一种用于检测h因子浓度的方法、设备及试剂盒的利记博彩app
【技术领域】
[0001]本发明属于生物工程领域，尤其涉及一种Η因子水平检测的方法、设备和试剂盒。
【背景技术】
[0002] Η因子(Complement factor Η)最早是在1965年由Nilson等人首次发现并报道的， 根据电泳位置将其命名为Plf_球蛋白（Nilsson，U.R. and H. J .Mueller-Eberhard， Isolation of Beta If-Globulin from Human Serum and Its Characterization as the Fifth Component of Complement.J Exp Med，1965.122:p.277_98·)，其属于H因子蛋 白家族成员中最具特征性的一员。H因子家族蛋白基因位于lq32人类补体激活调苄基因簇 区，是一组血衆中的糖蛋白，均由独立能折叠的短一致重复序列（short consensus repeat，SCR)结构域构成（图1和图2) j因子是由1213个氨基酸残基组成的的糖蛋白，分子 量约为150kDa，由20个SCRs结构域组成，每个SCR由大约60个氨基酸组成，形成球状结构，含 有四个保守的半胱氨酸残基（I、Π 、m、IV )，在I~m和π~IV间形成二硫键，有利于其保持 空间构象。肝脏是其主要的合成器官，此外，肾脏的系膜细胞、足细胞及肾小管上皮细胞、视 网膜色素上皮细胞、血小板、外周单个核细胞、神经胶质细胞、成纤维细胞、内皮细胞等也有 所表达。正常人血循环中Η因子含量丰富，浓度约为300-800mg/l，其水平高低受遗传和环境 因素等共同影响。
[0003] Η因子不同的SCR区可以分别与肝素、细胞表面的粘多糖、微生物表面的蛋白组分、 C反应蛋白（CRP)、及C3b和C3d等补体分子相结合，发挥不同的生理功能（图3)。!1因子的Ν端 和C端分别具有不同的生物学功能：其N端的SCR1-4区主要在液相中通过辅助I因子参与降 解旁路途径C3转化酶(C3bBb)，同时还可以竞争性结合C3b而抑制C3转化酶(C3bBb)的形成； 其C端主要和宿主细胞表面的粘多糖相结合，从而利于N端的SCR1-4在宿主细胞的表面抑制 补体旁路途径的过度活化，保护宿主细胞免受损伤。最新的研究发现Η因子还可以与凋亡细 胞的碎片、DNA、组蛋白、核小体及annexin-II等成分相结合来调节清除凋亡细胞。
[0004] 此外，Η因子还可与多种细菌、病毒、真菌及寄生虫表面的补体结合蛋白相结合，介 导细菌"免疫逃避"；Η因子还可以与中性粒细胞、Β淋巴细胞及单核细胞等表达的细胞表面 受体如CR3、整合素以及L-选择素等相结合，介导细胞的粘附以及细胞因子的产生从而发挥 免疫调节作用。
[0005] 近年的研究发现，很多心血管疾病、肿瘤性疾病、感染性疾病、血液疾病、肾脏疾 病、风湿性疾病、眼科疾病及产科疾病等的发生发展与Η因子调节异常具有一定的相关性， 即发病者位于染色体lq32"补体激活调节蛋白区"可能存在基因异常。如能准确检测患者血 中补体Η因子的水平，则可为疾病诊断提供帮助，并能提示疾病的严重程度，在一定程度上 指导临床治疗，改善患者预后。
[0006] 现有技术中，对于人体循环中补体Η因子水平的检测方法主要有两种，一种是酶联 免疫吸附法(ELISA)，另一种是放射免疫扩散法。ELISA法检测时间长，操作步骤复杂;放射 免疫扩散法虽检测时间短，但需有放射性保护。而且两种方法中单次可检测的样本量少，故 两种检测方法都不能实现快速、准确地检测批量的补体Η因子水平，不能满足临床的需求。
【发明内容】
[0007] 为了解决现有技术中存在的检测时间长、操作步骤复杂、单次检测样本量少等技 术问题，本发明采用增强胶乳免疫比浊法原理，提供一种可以快速检测血浆/血清/尿液中Η 因子水平、并可同时检测大量样本、操作简单的方法。该方法的检测区间广、对样本的保存 条件要求较为宽泛、对样本的抗凝方法要求简单，具有较好的临床应用价值。
[0008] 为实现本发明的目的，本发明一方面提供一种检测Η因子浓度水平的方法，包括：
[0009] 配制用于检测待测样本中Η因子浓度水平的包括试剂I和试剂II的试剂盒；
[0010] 向待测样本中加入所述试剂I，经孵育处理后得到第一检测样本，经检测后，得到 所述待测样本的第一吸光度值Α1;向所述第一检测样本中加入所述试剂II，经孵育处理后 得到第二检测样本，经检测后得到所述待测样本的第二吸光度值Α2;
[0011] 向标准本中加入所述试剂I，经孵育处理后得到第一检测标准品，经检测后，得到 所述标准品的第一吸光度值Β1;向所述第一检测标准品中加入所述试剂II，经孵育处理后 得到第二检测标准品，经检测后得到所述待标准品的第二吸光度值Β2;
[0012] 利用得到的待测样本的第一吸光度值Α1、第二吸光度值Α2和标准品的第一吸光度 值Β1和第二吸光度值Β2,得到待测样本中Η因子浓度水平。
[0013] 其中，所述利用得到的待测样本的第一吸光度值Α1、第二吸光度值Α2和标准品的 第一吸光度值Β1和第二吸光度值Β2,得到待测样本中Η因子浓度水平包括：
[0014] 将待测样本的第一吸光度值Α2与待测样本的第二吸光度值Α1的差值除以标准品 的第二吸光度值Β2与第一吸光度值Β1的差值，得到比值Κ;
[0015] 将标准品Η因子的已知浓度与得到比值Κ相乘，得到待测样本中Η因子的浓度值C。 [0016] 其中，所述试剂I包括Tris缓冲液和质量百分比浓度为50-90g/L的PEG200;所述试 剂Π 包括质量百分比浓度为50-90g/L的PEG200和Η因子抗体的胶乳颗粒悬浊液。
[0017] 优选的，所述试剂I包括Tris缓冲液和质量百分比浓度为70g//L的PEG200;所述试 剂Π 包括质量百分比浓度为20g/L的PEG200和Η因子抗体胶乳颗粒悬浊液。
[0018] 其中，所述检测时设置的检测条件为温度37°C，主波长546nm或600nm、副波长 700nm〇
[0019] 特别是，一次测定时，待测样本的用量为3μ，标准品的用量为3μ，试剂I的用量为 240μ1，试剂Π 的用量为60μ1。
[0020] 其中，所述待测样本为人血浆、人血清或人尿液。
[0021 ]其中，所述待测样本的保存温度为-80~38°C。
[0022] 其中，所述待测样本的保存时间为0-28天。
[0023] 其中，待测样本中Η因子浓度为4.68-2000mg/L。
[0024] 其中，所述待测样本量为500-1000个。
[0025]其中，所述孵育处理的孵育温度为37°C，孵育时间为5min。
[0026] 其中，所述血清抗Η因子抗体来源于羊抗人Η因子、免抗人Η因子、鼠抗人Η因子、马 抗人Η因子或驴抗人Η因子中的一种，其效价为1:64。
[0027] 进一步的，所述羊抗人Η因子、免抗人Η因子、鼠抗人Η因子、马抗人Η因子或驴抗人 或马抗人Η因子中为单克隆抗体或多克隆抗体。
[0028] 为实现本发明的目的，本发明另一方面提供一种检测Η因子浓度水平的设备，包 括：
[0029] 配制用于检测待测样本中Η因子浓度水平的包括试剂I和试剂II的试剂盒；
[0030] 吸光度值检测装置，用于：
[0031] 对待测样本中加入了所述试剂I后得到第一检测样本进行吸光度值检测，得到所 述待测样本的第一吸光度值Α1;
[0032]对第一检测样本中加入所述试剂II后得到的第二检测样本进行吸光度值检测，得 到所述待测样本的第二吸光度值Α2;
[0033] 对标准品中加入了所述试剂I后得到第一检测标准品进行吸光度值检测，得到所 述标准品的第一吸光度值Β1;
[0034]对第一检测标准品中加入所述试剂II后得到的第二检测标准品进行吸光度值检 测，得到所述标准品的第二吸光度值Β2;
[0035] Η因子浓度水平计算装置，用于利用得到的待测样本的第一吸光度值Α1、第二吸光 度值Α2和标准品的第一吸光度值Β1和第二吸光度值Β2,计算待测样本中Η因子浓度水平。 [0036] 其中，所述试剂I包括Tris缓冲液和质量百分比浓度为50-90g/L的PEG200;所述试 剂Π 包括质量百分比浓度为10-30g/L的PEG200和Η因子抗体胶乳颗粒悬浊液。
[0037] 优选地，所述试剂I包括Tris缓冲液和质量百分比浓度为70g//L的PEG200;所述试 剂Π 包括Tris缓冲液、质量百分比浓度为2g/L的PEG200和Η因子抗体胶乳颗粒悬浊液。 [0038]特别是，所述血清抗Η因子抗体来源于羊抗人Η因子、免抗人Η因子、鼠抗人Η因子、 马抗人Η因子或驴抗人Η因子中的一种，其效价为1:64。
[0039]进一步的，所述羊抗人Η因子、免抗人