100mmol/L、l-亚硝基-2-萘酚35mmol/L、三乙醇胺2mol/L、谷胱甘肽 6mmol/L和防腐剂 0?lmol/L〇
[0010] 进一步地，所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液的pH值为7. 0-8. 0,所述三羟甲基氨基 甲烷缓冲液的pH值优选为7. 5。
[0011] 进一步地，所述MES缓冲液的pH值为7. 5-8. 5,所述的MES缓冲液的pH值优选为 8. 0,在碱性的环境下可以提高的1-亚硝基-2-萘酚溶解度，增加试剂检测的敏感性。
[0012] 进一步地，所述防腐剂为proclin300。proclin300具有广谱抗菌性和作用速度快 的优点，可以大大的延长检测试剂的保质期。
[0013] 本发明提供的MES缓冲液是2-吗啉乙磺酸（MES)缓冲液，2-吗啉乙磺酸的分子式 为C6H13N04S，CAS号为 4432-31-9。
[0014] 本发明提供的缺血修饰白蛋白检测试剂是以1-亚硝基-2-萘酚作为游离钴离子 的显色剂，1-亚硝基-2-萘酚对钴离子的检测敏感度高，可以检测到较低浓度的钴离子，可 以显著的提高检测试剂的准确性；同时，本发明的缺血修饰白蛋白检测试剂加入了三乙醇 胺作为稳定剂，可以加速钴离子与正常白蛋白结合的效果，在一定时间内，完全与正常白蛋 白集合，进一步提高试剂检测结果的准确性；而且该检测试剂还添加有谷胱甘肽还原剂，可 以进一步提高1-亚硝基-2-萘酚的稳定性，有利于该缺血修饰白蛋白检测试剂的保存。
[0015] 经试验证明，本发明提供的缺血修饰白蛋白检测试剂的具有钴离子检测敏感度 高、测定结果重复性好和稳定性好的优点，是一种理想的缺血修饰白蛋白的检测试剂。
[0016] 另外，本发明还提供了缺血修饰白蛋白检测试剂的检测方法，包括以下步骤：采用 全自动生化分析仪以两点终点法进行测定，将样品与试剂混合，经过5-10min，当反应达到 平衡点时，检测反应后颜色对光的吸收强度，以此计算样品的浓度。
[0017] 进一步地，所述试剂R1与试剂R2的体积比为6:1。
[0018] 进一步地，所述全自动生化分析仪的主波长为505nm，次波长为660nm〇
[0019] 本发明提供的缺血修饰白蛋白检测试剂的检测原理是：依据缺血修饰白蛋白结合 金属钴离子能力减弱的性质进行定量测定。正常对照的血清样品中白蛋白以活性形式存 在，加入氯化钴溶液后，钴离子即可与白蛋白N末端结合，溶液中存在的游离钴离子浓度较 低；而缺血个体的血清样品中含有较多的缺血修饰白蛋白，加入同样浓度的氯化钴溶液，由 于缺血修饰白蛋白与钴离子集合能力弱，溶液中存在较高浓度的游离钴离子，利用试剂中 1-亚硝基-2-萘酚与游离钴离子结合产生棕红色的络合物，缺血修饰白蛋白含量与颜色程 度呈正比，在505nm下检测吸光度，可间接对缺血修饰白蛋白进行定量测定。
[0020] 总之，与现有技术相比具有如下优势，本发明提供的缺血修饰白蛋白检测试剂钴 离子检测敏感度高，检测结果重复性好，稳定性好，而且价格便宜，易于保存，是一种理想的 缺血修饰白蛋白的检测试剂，有利于该缺血修饰白蛋白检测试剂的临床应用。
【具体实施方式】
[0021] 以下通过具体实施例进一步描述本发明，本发明不仅仅限于以下实施例。在本发 明的范围内或者在不脱离本发明的内容、精神和范围内，对本发明进行的变更、组合或替 换，对于本领域的技术人员来说是显而易见的，且包含在本发明的范围之内。
[0022] 实施例1、缺血修饰白蛋白检测试剂 缺血修饰白蛋白检测试剂包括试剂R1和试剂R2,所述试剂R1包括以下组分：pH值为7. 0的三羟甲基氨基甲烷缓冲液80mmol/L、氯化钴40mmol/L、三乙醇胺 0? lmol/L和proclin300 0? 05mol/L ; 所述试剂R2包括以下组分： pH值为7. 5的MES缓冲液80mmo