一种建立鉴别土壤样品来源筛选库的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种建立鉴别±壤样品来源筛选库的方法，属于±壤检测分析技术领 域。
【背景技术】
[0002] ±壤是地球表面的主体，由岩石经过长期的自然侵蚀而形成一种质地较为疏松的 物质，主要由很多层厚度不同的矿物质构造而成。±壤中的组成元件种类繁多，所含各种化 学成分的结构、性质和功能都十分复杂，能够为地球表面上植物的生长和生态循环中能量 的交换提供丰富的营养物质和充足的水分。由于±壤一直不断的遭受着例如气候、早期形 成的纹理、微生物环境和人类活动等各种物理、化学和生物等因素的影响，因此，形成了不 同来源地的±壤具有不同的特异性。
[0003] ±壤之所W能成为法医学追踪证据的五个主要形式之一，是因为它具有的复杂而 明显的地域性特征，运些特征因为±壤地理区域位置的不同而具有不同的特性。
[0004] 目前，关于±壤作为法医学追踪微量证据的研究，国外已有了相对简单的应用，而 在国内却并未发现相关的研究报道。
【发明内容】
[0005] 本发明针对现有技术的不足，提供一种建立鉴别±壤样品来源筛选库的方法。
[0006] 本发明的技术方案如下：
[0007] -种建立鉴别±壤样品来源筛选库的方法，包括如下步骤：
[000引 （1)取已知来源的上壤样品，使用口塞尔比色卡检测样品颜色，将上样与带标准色 阶的卡片相对照，检测±壤颜色，根据检测结果进行分类；
[0009] W口塞尔标准色卡为对照，当样品主色调为红色时，样品被鉴定为红色上壤；当样 品主色调为黄色时，样品被鉴定为黄色±壤；当样品主色调为黑色，样品被鉴定为黑色± 壤；
[0010] (2)采用标准吸管法检测样品的粒径，根据检测结果进行分类；
[0011] 当检测结果为50~2000ym时，为砂质±壤；当检测结果为2~50ym时，为壤质 ±壤；当检测结果小于2ym时，为黏质±壤；
[0012] (3)将样品采用扫描电子显微镜对扫描图像进行检测，计算颗粒平均面积S， 并分别归入S< 100ym2、100ym2《S< 200ym2、200ym2《S< 300ym2、300ym2《S < 400]im2、400iim2《S < 500]im2、500iim2《S < 600]im2、600iim2《S < 700]im2、 700ym2《S组中；
[001引 （4)采用能谱法检测±壤样品，对化、Ca、Fe、Ti元素进行分组建库；
[0014] 化质量含量低于0. 5%为低钢区，化质量含量为0. 5~1. 5%为中钢区，化质量含 量高于1. 5%为高钢区；化质量含量低于1%为低巧区，化质量含量为1~5%为中巧区， 化质量含量高于5%为高巧区；化质量含量低于3%为低铁区，化质量含量为3~7%为 中铁区，化质量含量高于7%为高铁区；Ti质量含量低于0. 05%为极低铁区，Ti质量含量 为0. 05~0. 5%为低铁区，Ti质量含量为0. 5~1. 0%为中铁区，Ti质量含量高于1. 0% 为局铁区；
[001引妨将样品采用红外色谱法检测，定性分析样品中特殊的化学官能团，分析±壤中 含有的化合物并进行分类；
[0016] (6)提取样品中的DNA，进行巧光引物PCR，然后经琼脂糖凝胶电泳纯化，经限制性 内切酶MspI酶切，根据T-RFLP图谱中优势T-Fs的有效片段长度的差异，对样品进行分 类；
[0017] (7)分别将不同的样品按照步骤（1)~（6)的方式进行分类，根据样品的来源地对 应不同分类，建立鉴别±壤样品来源筛选库。
[001引根据本发明优选的，所述步骤巧）中，±壤中含有的化合物检测结果分类如下：
[0019] 当含有468. 6~457cm1峰时，含有C-X基团，为有机面素化合物；
[0020] 当含有484~532cm1峰时，含有P-C1基团，为有机憐化合物；
[002。 当含有1612~1616cm1峰时，含有C=C基团，为締控类物质、含苯环类物质；
[0022] 当含有3107~3448cm1峰时，含有NH基团，为酷胺类化合物；
[0023] 当含有740~779cm1峰时，含有0-N= 0基团，为亚硝酸化合物；
[0024] 当含有1379~1436cm1峰时，含有C-N= 0基团，为亚硝基化合物；
[00巧]当含有1014~1024cm1峰时，含有C-0-C基团，为酸、醋类有机物；
[0026] 当含有3591~3626cm1峰时，含有0H基团，为醇、酪类有机物。
[0027] 根据本发明优选的，所述步骤化）中，有效片段为长度在50~650bp之间，且Ap 值大于1 %的片段。
[0028] 根据本发明优选的，所述步骤化）中，PCR扩增引物序列如下：
[0029] FAM-27f:5< -AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3';
[0030] 149化：5'-CGGCTACCTTGTTACGACTT-3';
[003。PCR扩增体系如下，总体系50yL:
[0032] Mix缓冲液 恐PL 引物巧F-FAMipL 引物1錢雄 2pL
[0033] 基因组总DNA 2nL dd也0 IQuL；
[0034] PCR扩增程序如下：
[0035] 在 94°C下预变性 3min，94°C下变性 30S，54°C退火 30S，72°C延伸lmin20S，进行 36 个循环后，72°C补延伸lOmin。
[0036] 上述鉴别±壤样品来源筛选库在鉴别±壤样品来源中的应用。
[0037] 上述应用，步骤如下：
[003引 讯取未知来源的上壤样品，使用口塞尔比色卡检测样品颜色，将上样与带标准色 阶的卡片相对照，检测±壤颜色，根据检测结果进行分类；
[0039]W口塞尔标准色卡为对照，当样品主色调为红色时，样品被鉴定为红色上壤；当样 品主色调为黄色时，样品被鉴定为黄色±壤；当样品主色调为黑色，样品被鉴定为黑色± 壤；
[0040] (II)采用标准吸管法检测样品的粒径，根据检测结果进行分类；
[0041] 当检测结果为50~2000ym时，为砂质±壤；当检测结果为2~50ym时，为壤质 ±壤；当检测结果小于2ym时，为黏质±壤；
[0042] (III)将样品采用扫描电子显微镜对扫描图像进行检测，计算颗粒平均面积S， 并分别归入S< 100ym2、100ym2《S< 200ym2、200ym2《S< 300ym2、300ym2《S < 400]im2、400iim2《S< 500]im2、500iim2《S< 600]im2、600iim2《S< 700]im2、 700ym2《S组中；
[0043] (IV)采用能谱法检测±壤样品，对化、CaJe、Ti元素进行分类；
[0044] 化质量含量低于0. 5%为低钢区，化质量含量为0. 5~1. 5%为中钢区，化质量含 量高于1. 5%为高钢区；化质量含量低于1%为低巧区，化质量含量为1~5%为中巧区， 化质量含量高于5%为高巧区；化质量含量低于3%为低铁区，化质量含量为3~7%为 中铁区，化质量含量高于7%为高铁区；Ti质量含量低于0. 05%为极低铁区，Ti质量含量 为0. 05~0. 5%为低铁区，Ti质量含量为0. 5~1. 0%为中铁区，Ti质量含量高于1. 0% 为高铁区；
[004引 （V)将样品采用红外色谱法检测，定性分析样品中特殊的化学官能团，分析±壤中 含有的化合物并进行分类；
[0046] (VI)提取样品中的DNA，进行巧光引物PCR，然后经琼脂糖凝胶电泳纯化，经限制 性内切酶MspI酶切，根据T-RFLP图谱中优势T-Fs的有效片段长度的差异，对样品进行分 类；
[0047] (VII)按照步骤（I)~（VI)检测分类后，与鉴别±壤样品来源筛选库进行对比，当 与鉴别±壤样品来源筛选库中的标准品相同时，则该未知±壤样品来源即为该标准品的来 源。
[004引根据本发明优选的，所述步骤（V)中，±壤中含有的化合物检测结果分类如下：
[0049] 当含有468. 6~457cm1峰时，含有C-X基团，为有机面素化合物；
[0050] 当含有484~532cm1峰时，含有P-C1基团，为有机憐化合物；
[005。 当含有1612~