高效液相色谱法检测卷烟烟气所含角鲨烯的样品液制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及卷烟烟气中成分的检测技术领域，更具体地，设及一种高效液相色谱 法检测卷烟烟气所含角整締的样品液制备方法。
【背景技术】
[0002] 角整締最初是从整鱼的肝油中发现的，1914年被命名为Squalene，其化学名称为 2,6,10,15,19,23-六甲基一2,6,10,14,18,22-二十四碳六締，属开链Ξ祗类化合物。
[0003] 角整締具有提高人体内超氧化物歧化酶(SOD)活性、增强机体抗氧化性和免疫能 力、改善性功能、抗衰老、抗疲劳、抗肿瘤等多种生理功能，是一种无毒性的具有防病治病作 用的生物活性物质。最近研究发现角整締对人体还具有解毒作用，可移除组织中的脂溶性 毒素。已有研究表明：在烟丝中添加一定量的角整締，可降低烟气中几种有害物质和自由基 含量，表明角整締具有独特降害作用，目前开发利用角整締已成为科技界和烟草业研究的 执占。 "、、'、、、〇
[0004] 2014年4月，国家烟草专卖局下发关于加快卷烟降焦减害技术成果推广应用的通 知（国烟办综[2014]218号），提出要加大卷烟减害技术重大专项研究成果的应用推广力度， 要采取针对性技术措施加快卷烟降焦减害步伐。为了配合国家局加快卷烟降焦减害步伐的 重大决策，本申请人在完成中国烟草总公司2013年度科技面上项目《广西主流烟气天然抗 氧化剂角整締的生态累积与减害研究》（中烟办[2013]149号)研究基础上，迫切需要建立一 种可行的适于标准的主流烟气角整締含量的检测方法。
[0005] 但是，目前国内外还没有可参考的烟气中尤其是主流烟气中角整締定性和定量的 检测方法，因此，在烟草行业建立烤烟中角整締定性和定量的检测方法具有前瞻性，也是十 分必要的。而在烟气中角整締的检测中，良好的样品前处理方法对获得准确科学的检测结 果起到关键性作用。在确定的检测条件下，采用不同提取剂提取样品中角整締，其提取效 率、提取操作用时等因素都是必须考虑的重要因素，各个因素之间又是相互影响的关系，目 前未见基于高效液相色谱法检测烟叶中角整締的样品前处理研究报道。
【发明内容】
[0006] 本发明要解决的技术问题是填补现有烟气中角整締的检测技术不足，尤其是适于 高效液相色谱法检测烟气中角整締的样品前处理方法的不足，提供一种基于高效液相色谱 法检测卷烟烟气所含角整締的样品液制备方法。
[0007] 本发明的技术方案通过W下技术方案予W实现：
[000引提供一种高效液相色谱法检测卷烟烟气所含角整締的样品液制备方法，包括W下 步骤：
[0009] S11.收集烟气固粒相物并提取:抽吸卷烟，采用滤片收集烟气固粒相物；
[0010] S12.提取:将收集了烟气固粒相物剑桥滤片放入锥形瓶中，加入提取剂，常溫下振 荡提取，得提取液；
[0011] S13.净化:取步骤S12所得提取液，经过再处理后得到的溶液再经过柱，丙酬洗脱， 收集洗脱液，旋转蒸发至干，用色谱乙腊定容，过0.22WI1滤膜即得待测样品液；
[001。 其中，步骤S12所述提取剂为丙酬；
[0013] 步骤S13所述再处理指的是将步骤S12所得提取液旋转蒸发至干，用正己烧溶解， 再用正己烧洗涂；
[0014] 步骤S13所述过柱是采用硅胶和N-丙基乙二胺复合固相萃取柱。
[0015] 优选地，步骤S11所述抽吸卷烟是按照GB/T 16450标准操作。步骤S11所述滤片为 Φ 92mm的剑桥滤片。
[0016] 优选地，步骤S12所述振荡提取是用摇床m 30转/min振荡20min。
[0017] 优选地，步骤S13所述洗涂的次数为3次。
[0018] 优选地，步骤S13所述硅胶和N-丙基乙二胺复合固相萃取柱的装柱方法为称取 0.1评SA和0.1 g硅胶装柱，上方加1. Og无水硫酸钢。
[0019] 基于所述样品前处理方法，本发明同时提供一种高效液相色谱法检测主流烟气中 所含角整締的方法，W甲醇和乙腊为流动相，采用填有粒径扣m的高效固定相的柱色谱分离 技术，精确吸取10化待测样品液注入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于 210nm波长处检测角整締的吸收值，采用外标法，根据吸收峰面积计算其含量。
[0020] 所述高效液相色谱法检测主流烟气中所含角整締的方法包括W下步骤：
[0021] S1.样品经前处理得到样品液；
[0022] S2.配制标准溶液，建立标准曲线；
[002引S3.检测:取样品液液注入高效液相色谱仪检测；
[0024] S4.采用外标法，根据吸收峰面积计算角整締含量。
[0025] 所述检测的检测条件为：
[0026] (1)高效液相色谱仪HPLC(AgilentllOO)配紫外检测器；
[0027] (2)色谱柱:C18 柱，5ym，4.6X250mm;
[0028] (3)柱溫:20°(：;
[0029] (4)流动相类型：甲醇：乙腊(V:V = 70:30);
[0030] (5)流动相流速:0.8mL/min;
[0031] (6)检测波长为：210nm;
[0032] (7)进样量：10yL。
[0033] 步骤S2所述配制标准溶液的方法是准确称取O.lg角整締标准品，精确至O.OOOlg， 用乙腊(色谱纯)溶解后定容至lOOmL配制成lOOOmg/L的角整締标准溶液，充分振荡摇匀。所 配标准溶液置于4°C保存，待用。
[0034] 步骤S2所述角整締标准曲线的建立的方法是:采用系列稀释法，分别配制成浓度 为0.002，0.01，0.05，0.2，0.5mg/mL的角整締标准溶液于高效液相色谱进样检测；W进样浓 度为横坐标，峰面积为纵坐标建立标准曲线，求出角整締浓度与相应峰面积的线性回归方 程。
[0035] 本发明适用于卷烟主流烟气中角整締的检测。
[0036] 本发明具有W下有益效果：
[0037] 本发明针对卷烟烟气建立了一种适于高效液相色谱法检测烟叶中角整締的样品 前处理方法，采用丙酬作为提取溶剂，旋转蒸发至干后用正己烧溶解和洗涂，保障了较高的 提取效率。再经采用硅胶和N-丙基乙二胺复合吸附剂科学净化，很好地去除杂质。基于所述 样品前处理方法，可建立烟气中角整締的高效液相色谱检测方法，色谱峰分离较好，具有准 确、快速、高灵敏、重现性好、回收率高等优点。
【附图说明】
[003引图1角整締标准曲线图。
[0039] 图2角整締标准样品色谱图（Img/L角整締标样，峰面积= 41.9)。
[0040] 图3角整締标准样品色谱图（5mg/L角整締标样，峰面积= 213.3)。
[0041] 图4丙酬提取液未添加角整締空白样品色谱图。
[0042] 图5.丙酬提取液添加40mg/kg(换算为烟丝含量)角整締样品色谱图。
[0043] 图6氯仿提取液未添加角整締空白样品色谱图。
[0044] 图7氯仿提取液添加40mg/kg(换算为烟丝含量)角整締样品色谱图。
[0045] 图8未经净化处理效果色谱图（空白对照）。
[0046] 图9未经净化处理效果色谱图（添加40mg/kg角整締样品）。
[0047] 图10经PSA柱净化后样品的色谱图（空白对照）。
[004引图11经PSA柱净化后样品的色谱图（添加40mg/kg角整締样品）。
[0049] 图12用PSA和硅胶复合柱净化后样品的色谱图（空白对照）。
[0050] 图13用PSA和硅胶复合柱净化后样品的色谱图（添加40mg/kg角整締样品）。
[0051] 图14丙酬提取液直接过柱处理后色谱图。
[0052] 图15丙酬提取液再经正己烧溶解后过柱处理后色谱图。
[00对图16 C8柱检测样品的色谱图（流动相甲醇：乙腊，5mg/kg角整締标样）。
[0054]图17 C8柱检测样品的色谱