定量检测前列腺特异性抗原的试纸条及制备方法与试纸卡的利记博彩app
【技术领域】
[0001] 本发明设及体外试纸检测技术领域，具体为一种采用时间分辨巧光免疫层析方法 同时定量检测总前列腺特异性抗原和游离前列腺特异性抗原含量的试纸条及制备方法与 试纸卡。
【背景技术】
[0002] 前列腺特异性抗原(Prostate Specific Antigen,PSA)是由前列腺上皮细胞产生 的一种蛋白水解酶，正常生理情况下，PSA主要存在于精液中，其在精液中的浓度高于血清 中浓度的100万倍。血循环中PSAW两种形式存在，与蛋白水解酶抑制物结合的复合PSA大约 占85% W上，游离PSA(fPSA)占15%左右，总前列腺特异性抗原(tPSA)为复合PSA和游离PSA 的总和。PSA在前列腺炎、前列腺增生、前列腺缺血性梗塞W及前列腺癌等前列腺疾病时均 可升高。目前，国内检验学界通常把巧SAMug/L作为筛选前列腺癌的临界值，把巧SA结果在 4~lOug/L之间称为灰色区域，前列腺癌与前列腺增生均有可能，而当巧SA〉10ug/L时，前列 腺癌风险极大。当血清巧SA在灰色区域时，fPSA与巧SA的比值显得非常重要，fPSA/tPSA大 于临界值时，前列腺癌可能性小，当fPSA/tPSA小于临界值时，前列腺癌可能性较大。通常， 采用巧SA、fPSA联合测定可使前列腺恶性疾病的检出率提高到90% W上。作为一种肿瘤标 志物，PSA测定有其不可替代的优越性，定量测定准确度性高、特异性性好，而且无创、无痛 苦，有助于前列腺癌早期诊断，监测治疗反应及判断预后，也可用于高危人群（50岁W上男 性)前列腺癌的普查。
[0003] 常规检测血清巧SA、fPSA时，均为单一检测，因每次检查的误差不可避免和误差的 累加，令fPSA/tPSA结果的误差翻倍，对检测结果的准确性和临床判断影响较大。如果能够 将巧SA和fPSA两个项目合并在一个试纸条上同时进行，在缩短检测时间、提高高检测效率 的同时，可W实现更为准确的检测。
【发明内容】
[0004] 本发明要解决的技术问题是克服现有技术中用于检测前列腺特异性抗原的检测 试纸盒仅能对总或游离前列腺特异性抗原进行检测，但在计算样品液体中的游离与总前列 腺特异性抗原的比值时容易出现误差的技术缺陷;进而提供一种同时检测游离与总前列腺 特异性抗原的试纸条及应用其的试纸卡。
[0005] 为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：
[0006] -种定量检测前列腺特异性抗原的试纸条，包括底板和沿所述底板长度方向顺次 粘覆于所述底板上的吸水纸、硝酸纤维素膜、结合垫W及样品垫；
[0007] 所述硝酸纤维素膜粘覆于所述底板长度方向的中央，两端分别与所述吸水纸和所 述结合垫部分重叠;所述结合垫的另一端与所述样品垫部分重叠；
[000引所述硝酸纤维素膜上相间隔依次设置有由游离前列腺特异性抗原划膜抗体涂层 形成的的第一检测带、复合前列腺特异性抗原划膜抗体涂层形成的第二检测带和兔抗鼠多 克隆抗体涂层形成的质控带;所述结合垫表面喷涂有复合前列腺特异性抗原抗体和游离前 列腺特异性抗原抗体，所述复合前列腺特异性抗原抗体和游离前列腺特异性抗原抗体均偶 联有铜系稀±离子的纳米微球。
[0009] 优选的，所述质控带、第一检测带和第二检测带平行设置;且所述第一检测带与质 控带和所述第二检测带分别相隔距离为0.4cm~0.5cm，且所述第二检测带与所述结合垫相 隔距离为0.4cm~0.5畑1。
[0010] 优选的，所述第一检测带与质控带和所述复体第二检测带分别相隔距离为0.43cm ~0.47cm，且所述第二检测带与所述结合垫相隔距离为0.43cm~0.47cm。
[0011] 优选的，所述第一检测带与质控带和所述第二检测带分别相隔距离为0.45cm，且 所述第二检测带与所述结合垫相隔距离为0.45cm。
[0012] 进一步的，所述铜系稀±离子为館离子、衫离子、铺离子中的任意一种。
[0013] 进一步的，所述纳米微球的直径为10~500nm。
[0014] 进一步的，所述吸水纸与所述硝酸纤维素膜相重叠的部分在所述底板长度方向的 长度为2mm，且重叠部分中所述吸水纸位于所述硝酸纤维素膜的上方;所述结合垫与所述硝 酸纤维素膜相重叠的部分在所述底板长度方向的长度为2mm，且重叠部分中所述结合垫位 于所述硝酸纤维素膜的上方。
[0015] 进一步的，所述样品垫与所述结合垫相重叠的部分在所述底板长度方向的长度为 2mm，且重叠部分中所述样品垫位于所述结合垫的上方，所述结合垫直接与所述底板相接触 部分的长度大于4mm。
[0016] -种定量检测前列腺特异性抗原的试纸条的制备方法，包括W下几个步骤：
[0017] (1)、抗体的预处理
[001引用0.05mol/L，抑为7.2~7.6的憐酸盐缓冲液在4°0下透析商品化的复合前列腺特 异性抗原划膜抗体和游离前列腺特异性抗原划膜抗体，过夜；
[0019] (2)、结合垫的制备：
[0020] 在铜系稀±离子的纳米微球溶液中加入碳二亚胺和步骤(1)预处理过的复合前列 腺特异性抗原划膜抗体，碳二亚胺的终浓度为20mmo 1 /L，纳米微球与预处理过的抗体的质 量比为50:1，室溫反应2小时，离屯、，去除上清液后，加入含有1 %质量分数的BSA的0.05mol/ L，pH为7.2的憐酸盐缓冲液至微球浓度为1. Oug/L，待用；
[0021] 在铜系稀±离子的纳米微球中加入碳二亚胺和步骤(1)预处理过的游离前列腺特 异性抗原划膜抗体，碳二亚胺的终浓度为20mmol/L，纳米微球与预处理过的抗体的质量比 为50:1，室溫反应2小时，离屯、，去除上清液后加入含有1 %质量分数的BSA的0.05mol/L，pH 为7.2的憐酸盐缓冲液至微球浓度为1. Oug/L，待用；
[0022] 将复合前列腺特异性抗原划膜抗体标记的纳米微球与游离前列腺特异性抗原划 膜抗体标记的微球混合，用定量喷膜仪W3uL/cm~加 L/cm的量将混合微球喷涂于聚醋膜形 成的结合垫5上，避光的条件下于35~38°C烘干1小时，加入干燥剂封存备用；
[0023] (3)硝酸纤维素膜的制备：
[0024] 使用0.02mol/L，抑为7.4的含质量分数为1%薦糖的憐酸盐缓冲液，分别透析识别 不同抗原表位的游离前列腺特异性抗原划膜抗体、识别不同抗原表位的复合前列腺特异性 抗原划膜抗体和兔抗鼠多克隆抗体，各抗体的浓度最终稀释到lug/L，使用定量喷膜仪W luL/cm的量将Ξ者W-定的间隔喷于硝酸纤维素膜上制得依次设置的第一检测带、第二检 测带和质控带，35~38°C烘干化，加入干燥剂封存备用；
[0025] (4)试纸条的组装:在底板中间先铺设硝酸纤维素膜，然后在与质控带相临近的一 端铺吸水纸，使吸水纸与硝酸纤维素膜部分重叠;在与复合前列腺特异性抗原划膜抗体第 二检测带相临近的一端铺结合垫，使硝酸纤维素膜与结合垫部分重叠;最后贴样品垫。
[0026] 鉴于上述试纸条结构不牢固，不利于直接进行定量检测操作、且存放携带不方便 的问题，将上述结构的试纸条装入塑料外壳内部W利于各组成结构的固定，从而便于存放 和检测，因此，本发明还公开了一种定量检测前列腺特异性抗原的试纸卡。
[0027] -种定量检测前列腺特异性抗原的试纸卡，包括定量检测前列腺特异性抗原的试 纸条W及包覆所述试纸条的外壳;所述外壳包括底座和卡盖，所述卡盖上设置有用于露出 所述试纸条的局部区域观察口和加样口；其中，所述加样口设于所述样品垫上方，W露出部 分或全部所述样品垫区域，所述观察口设于所述硝酸纤维素膜上部，W露出所述第一检测 带、所述第二检测带和所述质控带。
[0028] 进一步的，所述底座为塑料底座，所述卡盖为塑料卡盖。
[0029] 与现有技术相比，本发明具有W下的有益效果：
[0030] -、本发明中所述硝酸纤维素膜上相间隔依次设置巧SA划膜抗体的第一检测带、 复合PSA划膜抗体的第二检测带W及兔抗鼠多克隆抗体的质控带;该试纸条将时间分辨巧 光免疫技术、双抗体夹屯、测抗原与具体试纸结构相结合，形成了一种可同时检测tPSA和 fPSA含量的试纸条，解决了现有技术中PSA试纸盒无法同时检测巧SA和fPSA的问题，采用该 种试纸条对巧SA和fPSA检测，可W保证同一样品液体中的巧SA和fPSA的检测检测结果精确 度高、误差小，为临床使用提供了极大便利；
[0031] 二、本发明将第一检测带和第二检测带设置于同一检测试纸上，两条检测带平行 设置，避免了两种单克隆抗体之间存在协同影响，在检测过程中只会出现相同的误差，比如 同时出现正的误差或同时出现负的误差，在计算比值的时候，该误差就基本可W相抵，从而 计算fPSA/tPSA比值结果更准确；
[0032] Ξ、本发明在结合垫表面喷