一种脂质体包封体积的快速测定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种脂质体包封体积的快速测定方法，具体涉及药物制造领域中脂质体制剂的包封体积的快速测定及制备工艺优化。
【背景技术】
[0002]脂质体药物已经成为当前药物剂型改造的重要方向，因其具有良好的生物相容性，以及可改变被包封药物体内分布和提高药物治疗指数而备受关注，利用脂质体进行剂型改造不仅可以提高药物的溶解性、利用效率、降低药物不良反应，还能进行靶向给药，有效将药物输送到病灶位置专一性地杀伤肿瘤或病灶细胞，同时避免全身用药对身体造成的损伤。
[0003]包封体积是指脂质体内包裹水相的体积占溶液总体积的百分比，当脂质体包封水溶性药物时，包封体积影响载药量及药物在体内的释放速度、生物分布、药物代谢动力学特征等，是脂质体药物药效评价的重要指标，也是评价与改造脂质体药物制造工艺的重要依据。目前，包封体积的测定方法主要有:溶质包封法、电子自旋共振法、电导率法、核磁共振法等。溶质包封法是将膜非渗透性标记物加入水化介质，使标记物进入脂质体内，通过测定内外水相标记物信号强度及脂质浓度得包封体积，但非渗透性标记物会存在整个测定过程，影响测定结果；电子自旋共振法，需要分离脂质体与外水相探针或对展宽剂溶液的渗透压及PH有严格要求，因此适用范围窄；电导率法要求选择标记物必须是电中性、膜不渗透性且不干扰电导率测定的物质;核磁共振法，温度对结果影响较大，温度越高，膜渗透性增加，内外水相水德扩散系数逐渐接近，使测定的包封体积值减小；同时上述测定方法有的需要特殊的仪器设备、有的需要进行脂质体与脂质体外溶液的有效分离，因此，现有方法存在步骤复杂、限制性强、成本高等缺陷，缺少直接测量脂质体包封体积的快速测定方法。
【发明内容】
[0004]本发明为解决现有技术中脂质体包封体积测定方法复杂、限制性强的问题，提供了一种脂质体包封体积的快速测定方法，该测定方法不需要进行离心、透析、凝胶过滤等复杂操作，直接通过最简便的酸碱滴定技术快速测定脂质体包封体积。
[0005]本发明的技术构思是:根据脂质体的结构分为脂质体外部与内部两个独立空间的结构特点，先测定脂质体外部空间体积(设为V.)，再利用表面活性剂将脂质体膜打开使脂质体内部空间与外部空间合并，可以测定溶液的总体积(设为Vt)，原脂质体包封空间的体积即为Vt与Vqut的差值(Vt-Vqut)。
[0006]本发明的技术要点是:一种脂质体包封体积的快速测定方法，包括以下步骤:在脂质体溶液中加入酸碱指示剂，用标准溶液进行酸碱滴定，记录滴定平衡点标准溶液的用量Vl，再取等量的脂质体溶液，加入表面活性剂，再次用标准溶液进行酸碱滴定，记录滴定平衡点标准溶液的用量V2，按公式(I)计算脂质体的包封体积:
[0007]脂质体的包封体积百分数PIN(%)= (V2_V1)/V2 (I)。
[0008]进一步的，向脂质体溶液中加入酸碱指示剂，利用标准溶液进行酸碱滴定，记录滴定平衡点标准溶液的用量Vl;取相同量的脂质体溶液，先加入表面活性剂将脂质体膜破坏，再加入酸碱指示剂，利用标准溶液进行酸碱滴定，记录滴定平衡点标准溶液的用量V2 ；设标准溶液的浓度为C标，则脂质体外的酸(或碱)总量为C标X Vl，脂质体内外酸(或碱)的总量为C标XV2，由于溶液中溶质分子是均匀分布的，脂质体外部空间体积(V.)与脂质体溶液的体积(Vt)的比值(Vout/Vt)等于脂质体外的酸(或碱)总量(C标XVI)与脂质体内外的酸(或碱)总量(QSXV2)之比，即:
[0009]Vout/Vt = (C? X Vl) / (C? X V2) = Vl /V2 (2)
[0010]脂质体外水相体积占总体积百分数Pqut( % ) =Vout/Vt=V1/V2
[0011](3)
[0012]脂质体的包封体积百分数ΡιΝ(% ) = 1-Pout= 1-V1/V2= (V2-V1 )/V2
[0013](4)。
[0014]进一步的，所述的酸碱指示剂为甲基橙、甲基红、溴百里酚蓝、溴甲酚绿、酚酞、紫色石蕊中一种或多种复配。酸碱指示剂要具体根据脂质体溶液的酸碱性来选择，如脂质体溶液呈弱碱性则选择溴甲酚绿-甲基红混合指示剂。
[0015]进一步的，所述的表面活性剂为非离子表面活性剂。
[0016]优选的，所述的非离子表面活性剂为烷基酚聚氧乙烯醚、高碳脂肪醇聚氧乙烯醚、脂肪酸聚氧乙烯酯、脂肪酸甲酯乙氧基化物中一种或多种复配。作为优选，本发明采用十二烷基聚乙二醇醚非离子表面活性剂。
[0017]与现有技术相比，本发明利用酸碱滴定分别测定脂质体膜破坏前后的标准溶液(酸或碱)用量，可以直接计算脂质体的包封体积。本发明测定方法简便、无需分离、透析、凝胶过滤等复杂操作，测试成本低，测定迅速，该方法测定结果准确性高，设备简单，适用范围广，可以用于脂质体产品检测与制备工艺优化，为脂质体包封水溶性药物的实际应用起到关键作用。
【附图说明】
[0018]图1DOPC脂质体的滴定结果；
[0019]图2DOPC脂质体的滴定平衡点确定；
[0020]图3DOTAP脂质体的滴定结果；
[0021]图4DOTAP脂质体的滴定平衡点确定；
[0022]图5脂质体溶液(加表面活性剂)的滴定结果；
[0023]图6脂质体溶液(加表面活性剂)的滴定平衡点确定；
[0024]图7无脂质体溶液(加表面活性剂)的滴定结果；
[0025]图8无脂质体溶液(加表面活性剂)的滴定平衡点确定。
【具体实施方式】
:
[0026]下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下述实施例中如无特殊说明，所采用的实验方法均为常规方法，所用材料、试剂等均可从化学公司购买。
[0027]实施例1:使用磷脂酰胆碱(DOPC)制备脂质体并测定脂质体包封体积
[0028]1.1脂质体的制备
[0029]采用薄膜分散法进行脂质体制备。称取DOPC磷脂0.0063克置于适宜容器中，用5mL氯仿完全溶解，在旋转蒸发仪上缓慢蒸干并使磷脂均匀分布于容器内表面，放在真空干燥机中真空干燥5小时以上去除氯仿。将4mL制备脂