一种25-羟基维生素d测定试剂盒及其使用方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种25-羟基维生素D测定试剂盒及其使用方法。
【背景技术】
[0002]25-羟基维生素D是一种类固醇激素，在促进肠道中钙的吸收及维持其动态平衡具有重要意义。25-羟基维生素D缺乏已被证实与许多疾病有关，包括骨质疏松，佝偻病，骨软化症及心血管等疾病。但目前所使用的关于25-羟基维生素D测定试剂盒其准确性低，且操作复杂，不易推广。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于提供一种25-羟基维生素D测定试剂盒及其使用方法，其通过胶乳增强免疫比浊法法，操作简单，准确性高，便于推广。
[0004]为了达到上述目的，本发明的技术方案是:
一种25-羟基维生素D测定试剂盒，包括第一检测液、第二检测液、稀释液、缓冲液，第一检测液包括β半乳糖苷酶供体肽25-羟基维生素D结合物、第一检测液聚乙二醇，原材料浓度比份为半乳糖苷酶供体肽25-羟基维生素D结合物:第一检测液聚乙二醇=(28—32): (0.8 — 1.2);第二检测液包括β半乳糖苷酶受体肽硝基苯-β -半乳糖苷结合物、第二检测液聚乙二醇，原材料浓度比份为:β半乳糖苷酶受体肽硝基苯-β -半乳糖苷结合物:第二检测液聚乙二醇=(13—17): (0.8 — 1.2);稀释液包括鼠抗人维生素D抗体胶乳颗粒、稀释液聚乙二醇，原材料浓度比份为:鼠抗人维生素D抗体胶乳颗粒:稀释液聚乙二醇=(23-27): (0.8 — 1.2);缓冲液包括柠檬酸、柠檬酸三钠、缓冲液聚乙二醇、聚碳酸酯，原材料浓度比份为:柠檬酸:柠檬酸三钠:缓冲液聚乙二醇:聚碳酸酯= (48— 52):(43—47): (4—6): (0.8 — 1.2)。
[0005]第一检测液包括β半乳糖苷酶供体肽25-羟基维生素D结合物、第一检测液聚乙二醇，原材料浓度比份为:β半乳糖苷酶供体肽25-羟基维生素D结合物:第一检测液聚乙二醇=30:1 ;第二检测液包括β半乳糖苷酶受体肽硝基苯-β-半乳糖苷结合物、第二检测液聚乙二醇，原材料浓度比份为半乳糖苷酶受体肽硝基苯半乳糖苷结合物:第二检测液聚乙二醇=15:1 ;稀释液包括鼠抗人维生素D抗体胶乳颗粒、稀释液聚乙二醇，原材料浓度比份为:鼠抗人维生素D抗体胶乳颗粒:稀释液聚乙二醇=25:1 ;缓冲液包括柠檬酸、柠檬酸三钠、缓冲液聚乙二醇、聚碳酸酯，原材料浓度比份为:柠檬酸:柠檬酸三钠:缓冲液聚乙二醇:聚碳酸酯=50:45:5:1。
[0006]第一检测液聚乙二醇、第二检测液聚乙二醇、稀释液聚乙二醇、缓冲液聚乙二醇均为聚乙二醇6000。
[0007]—种25-羟基维生素D测定试剂盒的使用方法，包括如下步骤:首先检测样本20 μ L，稀释液155 μ L，混合均匀，得到稀释后检测液；接着准备第一试剂管、第二试剂管、第三试剂管；接着在第一试剂管、第二试剂管、第三试剂管中分别加入60 μ L缓冲液，且孵育5分钟；然后在第一试剂管内加入第一检测液240 μ L，蒸馏水20 μ L混合均匀并孵育5分钟，同时在第二试剂管内加入第一检测液240 μ L，标准液20 μ L混合均匀并孵育5分钟，同时在第三试剂管内加入第一检测液240 μ L，稀释后检测液20 μ L混合均匀并孵育5分钟；接着在第一试剂管内加入第二检测液加入60 μ L混合均匀并孵育12分钟，同时在第二试剂管内加入第二检测液加入60 μ L混合均匀并孵育12分钟，同时在第三试剂管内加入第二检测液加入60 μ L混合均匀并孵育12分钟；最后分别读取第一试剂管、第二试剂管、第三试剂管的吸光度，将吸光度与已知浓度的标准液比较，从而得出人血清中25-羟基维生素D的浓度。
[0008]所述孵育时的温度均为37°C。
[0009]本发明的有益效果是:一种25-羟基维生素D测定试剂盒及其使用方法，其通过胶乳增强免疫比浊法法，操作简单，准确性高，便于推广。
【具体实施方式】
[0010]实施例1
一种25-羟基维生素D测定试剂盒，包括第一检测液、第二检测液、稀释液、缓冲液，第一检测液包括β半乳糖苷酶供体肽25-羟基维生素D结合物、第一检测液聚乙二醇，原材料浓度比份为:β半乳糖苷酶供体肽25-羟基维生素D结合物:第一检测液聚乙二醇=30:1 ;第二检测液包括β半乳糖苷酶受体肽硝基苯-β-半乳糖苷结合物、第二检测液聚乙二醇，原材料浓度比份为半乳糖苷酶受体肽硝基苯半乳糖苷结合物:第二检测液聚乙二醇=15:1 ;稀释液包括鼠抗人维生素D抗体胶乳颗粒、稀释液聚乙二醇，原材料浓度比份为:鼠抗人维生素D抗体胶乳颗粒:稀释液聚乙二醇=25:1 ;缓冲液包括柠檬酸、柠檬酸三钠、缓冲液聚乙二醇、聚碳酸酯，原材料浓度比份为:梓檬酸:柠檬酸三钠:缓冲液聚乙二醇:聚碳酸酯=50:45:5:10
[0011 ] 第一检测液聚乙二醇、第二检测液聚乙二醇、稀释液聚乙二醇、缓冲液聚乙二醇均为聚乙二醇6000。
[0012]一种25-羟基维生素D测定试剂盒的使用方法，包括如下步骤:首先检测样本20 μ L，稀释液155 μ L，混合均匀，得到稀释后检测液；接着准备第一试剂管、第二试剂管、第三试剂管；接着在第一试剂管、第二试剂管、第三试剂管中分别加入60 μ L缓冲液，且孵育5分钟；然后在第一试剂管内加入第一检测液240 μ L，蒸馏水20 μ L混合均匀并孵育5分钟，同时在第二试剂管内加入第一检测液240 μ L，标准液20 μ L混合均匀并孵育5分钟，同时在第三试剂管内加入第一检测液240 μ L，稀释后检测液20 μ L混合均匀并孵育5分钟；接着在第一试剂管内加入第二检测液加入60 μ L混合均匀并孵育12分钟，同时在第二试剂管内加入第二检测液加入60 μ L混合均匀并孵育12分钟，同时在第三试剂管内加入第二检测液加入60 μ L混合均匀并孵育12分钟；最后分别读取第一试剂管、第二试剂管、第三试剂管的吸光度，将吸光度与已知浓度的标准液比较，从而得出人血清中25-羟基维生素D的浓度。所述孵育时的温度均为37°C。
[0013]本实施例的一种25-羟基维生素D测定试剂盒及其使用方法，其通过胶乳增强免疫比浊法法，操作简单，准确性高，便于推广。
[0014]实施例2 一种25-羟基维生素D测定试剂盒，包括第一检测液、第二检测液、稀释液、缓冲液，第一检测液包括β半乳糖苷酶供体肽25-羟基维生素D结合物、第一检测液聚乙二醇，原材料浓度比份为:β半乳糖苷酶供体肽25-羟基维生素D结合物:第一检测液聚乙二醇=28:0.8 ;第二检测液包括β半乳糖苷酶受体肽硝基苯-β-半乳糖苷结合物、第二检测液聚乙二醇，原材料浓度比份为半乳糖苷酶受体肽硝基苯半乳糖苷结合物:第二检测液聚乙二醇=13:0.8 ;稀释液包括鼠抗人维生素D抗体胶乳颗粒、稀释液聚乙二醇，原材料浓度比份为:鼠抗人维生素D抗体胶乳颗粒:稀释液聚乙二醇=23:0.8 ;缓冲液包括柠檬酸、柠檬酸三钠、缓冲液聚乙二醇、聚碳酸酯，原材料浓度比份为:柠檬酸:柠檬酸三钠:缓冲液聚乙二醇:聚碳酸酯=48:43:4:0.8。
[0015]第一检测液聚乙二醇、第二检测液聚乙二醇、稀释液聚乙二醇、缓冲液聚乙二醇均为聚乙二醇6000。
[0016]一种25-羟基维生素D测定试剂盒的使用方法，包括如下步骤:首先检测样本20 μ L，稀释液155 μ L，混合均匀，得到稀释后检测液；接着准备第一试剂管、第二试剂管、第三试剂管