二对甲苯磺酸缘生替尼原料药中有关物质的检测方法

二对甲苯磺酸缘生替尼原料药中有关物质的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及分析化学技术领域，尤其涉及二对甲苯磺酸缘生替尼原料药中有关物 质检测方法。
【背景技术】
[0002] (N-(3-氯代-4-(3-氟代苄氧基）苯基)-6-(3-(4-甲基-4-氧基-1-氮-4-磷杂环己 烷-1-基)丙-1-炔基)喹唑啉-4-胺，双4-甲基苯磺酸盐），又名二对甲苯磺酸缘生替尼，是近 年来研发出的I型受体蛋白激酶抑制剂的包含磷取代的新喹唑啉衍生物。可用于治疗哺乳 动物中与蛋白激酶活性异常相关的疾病，如癌症或炎症。
[0003] 二对甲苯磺酸缘生替尼作为一种新研发出的药物，为了保证其质量及用药的安全 性，在生产和使用的过程中，都需要对原料药中的有效成分含量、有关物质种类及含量、残 留溶剂、微生物情况进行检测和分析。
[0004] 有关物质主要是在生产过程中带入的起始原料、中间体、聚合体、副反应产物，以 及贮藏过程中的降解产物等。有关物质研究是药品质量研究中关键性的项目之一，其含量 是反映药品纯度的直接指标。对药品的纯度要求，应基于安全性和生产实际情况两方面的 考虑。
[0005] 二对甲苯磺酸缘生替尼原料药中主要的有关物质如表1所示：
[0006] 表1二对甲苯磺酸缘生替尼原料药中主要的有关物质
[0007]
[0008] 目前尚未有关于二对甲苯磺酸缘生替尼中有关物质检测方法的报道。因此，应当 开发检出限、定量限低;灵敏度、专属性强;精密度、准确度高的二对甲苯磺酸缘生替尼原料 药中有关物质的测定方法。

【发明内容】

[0009] 有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供检出限、定量限低；灵敏度、专属性 强;精密度、准确度高的二对甲苯磺酸缘生替尼原料药中有关物质的测定方法。
[0010] 本发明提供的二对甲苯磺酸缘生替尼原料药中有关物质的检测方法，将二对甲苯 磺酸缘生替尼原料药溶解，以甲醇为流动相A，以乙酸铵的水溶液为流动相B，以高效液相色 谱检测获得色谱图，根据色谱图获得二对甲苯磺酸缘生替尼原料药中有关物质的含量。
[0011] 本发明提供的二对甲苯磺酸缘生替尼原料药中有关物质的检测方法是通过高效 液相色谱法进行的。利用高效液相色谱(HPLC)对物质进行定量检测是目前常用的检测方 法，在面对需要对二对甲苯磺酸缘生替尼原料药中有关物质的含量进行定量分析时，采用 高效液相色谱是一种快速有效的方式。但是，现有技术中，并没有报道如何采用HPLC对二对 甲苯磺酸缘生替尼中的有关物质进行定量检测，而当采用HPLC对一种新的物质进行检测时 需要对该方法进行系统适用性、专属性、精密度、耐用性等多方面的鉴定，具体标准为：
[0012] 系统适用性:杂质与主峰或者已知杂质与杂质之间的分离度不小于1.5,未知杂质 与未知杂质之间的分离度不小于1.2
[0013] 专属性:在酸、碱、氧化、高温、光照降解试验的图谱中，主峰的纯度因子应大于阈 值。
[0014] 线性及范围：回归系数r: 2 0.99,线性范围：至少在杂质质量标准限度的50 %~ 150%内。
[0015] 重复性:配制6个供试品溶液，每个溶液进2针，用对照品溶液计算主成份含量，要 求6个结果的RSD小于限度的50%。
[0016] 中间精密度：由不同分析员，使用不同的仪器，在不同日期对同一批样品进行检 测。要求6份样品的测定结果RSD小于限度的50%。
[0017] 准确度:加标回收率80.0%~120.0%。
[0018]耐用性:主要考虑溶液稳定性:供试品溶液在24h内稳定，并且要求检测条件的微 小变化对主峰含量的测定影响不大，分离度、理论塔板数均符合要求。
[0019] 为了提高检测效果，本发明提供的方法在进行高效液相色谱检测时采用梯度洗 脱。梯度洗脱是在一个分析周期内程序控制流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度和pH值 等，用于分析组分数目多、性质差异较大的复杂样品。采用梯度洗脱可以缩短分析时间，提 高分离度，改善峰形，提高检测灵敏度，但是常常引起基线漂移和降低重现性。
[0020] 在本发明的实施例中，高效液相色谱的洗脱程序为:0~20min，甲醇体积分数由 30% ±2%至73% ±2% ;20min~30min，甲醇体积分数为73% ±2% ;30min~40min，甲醇体 积分数由73% ±2%至80% ±2% ;40min~50min，甲醇体积分数为80% ±2%。
[0021] 在一些实施例中，高效液相色谱的洗脱程序为:0~20min，甲醇体积分数由30%至 73%;2〇111；[11~30111；[11，甲醇体积分数为73%;30111；[11~40111；[11，甲醇体积分数由73%至80%; 40min~50min，甲醇体积分数为80%。
[0022] 液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要 求流动相对样品具有一定的溶解能力且与样品不产生化学反应，其黏度要尽量小，以便得 到好的分离效果;且流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用紫外检测器，则应 使用对紫外吸收较低的溶剂配制。其沸点不可以太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进 行。对于二对甲苯磺酸缘生替尼而言，以甲醇和乙酸铵水溶液做为流动相能够保证适中的 出峰时间，使相关物质分离良好。
[0023] 在本发明的实施例中，乙酸铵水溶液中乙酸铵的浓度为0.005mol/L~0.015mol/ L〇
[0024] 在一些实施例中，乙酸铵水溶液中乙酸铵的浓度为0.01mol/L。
[0025] 流动相的流速过高会降低塔板数，而塔板数的降低会导致样品分离度的降低。
[0026] 在本发明的实施例中，流动相的流速为0.9mL/min~1. lmL/min。
[0027] 在一些实施例中，流动相的流速为1 .OmL/min。
[0028] 对柱温的选择需考虑待分离物质本身的特性，柱温影响流动相对待测物质的溶解 度也会影响柱压。一般情况下，提高柱温有利于提高分离度，但温度过高会导致柱压过低， 不利于物质的检出。
[0029]在本发明的实施例中，高效液相色谱检测的柱温为35°C~45°C。
[0030]在一些实施例中，高效液相色谱检测的柱温为40°C。
[0031] 二对甲苯磺酸缘生替尼在240nm处有最大吸收，在氧化破坏中，多数杂质在波长为 240nm左右有最大吸收或者在该处有强吸收。因此，作为优选，设置高效液相色谱检测的波 长为 238nm ~242nm。
[0032] 在一些实施例中，高效液相色谱检测的波长为240nm。
[0033] 对本发明提供的方法而言，二对甲苯磺酸缘生替尼的极性，选择C18色谱柱。色谱 柱的尺寸会对分离结果产生影响，其内径会对流动相的流速产生影响，长度较短的色谱柱 运行时间短，柱压较低;长度较长的色谱柱分辨率稿，但运行时间增长。
[0034]在本发明的实施例中，高效液相色谱检测的色谱柱为Waters Symmetry C18柱。
[0035] 在一些实施例中，色谱柱的尺寸为250mmX4.6mm，5μηι。
[0036] 在本发明的实施例中，溶解的溶剂为体积分数为70%的甲醇水溶液。
[0037]在本发明的实施例中，高效液相色谱检测的进样量为10yL。
[0038] 在一些实施例中，高效液相色谱仪检测的运行时间为25min。
[0039] 在一些实施例中，溶解至二对甲苯磺酸缘生替尼原药的浓度为100yg/mL。
[0040] 在本发明的实施例中，二对甲苯磺酸缘生替尼原料药中有关物质的含量的获得采 用外标法。
[0041] 以本发明提供的方法检测二对甲苯磺酸缘生替尼原料药中有关物质，不仅能够检 测出常见的杂质A、B、C，还能检测出一些未知杂质。各有关物质的保留时间如表2所示： [0042]表2有关物质保留时间
[0044]本发明提供的二对甲苯磺酸缘生替尼原料药中有关物质的检测方法，将二对甲苯 磺酸缘生替尼原料药溶解，以甲醇为流动相A，以乙酸铵的水溶液为流动相B，以高效液相色 谱检测获得色谱图，根据色谱图获得二对甲苯磺酸缘生替尼原料药中有关物质的含量。采 用本发明提供的方法，二对甲苯磺酸缘生替尼与最近的未知杂质B的分离度为5.8,已知杂 质A与未知杂质的分离度为2.4。空白溶液，缘生替尼杂质峰不影响缘生替尼的检查，在酸、 碱、氧化、高温、光照降解试验的图谱中，主峰的纯度因子均大于阈值。对杂质A、B、C的检出 限为0.001%，对杂质A、B的定量限为0.005%，对杂质C的定量限是0.025%。并且，流速范围 0.9ml/min~l.lml/min、柱温范围35°C~45°C、检测波长238nm~242nm、乙酸铵浓度 0.005%~0.015%;甲醇比例-2%~+2%各杂质峰的拖尾因子均小于2.0,杂质与杂质峰， 杂质与主成分峰均能达到基线分离，已知杂质含量的变化在±0.1%以内，测定结果均在可 接受的范围内，所以有关物质检查色谱条件耐受性良好。6次测定的杂质峰数一致，杂质之 和的绝对偏差为0.02%，12次测定的杂质峰数一致，杂质之和的绝对偏差为0.02%，证实该 方法具有良好的精密度。
【具体实施方式】
[0045] 本发明提供了二对甲苯磺酸缘生替尼原料药中有关物质检测方法，本领域技术人 员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动 对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用 已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
【发明内容】
、精神和范围内对 本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
[0046] 本发明采用的仪器皆为普通市售品，皆可于市场购得。