血清高密度脂蛋白中胆固醇的测定试剂的利记博彩app
【技术领域】
[0001] 本发明属于医学及生物化学技术领域，尤其涉及血清高密度脂蛋白中胆固醇的测 定试剂。
【背景技术】
[0002] 血清胆固醇浓度可作为人体脂类代谢的标志。高密度脂蛋白胆固醇（HDL)是体 积最小的脂蛋白，和其他脂蛋白相比，HDL含蛋白量最大（>50% )，其主要的载脂蛋白为 APOA- I、A- II、及少量的APO-C、E ;磷脂是其主要的脂质，还有少量的胆固醇、胆固醇酯 和甘油三酯在卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT)的作用下，游离胆固醇变成胆固醇酯，经过 HDL将蓄积在组织的游离胆固醇运送到肝，减少血浆HDL中游离胆固醇的浓度，形成胆固醇 从细胞膜流向血浆脂蛋白的浓度梯度，降低组织胆固醇的沉积，从而限制动脉粥样硬化的 发生、发展，起到抗动脉粥样硬化作用。所以，血浆中HDL和动脉粥样硬化的发生成负相关， 临床医学可用HDL-C来评价患冠心病（CHD)的危险性。
[0003] 对高密度脂蛋白胆固醇的传统测定方法有超速离心法、电泳法以及沉淀法，超速 离心法是根据脂蛋白的比重不同，用超速离心器把脂蛋白进行分类，再对胆固醇进行测定， 该方法通过超速离心和胆固醇检测两个过程，费时费力，且费用较高；电泳法需要借用一些 如琼脂糖凝胶等作为载体分离，操作及其繁杂，且准确度偏低；沉淀法是使用多聚阴离子和 二价金属离子试剂沉淀大颗粒的脂蛋白，然后离心，再用其上清液检测其含量，该方法虽然 简便，但仅限于个别或少数样本检测，而且对高甘油三酯血症患者检测时，会造成结果偏高 的误差，影响最终判断结果。
[0004] 近年来，随着临床医学的深入发展，高密度脂蛋白胆固醇检测（HDL-C)已实现了 全自动化，而HDL-C试剂是实现全自动检测的关键，其品质高低直接影响了检测数据的准 确性。目前，有关HDL-C试剂的报道较多，如专利CN 1632541 A公开了高密度脂蛋白中胆固 醇的测定试剂及制备方法，披露了由"适量防腐剂、稳定剂、色原、高亲和性酶化合物和表面 活性剂"制成的HDL-C试剂，该试剂实现了高密度脂蛋白中胆固醇全自动检测，解决了传统 检测方法存在的不足，并且提高了检测准确度，相关性达到0.98以上；CN 1696659 A公开 了一种测定低密度脂蛋白胆固醇试剂及制备方法，披露了由"适量缓冲液、稳定剂、色原、高 亲和性酶化合物和表面活性剂"制成的试剂，该试剂实现了低密度脂蛋白中胆固醇全自动 检测，解决了传统检测方法存在的不足，并且提高了检测准确度，相关性达到〇. 98以上。上 述两篇文件均公开了由高亲和性酶化合物作检测物质的技术方案，但该两篇文件中的高亲 和性酶化合物制备方法简单，制备时没有对酶进行活化处理，存在酶与化合物反应时间长， 且反应不充分，进而影响了酶化合物的整体性能与产量。此外，有关高密度脂蛋白中胆固醇 的测定试剂的报道都采用高分子量化学成分制备，化合物制备价格高且纯度低，进而影响 检测结果。如专利CN 102041296 A公开的一种血清低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C)匀相法 体外诊断试剂；CN 101078729 A公开的高密度脂蛋白胆固醇的测定方法等。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于：提供一种血清高密度脂蛋白中胆固醇的测定试剂，通过酶的 选择、预培养、活化培养及脱水反应等步骤提高酶的活性，再与经催化活化处理的化合物混 合反应，提高测定试剂灵敏度，进而提高检测结果准确性。
[0006] 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0007] 血清高密度脂蛋白中胆固醇的测定试剂，包括适量防腐剂、稳定剂、色原、高亲和 性酶化合物、表面活性剂、牛血清白蛋白，其特征在于：所述的高亲和性酶化合物是按照以 下方法制备得到：
[0008] 1)酶的活化：
[0009] ①酶的选择：胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶和脂蛋白脂酶，三者按照5~1 :1~5 : 1~1. 5的比例混合；
[0010] ②酶的预培养：将上述混合酶置于温度32~39°C、pH值5. 5~8的缓冲溶液中预 培养3~8小时，其中，所述的缓冲溶液是磷酸盐缓冲溶液或柠檬酸缓冲溶液；
[0011] ③酶的活化培养：经预培养的混合酶转入由牛血清白蛋白、甘油、环糊精、 EDTA-Na溶液、青霉素及无菌水混合液中，在温度34~39°C条件下活化培养5~10小时， 得到活化酶混合缓冲液A ;
[0012] ④脱水反应：采用吸水剂制备过滤柱，将上述活化酶混合缓冲液A缓慢流经过滤 柱，除去活化酶混合缓冲液中加入的游离水，并随时调节缓冲液pH值，使其维持在5. 5~ 8 ；
[0013] 2)制备高亲和性酶化合物
[0014] ①化合物选择：甾类糖苷、三萜烯糖苷、蛋白质毒素和多烯类抗菌素中的一种或多 种组合化合物组合，并且化合物采用公知手段进行催化活化，得到活化化合物组合物B ;
[0015] ②混合反应：将步骤1)得到的活化酶混合缓冲液A和步骤2)得到的活化化合物 组合物B混合，并补充适量的缓冲溶液，在32~39°C条件下混合反应3~10小时，得到高 亲和性酶化合物。
[0016] 进一步，所述的血清高密度脂蛋白中胆固醇的测定试剂由以下百分比的组分制 成：高亲和性酶化合物68~73%、牛血清白蛋白23~30%、表面活性剂2. 4~2. 7%、防 腐剂1. 3~1. 5%、稳定剂I. 1~1. 5%、色原0. 2~0. 3%，以上组合总量为100%。
[0017] 进一步，所述的活化酶混合缓冲液A与活化化合物组合物B混合比例为：1~2 : 3 ~10〇
[0018] 进一步，在步骤③酶的活化培养中，所述的混合液组分配比为：牛血清白蛋白 50~60 %、甘油5~8%、β -环糊精1~3%、EDTA-Na溶液1~L 5 %、青霉素0· 5~ 0· 8%、无菌水34~37%。
[0019] 与现有血清高密度脂蛋白中胆固醇的测定试剂相比，本发明的有益效果在于：
[0020] 1、该试剂能够在各种型号的全自动生化分析仪上对高密度脂蛋白中胆固醇进行 检测，无需样本离心、沉淀等繁杂操作，大幅降低了检测工作量，缩短了检测时间，降低了检 测成本。
[0021] 2、该试剂性质稳定，在2~8°C条件下稳定12个月以上，不会出现试剂浑浊，变质 腐坏及凝聚现象，使用时仅需轻轻振荡摇匀即可。
[0022] 3、该试剂特异性好、灵敏度高，检测准确率高，与国家推荐的Friedewald公式检 测结果比较，相关性达到0. 997以上。
【具体实施方式】
[0023] 下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步说明，旨在帮助同领域技术人 员理解。
[0024] 实施例1
[0025] 血清高密度脂蛋白中胆固醇