抗原单位作为检 测用标准抗原。最终可选择32、16、8、4个抗原单位作为检测用标准抗原。
[0065] 3.反应时间确定（W16单位标准抗原为例）
[0066] 在37 ± 2°C下进行实验，取16单位标准抗原50μ1与640倍稀释标准血清50μ1混合后 分别反应:0、5、10、15、20、25、30111；[]1之后，进行试纸条检测，了解不同反应时间不同^及反 应溫度下的反应效果。在37±2°C的溫度下，反应lOmin至30min均能达到相似的结果，本发 明中选择15min，既保证了反应稳定又减少了反应时间，因此最终选择反应条件为37±2°C 15min来进行后续的工作。
[0067] 说明：本发明中只描述W16单位标准抗原为例的情况，实际上在本发明的申请日 前也同样做过4,8,32单位标准抗原的实验，其反应条件基本与W16单位标准抗原的相同， 在此就不一一列举。
[0068] 实施例4、快速检测CPV抗体HI效价的方法与HI试验比较(W16单位标准抗原为例）
[0069] 1.二种方法监测实验犬血清抗体消长规律
[0070] 将44份CPV攻毒的实验犬血清样品分别进行试纸条快速检测方法和HI试验检测。 HI试验按国标方法(GB/T 14926.57-2008)进行;试纸条快速检测方法按选定的最佳反应条 件进行检测(结果见表5)。
[0071] 表5. 2种方法检测实验犬血清样品结果
[0072]
[0074]结果表明：血清4倍CGIA效价即HI效价。在44份血清样品中有37份符合4倍CGIA等 于HI效价的关系，符合率为84.1 %。
[00巧]2. 2种方法检测临床犬血清抗体
[0076] 将42份临床犬血清样品分别进行试纸条快速检测方法和HI试验检测。HI试验按国 标方法(GB/T 14926.57-2008)进行;试纸条快速检测方法按选定的最佳反应条件进行检测 (结果见表6)。
[0077] 表6. 2种方法检测临床犬血清样品结果(16单位抗原）
[007引
[0080]结果表明：临床犬血清同样符合4倍CGIA效价即HI效价。在42份血清样品中有41份 符合4倍CGIA等于HI效价的关系，符合率为97.6%。
[0081 ]综合表5和表6结果，犬血清CGIA效价与HI效价的关系表现为，86份血清样品中有 78份符合4倍CGIA等于HI效价，符合率为90.7%。
[0082] 另外，根据《实验动物病毒性疾病》（田克恭等著）WHI效价1:80作为判定标准：> 80为免疫效价合格，〈80为免疫效价不合格;依据上述结果推算血清CGIA效价^ 20为合格， 〈20为不合格。则结合表2和表3,2种方法的差异性分析结果如表7。
[0083] 表7.两种方法检测犬血清样品免疫效价差异性分析结果
[0084]
[0085] 表7显示：两种方法检测判定合格与不合格免疫血清的符合率为：（77+8)/86 X 100% =98.8%。说明该方法检验血清样品定性检测其抗体水平时，与HI试验结果符合率极 高，可替代HI试验快速检测犬血清中CPV抗体的HI效价。
[0086] 用于犬血清抗体HI定性检测时，需测定其HI效价是否Μ :80。使用16抗原单位作 为检测用标准抗原时，仅需将待检血清稀释至1:20，同时用试纸条检测标准抗原W及稀释 血清和标准抗原的反应混合液，若检测标准抗原的试纸条C线和Τ线均显色，而检测血清和 标准抗原反应混合液的试纸条C线显色Τ线不显色，则说明此血清抗体CGIA效价含1:20，即 HI效价含1:80，说明免疫合格;若检测标准抗原的试纸条C线和Τ线均显色，而检测血清和标 准抗原反应混合液的试纸条C线和T线也均显色，则说明此血清抗体CGIA效价<1:20，即HI效 价<1:80,说明免疫不合格。同理，使用其他抗原单位的标准抗原检测时，只需将犬血清分别 稀释至1:10(32个抗原单位）、1:40(8个抗原单位）、1:80(4个抗原单位)使用。
[0087] 用32抗原单位时，需使用的抗原量增多；用8和4抗原单位时，需分别将待测血清从 1:10倍比稀释至1:40和1:80,增加检测操作。因此，推荐使用16单位抗原用于检测。
[0088] 附:32单位抗原、8单位抗原和4单位抗原检测结果见表8-10
[0089] 表8. 2种方法检测临床犬血清样品结果比较(32单位抗原）
[0090]
[0091]
[0092] 表9. 2种方法检测临床犬血清样品结果比较(8单位抗原）
[0093]
[0094]
[0095] 表10. 2种方法检测临床犬血清样品结果比较(4单位抗原）
[0096]
[0097]
【主权项】
1. 一种快速检测犬细小病毒抗体血凝抑制效价的胶体金试纸条，其特征在于，在胶体 金标记物垫上喷有胶体金标记的CPV治疗性单克隆抗体，S卩Au-McAb;在反应膜检测线T线上 同样包被有CPV治疗性单克隆抗体McAb;对照线C线上包被羊抗鼠IgG，所述CPV治疗性单克 隆抗体为血凝相关单克隆抗体。2. 根据权利要求1所述的胶体金试纸条，其特征在于，在所述胶体金标记物垫上喷的胶 体金标记的CPV治疗性单克隆抗体的浓度为l-10yg/ml;在所述检测线T线上包被的CPV治疗 性单克隆抗体McAb的浓度为0.5-2mg/ml;所述对照线C线上包被羊抗鼠IgG的浓度为0.5-2mg/ml〇3. 根据权利要求2所述的胶体金试纸条，其特征在于，所述检测线T线上包被的CPV治疗 性单克隆抗体McAb与所述对照线C线上包被羊抗鼠IgG的浓度比值为2:1。4. 根据权利要求3所述的胶体金试纸条，其特征在于，在所述胶体金标记物垫上喷的胶 体金标记的CPV治疗性单克隆抗体的浓度为3.72yg/ml;在所述检测线T线上包被的CPV治疗 性单克隆抗体McAb的浓度为lmg/ml;所述对照线C线上包被羊抗鼠IgG的浓度为0.5mg/ml。5. 根据权利要求1-4任一所述的胶体金试纸条，其特征在于，检测时将犬血清从1:10开 始倍比稀释，使用16抗原单位的标准抗原时，CGIA效价乘以4即为犬血清中抗体HI效价;使 用32抗原单位的标准抗原时，CGIA效价乘以8即为HI效价;使用8抗原单位的标准抗原时， CGIA效价乘以2即为HI效价;使用4抗原单位的标准抗原时，CGIA效价等于HI效价。6. 根据权利要求5所述的胶体金试纸条，其特征在于，检测时可使用32、16、8和4个抗原 单位的标准抗原。7. 根据权利要求1-6任一所述的胶体金试纸条，其特征在于，反应时间为10-30min，反 应温度为37 ± 2°C，胶体金溶液的pH值为8.2。8. 包括权利要求1-7任一所述的胶体金试纸条的试剂盒。9. 使用权利要求1-7任一所述的胶体金试纸条检测犬血清中CPV抗体HI效价的方法。
【专利摘要】本发明公开了一种快速检测犬细小病毒抗体血凝抑制效价的胶体金试纸条、试剂盒及检测方法。本发明涉及CPV治疗性单克隆抗体制备而成的试纸条，定量检测时将犬血清从1:10开始倍比稀释，与16个抗原单位的CPV标准抗原中和后，再滴入本试纸条中，试纸条检测线(T线)消失时的血清最高稀释倍数为试纸条检测效价(CGIA效价)，CGIA效价乘以4即为犬血清中抗体HI效价；使用32抗原单位的标准抗原时，CGIA效价乘以8即为HI效价；使用8抗原单位的标准抗原时，CGIA效价乘以2即为HI效价；使用4抗原单位的标准抗原时，CGIA效价等于HI效价。本方法与血凝血抑检测方法结果的符合率达90.7％，抗体定性检测结果的符合率达98.8％，可用于CPV疫苗免疫效果评价。CGMCC No.430420101103
【IPC分类】G01N33/569, G01N33/577, G01N33/558
【公开号】CN105486871
【申请号】CN201510830541
【发明人】孙明, 陈西钊, 申屠芬琴, 马永缨, 杨欣艳
【申请人】北京世纪元亨动物防疫技术有限公司
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2015年11月25日