一种分析/分离依折麦布及其光学异构体的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属设及一种高效液相色谱法，尤其是一种分析分离依折麦布及其光学异构 体的高效液相色谱法。
【背景技术】
[0002] 依折麦布为胆固醇抑制吸收剂，适用于治疗原发性高胆固醇血症，纯合子家族性 高胆固醇血症化oFH)和纯合子谷酱醇血症(或植物酱醇血症），其分子式为C2边23F2NO4，化学 名为1-(4-氣苯基)-3(R)-[3-(4-氣苯基)-3(5)-?丙基]-4(5)-(4-?苯基)-2-叮下晚(氮 杂环下烧)酬一水合物，结构式为
[0003]
[0004] 该分子中含有3个手性中屯、，存在多个光学异构体，对于依折麦布的光学异构体杂 质，在药物合成过程当中是需要进行质量控制的。含手性碳原子的光学异构体的分离一直 是手性药物合成和制剂过程中质量控制的难点，实现依折麦布及其光学异构体的分离在依 折麦布药物的合成和制剂过程的质量控制方面具有现实意义。本发明旨在介绍一种方法来 分析与分离依折麦布及其(R，S，R)、（S，S，R)、（S，S，S)型光学异构体。经文献检索，未见(R， S，R)、（S，S，R)、（S，S，S)型光学异构体检测方法的报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种分析分离依折麦布及其(3,5，1〇、（5,5，1〇、（5,5,5)型 光学异构体杂质的高效液相色谱法，从而实现依折麦布与其(R，5，1〇、（5,5，1〇、（5,5,5)型 光学异构体杂质的分离测定。
[0006] 发明人发现，W纤维素类手性柱，W正相混合溶剂为流动相，可W将依折麦布及其 (R，S，R)、（S，S，R)、（S，S，S)型光学异构体进行有效分离，从而可W准确控制依折麦布的质 量。本发明的方法能简单、快速、准确地分析分离依折麦布及其(R，S，R)、（S，S，R)、（S，S，S) 型光学异构体杂质。
[0007] 所述高效液相色谱法（简写为HPLC)分析/分离依折麦布及其(R，S，R)、（S，S，R)、 (S，S，S)型光学异构体的方法，其特征在于，采用W纤维素类手性柱，W正相混合溶剂为流 动相的正相色谱法进行分离。
[0008] 进一步地，所述纤维素类手性柱是大赛踰(DaiceL)的AD-H纤维素类手性柱，柱长 250mm、内径4.6mm，填料粒径如m;可W获得更好的分析分离效果。
[0009] 进一步地，本发明的正相溶剂选用含有正己烧和异丙醇的混合溶剂。
[0010] 本发明的方法中的流动相选用体积比例为60:40~95:5正己烧和异丙醇的混合溶 剂。进一步优选地，所述的含有正己烧和异丙醇的混合溶剂中，正己烧和异丙醇的体积比例 为80:20。
[0011] 本发明所述方法中的一种实施方式，至少包括W下步骤：
[0012] (1)将含有依折麦布和/或其(3,5，10、（5,5，10、（5,5,5)型光学异构体的样品加正 相混合溶剂制成溶液I;
[0013] (2)设置液相色谱仪的参数为:流动相流速为0.4~1.5mL/min，检测波长为243皿， 色谱柱柱溫箱为20~40°C ;
[0014] (3)取步骤（1)所得溶液I注入液相色谱仪，分析或分离出依折麦布及其(R，S，R)、 (5,5，1〇、（5,5,5)型光学异构体。
[0015] 优选地，所述溶液I中，依折麦布及其(R，S，R)、（S，S，R)、（S，S，S)型光学异构体的 浓度为 O.lg/L ~1.5g/L。
[0016] 优选地，所述步骤(2)中色谱柱柱溫箱为为25°C。
[0017] 优选地，步骤(3)中注入液相色谱仪的溶液I的量为2~50yL。
[0018] 优选地，依折麦布(R，S，R)型光学异构体、依折麦布(S，S，R)型光学异构体、依折麦 布(S，S，S)型光学异构体中任意一种与依折麦布的分离度>1.5。
[0019] 本发明所述的分析分离方法中的一种实施方式，可按照W下方法实现：
[0020] (1)取依折麦布样品适量，用异丙醇溶解样品，配制成每ImL含依折麦布0.5~ 1.5mg的样品溶液。
[0021] (2)设置流动相流速为0.4~1.5mL/min，检测波长为24化m，色谱柱柱溫箱为20~ 40°C，色谱柱柱溫的最佳溫度为25°C。
[0022] (3)取（1)的样品溶液2~50化注入液相色谱仪，完成依折麦布及其(R，S，R)、（S，S, R)、（S,S,S)型光学异构体的分析与分离。
[0023] 其中；
[0024] 色谱柱:AD-H(DaiceL，250mm X 4.6mm，5皿)纤维素手性色谱柱；
[00剧流动相:正己烧-异丙醇(体积比80:20);
[0026] 柱溫：25°C;
[0027] 检测波长：243nm;
[002引流速：1.0mL/min;
[0029] 进样体积:20yL。
[0030] 本发明采用纤维素类AD-H(DaiceL，250mmX4.6mm，5皿)手性色谱柱，能够有效的 分析分离依折麦布及其光学异构体(杂质）；选择流动相溶解样品，确保了溶液的稳定性，且 溶剂峰对(R，S，R)、（S，S，R)、（S，S，S)型光学异构体测定无干扰;选择进样体积20化，柱溫为 25Γ，提高了色谱峰的对称性。本发明解决了含依折麦布及其光学异构体的原料的分析与 分离问题，从而确保了依折麦布的质量可控。
【附图说明】
[0031] 图1是实施例1的高效液相色谱图：1号峰为依折麦布(R，S，R)型光学异构体;2号峰 为依折麦布(S，S，R)型光学异构体;3号峰为依折麦布，4号峰为依折麦布(S，S，S)型光学异 构体。
[0032] 图2是实施例2的高效液相色谱图：图2(a)中1号峰为依折麦布(R，S，R)型光学异构 体;2号峰为依折麦布（S，S，R)型光学异构体;3号峰为依折麦布。图2(b)中1号峰为依折麦 布，2号峰为依折麦布(S，S，S)型光学异构体。
[0033] 图3是实施例3的高效液相色谱图：图3(a)中1号峰为依折麦布(R，S，R)型光学异构 体，2号峰为依折麦布（S，S，R)型光学异构体，3号峰为依折麦布；图3(b)中1号峰为依折麦 布，2号峰为依折麦布(S，S，S)型光学异构体。
[0034] 图4是实施例4的高效液相色谱图：图4(a)中1号峰为依折麦布(R，S，R)型光学异构 体，2号峰为依折麦布（S，S，R)型光学异构体，3号峰为依折麦布；图4(b)中1号峰为依折麦 布，2号峰为依折麦布(S，S，S)型光学异构体。
[0035] 图5是实施例5的高效液相色谱图：图5(a)中1号峰为依折麦布(R，S，R)型光学异构 体，2号峰为依折麦布（S，S，R)型光学异构体，3号峰为依折麦布；图5(b)中1号峰为依折麦 布，2号峰为依折麦布(S，S，S)型光学异构体。
【具体实施方式】：
[0036] 下面结合实施例详述本申请，但本申请并不局限于运些实施例。
[0037] 实施例1 [00測仪器与条件
[0039] 色谱柱：AD-H(DaiceL，250mmX4.6mm，5皿）；
[0040] 流动相:正己烧-异丙醇(体积比80:20);
[0041]柱溫：25°C;
[0042] 流速：1.0mL/min;
[0043] 进样体积:
[0044] 检测波长：243nm;
[0045] 实验步骤
[0046] 分别取依折麦布对照品和依折麦布(R，S，R)、（S，S，R)、（S，S，S)型光学异构体对照 品适量，加流动相溶解并定量稀释制成每ImL中约含依折麦布0.5mg，异构体(R，S，R)、（S，S， R)、（S，S，S)各扣g的混合溶液，作为系统适用性溶液。取依折麦布适量，加流动相溶解并稀 释制成每ImL约含0.5mg的溶液，作为供试品溶液;精密量取供试品溶液ImL，置1 OOmL量瓶 中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。量取系统适用性溶液20化，注入液相色谱 仪，记录色谱图，依折麦布峰和光学异构体峰的分离度大于1.5。分别取供试品溶液和对照 溶液20化，按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图。按自身低浓度对照法计算各光 学异构体的含量。
[0047] 结果见附图1，图中1号峰为依折麦布(R，S，R)型光学异构体，保留时间15.8min左 右;2号峰为依折麦布(S，S，R)型光学异构体，保留时间16.9min左右;3号峰为依折麦布，保 留时间21.0min左右;4号峰为依折麦布(S，S，S)型光学异构体，保留时间29.4min左右。可W 看出在该条件下依折麦布主峰和(S，S，R)型及(S，S，S)型光学异构体峰均完全分离开来。 [004引实施例2 [00例仪器与条件
[0化0]色谱柱:AD-H(DaiceL，250mmX 4.6mm，5皿）；
[0化1 ]流动相:正己烧-异丙醇(体积比75:25);
[0化2] 柱溫：25。。
[0053]流速：1.0mL/min;
[0化4] 进样体积
[0化5] 检测波长：243nm;
[005引实验步骤
[0057] 分别取依折麦布对照品和依折麦布(R，S，R)、（S，S，R)、（S，S，S)型光学异构体对照 品适量，加流动相溶解并定量稀释制成每ImL中约含依折麦布0.5mg、异构体(R，S，R)、（S，S， R)、（S，S，S)各扣g的混合溶液，作为系统适用性溶液。取依折麦