一种糖化血清白蛋白检测试剂及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医学检验技术领域，具体涉及一种糖化血清白蛋白检测试剂及其应 用。
【背景技术】
[0002] 糖化血清白蛋白（glyecatedalbumin，GA)是葡萄糖通过非酶促糖基化反应与血 浆中白蛋白结合形成的酮胺类化合物。糖化血清白蛋白值可以反映糖尿病患者检测前2-3 周的平均血糖水平，与血糖监测的金标准HbAK相比，GA可以反映血糖短期波动的情况，可 以更准确的反映糖尿病患者的血糖情况。良好的血糖控制能有效延缓糖尿病、慢性并发症 的发生和发展。因此，糖化血清白蛋白的测定在糖尿病的诊断、近期监控和疗效评价方面均 具有重要的意义。
[0003] 在上世纪80年代，日本学者就研发了高压液相离子交换法（HPLC法)进行GA测定。 虽然HPLC法测定GA可准确检测糖尿病患者短期血糖控制的总体水平，但是该测定方法在 当时的价格较高，处理样本量小，不利于临床常规的开展和应用。接着美国研制出一种特异 性较高的糖化血清白蛋白的测定方法，该检测方法是一种固体酶法，解决了当时检测糖化 血清白蛋白价格高的问题。但是，该检测方法操作繁琐，检测时需要复溶，而且测定的结果 重复性较低，大大的限制了该检测试剂的应用。
[0004] 近年来，随着对糖化血清白蛋白检测的深入研究，为了更方便、快捷的检测出糖化 血清白蛋白的浓度，学者们研究出了 一种液态酶法检测的糖化血清白蛋白的检测方法，该 液态酶法是一种简单、快速、灵敏、准确定量的检测方法，而且该检测方法的测定结果准确 高、重复性好，是一种较为理想的糖化血清白蛋白的检测方法。
[0005] 中国专利申请201410401260.X公开了一种稳定的糖化白蛋白检测试剂盒，该试 剂盒由试剂R1、试剂R2和试剂R3组成，所述试剂R1主要由缓冲液、糖化氨基酸氧化酶、白 蛋白蛋白酶、过氧化物酶、过氧化氢酶、4-氨基安替比林和稳定剂组成；所述试剂R2主要 由缓冲液、白蛋白蛋白酶、过氧化物酶、色原和稳定剂组成；所述试剂R3主要由缓冲液、溴 甲酚绿和表面活性剂组成。该试剂是一种简单、快速、灵敏、准确的检测试剂，而且该试剂稳 定性高，有利于延长检测试剂的保质期。但是，该检测试剂中的溴甲酚绿可以与非白蛋白类 蛋白质结合，影响血清白蛋白的检测浓度，从而导致检测结果误差较大，影响诊断结果，不 利于该试剂的推广和应用。
[0006] 因此，研究和发开出一种稳定性高，检测结果误差小，检测结果重复性高的糖化血 清白蛋白检测试剂是目前亟需解决的难题。
【发明内容】
[0007] 为了克服现有技术中糖化血清白蛋白检测试剂存在检测结果准确性差、重复性低 的缺陷，本发明的目的是提供一种糖化血清白蛋白检测试剂及其应用，以解决上述问题。
[0008] 本发明提供了一种糖化血清白蛋白检测试剂，包括试剂R1、试剂R2和试剂R3,所 述试剂R1包括以下组分： MES缓冲液10-60mmo1 /L、糖化氨基酸氧化酶2-15U/ml、蛋白酶5-1OU/ml、氯化钠 20-50μmol/L和防腐剂 0·Ι-lg/L; 所述试剂R2包括以下组分： MES缓冲液 10-60mmol/L、N，N-双（4-磺丁基）-3-甲基苯胺二钠盐l-10mmol/L、 4-氨基安替吡啉5-20mmol/L、过氧化物酶l-8U/ml、多元醇5-10mg/ml、烷基聚葡萄糖苷 10-30mmol/L和防腐剂 0·Ι-lg/L; 所述试剂R3包括以下组分： 醋酸盐缓冲液20-50mmol/L、溴甲酚紫2-15mmol/L、烷基聚葡萄糖苷30-80mmol/L和防 腐剂 0. 1-lg/L。
[0009] 优选地，所述的糖化血清白蛋白检测试剂包括试剂R1、试剂R2和试剂R3,所述试 剂R1包括以下组分： MES缓冲液40mmol/L、糖化氨基酸氧化酶8U/ml、蛋白酶6U/ml、氯化钠30μmol/L和防 腐剂 0. 2g/L; 所述试剂R2包括以下组分： MES缓冲液40mmol/L、N，N-双（4-磺丁基）-3-甲基苯胺二钠盐4mmol/L、4-氨基安 替P比啉10mmol/L、过氧化物酶4U/ml、多元醇8mg/ml。烷基聚葡萄糖苷20mmol/L和防腐剂 〇· 2g/L; 所述试剂R3包括以下组分： 醋酸盐缓冲液30mmol/L、溴甲酸紫5mmol/L、烷基聚葡萄糖苷50mmol/L和防腐剂0. 2g/L〇
[0010] 进一步地，所述防腐剂为proclin300。所述的proclin300具有优越的兼容性、稳 定性和低毒性的优点而被广泛应用于诊断试剂或产品中控制微生物含量的高效灭菌剂，可 以有效的延长检测试剂的保质期。
[0011] 进一步地，所述多元醇为乙二醇。
[0012] 进一步地，所述醋酸盐缓冲液的pH值为4. 5-5. 5,所述醋酸盐缓冲液的pH值优选 为 4. 9。
[0013] 本发明的MES缓冲液是2-吗啉乙磺酸（MES)缓冲液，2-吗啉乙磺酸的分子式 为C6H13N04S，CAS号为4432-31-9。N，N-双（4-磺丁基）-3-甲基苯胺二钠盐的分子式为 C15H23NNa206S2,CAS号为 127544-88-1。
[0014] 本发明的检测试剂添加的氯化钠可以有效的保持糖化氨基酸氧化酶和蛋白酶的 构象，维持其活性，保证试剂检测结果的准确性。多元醇是分子中含有三个或三个以上羟基 的醇类，可以提高检测试剂的稳定性。烷基聚葡萄糖苷是一种非离子表面活性剂，具有杀菌 性能强、配伍性好和提高酶活性的优点，可以有效的提高过氧化物酶的活性，提高试剂的稳 定性。
[0015] 本发明提供的糖化血清白蛋白检测试剂检测糖化血清白蛋白（GA)的原理：在样 本中先加入糖化氨基酸氧化酶，将内源性糖化氨基酸变成葡萄糖酮醛、氨基酸和过氧化氢 除去；然后在处理液中，加入蛋白酶，将糖化血清白蛋白反应生成糖化氨基酸，接着加入糖 化氨基酸氧化酶将糖化氨基酸生成葡萄糖酮醛、氨基酸和过氧化氢，在生成的过氧化氢的 环境下，N，N-双（4-磺丁基）-3-甲基苯胺二钠盐和4-氨基安替吡啉可以定量变换成蓝紫 色色素。通过测定该蓝紫色色素的吸光度从而计算出糖化血清白蛋白的浓度。
[0016] 本发明提供的糖化血清白蛋白检测试剂检测血清白蛋白（ALB)的原理：在pH为 4. 5-5. 5的环境中，溴甲酚紫与血清白蛋白结合形成绿色复合物，在600nm波长处的吸光度 与血清白蛋白浓度成正比，与同样处理的血清白蛋白标准比较，可计算样本血清中的白蛋 白浓度。
[0017] 糖化血清白蛋白（GA)值（％)的计算是将糖化血清白蛋白浓度除以血清白蛋白浓 度，计算出糖化血清白蛋白值（％)，从而反映出糖尿病患者检测前2-3周的平均血糖水平。
[0018] 本发明提供的糖化血清白蛋白检测试剂检测GA浓度是采用终点法检测，该试剂 的检测方法包括以下步骤：采用自动生化分析仪进行检测，其主波长设为546nm，副波长设 为700nm，加入样本，接着加入试剂R1和试剂R2反应4-8min。
[0019] 本发明提供的糖化血清白蛋白检测试剂检测ALB浓度是采用终点法检测，该试剂 的检测方法包括以下步骤：采用自动生化分析仪进行检测，其主波长设为600nm，副波长设 为660nm，加入样本和试剂R3反应4-8min。
[0020] 另外，本发明还提供了糖化血清白蛋白检测试剂在检测糖化血清白蛋白中的应 用。
[0021] 总之，与现有技术相比，本发明提供的糖化血清白蛋白检测试剂具有具有抗干扰 能力强、精密度高、测定结果重复性好和检测试剂稳定性高的优点，而且该试剂回收率高， 是一种理想的糖化血清白蛋白检测试剂，有利于该试剂的推广和应用。
【具体实施方式】
[0022] 以下通过具体实施例进一步描述本发明，本发明不仅仅限于以下实施例。在本发 明的范围内或者在不脱离本发明的内容、精神和范围内，对本发明进行的变更、组合或替 换，对于本领域的技术人员来说是显而易见的，且包含在本发明的范围之内。
[0023] 实施例1、糖化血清白蛋白检测试剂 糖化血清白蛋白检测试剂包括试剂R1、试剂R2和试剂R3,所述试剂R1包括以下组分：MES缓冲液20mmol/L、糖化氨基酸氧化酶2U/ml、蛋白酶5U/ml、氯化钠25μmol/L和 proclin300 0.lg/L； 所述试剂R2包括以下组分： MES缓冲液20mmol/L、N，N-双（4-磺丁基）-3-甲基苯胺二钠盐lmmol/L、4-氨基安替P比啉