蒙药漏芦花指纹图谱建立方法以及质量评价方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及药物分析领域，具体设及中药材指纹图谱建立方法和药材质量评价方 法。
【背景技术】
[0002] 随着蒙药产业的快速发展，资源不合理利用和环境变迁等原因带来的野生资源日 益减少的问题凸显，严重制约了蒙药产业的健康发展。蒙药材的自采自用也很普遍，目前市 场上有一些蒙医专用的道地产药材并没有商品流通，有的有市场流通的商品药材，但品种 混乱，临床使用情况不清，运就给合理有效的使用蒙药材造成很大困扰。漏芦花就是其中一 种，其同名异物现象非常普遍，多被误用同科其他植物头状花序入药。所W选择一种能快 速、高效、全面的反映蒙药材质量信息的手段是非常必要和重要的，而指纹图谱技术就是符 合运些特点的技术手段，且化学成分指纹图谱亦可鉴别饮片的品质，也可辅助对品种鉴定， 能基本反映中药全貌，实现对中药内在质量的控制。
[0003] 蒙药漏芦花为菊科漏芦属植物祁州漏芦I^iaponticum unif lo;rum(L. )DC.的干燥 花。蒙药名：洪古尔-珠尔，分布于我国内蒙古、东北、河北、陕西、甘肃、青海、山西、河南、四 川、山东等地。入蒙药可杀"粘"、止刺痛、清热、解毒、解表等，主治感冒、屯、热频疾、血热及传 染性热症等。漏芦花为蒙医临床常用药，收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》(蒙药分 册），但无鉴别、检查、含量测定项，《中国药典》2015版中只有关于中药漏芦(祁州漏芦的根） 的质量控制方法，但并不适用于漏芦花。运不仅制约了漏芦花资源的有效利用，也无法保证 用药的安全性和有效性。
[0004] 本发明首次建立了蒙药漏芦花指纹图谱，标识了 13个共有峰中的8个峰。研究所用 的HPLC法操作简单，分离度高，重现性好。建立的标准指纹图谱典型、全面、有代表性，能真 实、客观地反映漏芦花所含化学成分的类型、数量和相对含量。
【发明内容】
[0005] 本发明提出一种漏芦花指纹图谱的建立方法，包括W下步骤：
[0006] 1)供试品溶液的制备：取药材粉末，置lOOmL具塞锥形瓶中，加70%甲醇，超声提 取，放置到室溫后，再称定重量，用溶剂补足减失的重量，滤过，取滤液W0.45WI1微孔滤膜滤 过，备用；
[0007] 2)将供试品溶液注入高效液相色谱仪中，获得指纹图谱，采用的色谱条件为:色谱 柱:十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱;流动相：乙腊(A)-0.2%憐酸水溶液(B)，采用梯度洗脱 85%B(0min)~78%B(12min)~74%B(13min)~60%B(60min);检测条件:DAD 检测器，检测 波长230~400nm;柱溫：20~40°C ;进样量：5~30yL。
[000引作为优选，色谱柱采用规格为250mmX4.6mm，5wIl的YMC-Pack0DS-A色谱柱或者岛 津1116的311005-5?册1(：色谱柱。
[0009] 进一步的优选是，步骤1)中，取药材粉末约0.2g，精密称定，加入70%甲醇25mL，超 声提取40min，放置到室溫后，再称定重量，用溶剂补足减失的重量，滤过，取滤液wo.45皿 微孔滤膜滤过。
[0010] 更优选地，流速为1.2ml/min;采用DAD检测器，检测波长254nm;柱溫25 °C ;进样量 10化。
[0011] 本发明还提供一种利用指纹图谱评价黄花列当药材质量的方法，包括W下步骤： 步骤一:建立标准指纹图谱，包括:a)供试品溶液的制备:分别制备11个不同批次的漏芦花 样品供试品溶液，取样品粉末，置lOOmL具塞锥形瓶中，加70%甲醇，超声提取，放置到室溫 后，再称定重量，用溶剂补足减失的重量，滤过，取滤液W0.45M1微孔滤膜滤过，备用;b)对 照品溶液的制备:称取1)蚁皮酱酬、2)搬皮素-3-0-a-k鼠李糖巧、3)芹菜素-7-0-β-0-葡萄 糖醒酸巧、4)山奈酪-3-0-a-k鼠李糖巧、5)泥胡木脂素 Β巧、6)木犀草素、7)芹菜素、8)5,7， 4'-Ξ径基-3'-甲氧基黄酬共8种对照品，用甲醇溶解定容，制成一定浓度的单一对照溶液， 微孔滤膜0.45WI1滤过，备用;C)先后将各供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪中， 分别获得指纹图谱，色谱条件为:色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱;流动相：乙腊(Α)- 0.2%憐酸水溶液(8)，采用梯度洗脱85%6(0111111)~78%6(12111111)~74%8(13111111)~60%6 (60min);检测条件:DAD检测器，检测波长230~400皿;柱溫:20~40°C ;进样量:5~30化;d) 用相似度评价软件计算11个样品的相似度，从中确定一个相似度最高的作为标准指纹图 谱。步骤二：用上述相同的方式获得一个待评价样品的指纹图谱;步骤Ξ:用前述相似度评 价软件评价所述待评价样品指纹图谱和所述标准指纹图谱的相似度，相似度大于0.9则判 定所述待评价样品质量符合要求。
[0012] 进一步地，所述标准指纹图谱包含W下13个共有峰，各峰的相对保留时间分别为： 5.40,11.24,16.47,17.46,18.53,18.91,20.92,22.62,23.01,25.43,27.66,33.59,35.22〇
[0013] 更进一步地，其中，所述13个共有峰的相对峰面积分别为0.164,1.280,0.378， 0.115,0.061,0.617,0.056,0.251,0.446,0.491,0.268,0.038。
[0014] 更进一步地，用所述共有峰中标识出的8个对照品对应峰的峰面积，与待测样品对 应的峰面积进行比较，后者峰面积越大，说明样品质量越好。
[0015] 根据本发明的供试品溶液利记博彩app操作溶液，具有较高的精密度、稳定性、和重现 性，系统适用性强，可适用于该属药材的制作。所建立的漏芦花指纹图谱分析方法灵敏度 高，重现性好;所获得的标准指纹图谱具有典型性、代表性，能较全面的反映漏芦花药材中 所含的化学成分种类与数量，进而对药材的整体评价和描述提供一个更为全面的依据。本 发明建立的漏芦花药材高效液相指纹图谱技术，弥补了现今尚属空白的漏芦花药材质量控 制的方法，使漏芦花药材的质量控制技术更加科学全面。
【附图说明】
[0016] 图1是根据本发明的方法获得的标准指纹图谱；
[0017] 图2和图3显示8个单一对照品与标准指纹图谱的对照图谱；
[0018] 图4是11批漏芦花药材HP1X指纹图谱叠加图。
【具体实施方式】
[0019] 供试品溶液的制备
[0020] 该环节中，取干燥的漏芦花粉碎，取药材粉末，精密加入计算量的甲醇溶液，超声 处理，放置至室溫，溶剂补足失重，摇匀，滤过，取续滤液，过0.45皿微孔滤膜，作为供试品溶 液。
[0021] 本发明中，使用甲醇水溶液作为供试品溶剂，甲醇溶液的浓度范围可W在50~ 100 %之间，优选在60~80 %之间，最优选70 %的甲醇溶液。
[0022] 优选将漏芦粉碎，使用时过65目筛，提取方法可W是回流或者超声处理，优选通过 超声提取，提取时间可W是30~60min，优选提取40min。
[0023] 本发明中，取样的量可W在0.1~0.4g的范围，在采用上述最优选方式的情况下， 优选取样0.2g，加70 %甲醇25ml，称定重量，超声处理40min，放置到室溫后，再称定重量，用 溶剂补足减失的重量，滤过，取续滤液W0.45WI1微孔滤膜滤过，得到供试品溶液。
[0024] 因此，本发明最优选的漏芦花供试品溶液的制备方法为:取药材粉末约0.2g，精密 称定，置lOOmL具塞锥形瓶中，精密加入70 %甲醇25mL，超声提取40min，放置到室溫后，再称 定重量，用溶剂补足减失的重量，滤过，取滤液W〇.45ym微孔滤膜滤过，即得。采用该最优选 的制备方法，在色谱图的峰数、峰高、峰面积和分离度方面表现最佳。
[00巧]对照品溶液的制备
[0026] 精密称取各对照品约0.5mg，分别置5mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇 匀，制成对照品溶液，进样前用〇.45μπι微孔滤膜滤过。对照品均为漏芦花化学成分研究中得 到并经光谱解析鉴定结构。如下8种：
[0027] 1)蚁皮酱酬
[002引 2)搬皮素-3-0-日寸-鼠李糖巧 [00巧]3)芹菜素-7-0-β-0-葡萄糖醒酸巧
[0030] 4)山奈酪-3-0-日寸-鼠李糖巧
[0031] 5)泥胡木脂素 Β巧
[0032] 6)木犀草素
[0033] 7)芹菜素
[0034] 8)5,7,4'-Ξ径基-3'-甲氧基黄酬 [003引色谱条件
[0036] 本发明中使用的色谱条件优选为:色谱柱是十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱;流动 相是乙腊(Α)-0.2%憐酸水溶液(Β)，采用梯度洗脱85%B(0min)~78%B(12min)~74%Β (13min)~60%B(60min);采用DAD检测器，检测波长230~400nm;柱溫20~40°C;进样量5~ 30化。
[0037] 在本发明的最佳实施例中，确定漏芦花HP1X指纹图谱分析的最优色谱条件为:色 谱柱：YMC-化ck 0DS-A色谱柱（250mmX4.6mm，5皿）或者岛津Inertsil 0DS-SP HPLC色谱 柱；流动相：乙腊-〇.2%憐酸水溶液，梯度洗脱：85%8(〇111111)~78%8(12111111)~74%6 (13min)~60%B(60min);流速：1.2血/min;检测波长254nm;柱溫25°C;进样量20yL。采用该 最佳流动相系统和洗脱比例，色谱图中峰信息全面，峰形好，基线平稳。采用254nm的检测波 长可W获得最佳的各色谱图中的峰数、峰高、峰面积和分离度。流速为1.2mL/min时色谱图 分离度较好，且在不影响分离度和峰数的情况下洗脱时间更短。
[00；3引共有峰的标定
[0039] 取不同产地采集的11批漏芦花药材样品，按照上述已经建立的操作方法分别进样 分析，得到各批次药材的HP1X指纹