一种脑钠肽胶体金检测试剂盒的利记博彩app
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物检测领域，特别是涉及一种脑钠肽胶体金检测试剂盒及其制备方 法和用途。
【背景技术】
[0002] 脑钠肽（Brain Natriuretic Peptide, BNP)又称B 型利钠肽（B-type Natriuretic P印tide)、脑利钠肽，是继心钠肽（ANP)后利钠肽系统的又一成员，由于它首先是由日本学 者Sudoh等于1988年从猪脑分离出来因而得名，实际上它主要来源于心室。BNP具有重要 的病理生理学意义，它可以促进排钠、排尿，具较强的舒张血管作用，可对抗肾素-血管紧 张素-醛固酮系统（RAAS)的缩血管作用，同ANP-样是人体抵御容量负荷过重及高血压的 一个主要内分泌系统。心功能障碍能够极大地激活利钠肽系统，心室负荷增加导致BNP释 放。
[0003] BNP同ANP均是肾素血管紧张素-醛固酮系统（RAAS)的天然拮抗剂，亦抵制后叶 加压素及交感神经的保钠保水、升高血压作用。BNP主要在心室合成，在心室负荷过重或扩 张时增加；因此反映心室功能改变更敏感、更具特异性。越来越多的文献支持在心肌梗死 (MI)后测定BNP，这不仅可识别有无左心收缩功能不全，而且在判断左室重构和死亡危险 方面可能优于心超声诊断。在临床实际工作中，BNP还有助于将心衰引起的气喘和其它原 因引起的气喘区分开，所以测定血浆BNP浓度可以为临床提供许多有用的信息。
【发明内容】
[0004] 鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种脑钠肽胶体金检测试 剂盒及其制备方法和用途，用于解决现有技术中的问题。
[0005] 为实现上述目的及其他相关目的，本发明采用以下技术方案：
[0006] 本发明的第一方面，提供一种脑钠肽胶体金检测试剂盒，包括试纸卡，所述试纸卡 包括底板、及位于底板表面的从加样端开始依次排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸 水垫，所述金标垫上包含胶体金标记的抗脑钠肽单克隆抗体-1，所述硝酸纤维素膜上包被 有检测线和质控线。
[0007] 优选的，所述底板为PVC底板。
[0008] 优选的，所述硝酸纤维素膜上，检测线位于离加样端较近一侧，质控线位于离加样 端较远一侧。
[0009] 优选的，所述检测线上包被有抗脑钠肽单克隆抗体-2。
[0010] 优选的，所述质控线上包被有羊抗鼠免疫球蛋白IgG。
[0011] 所述抗脑钠肽单克隆抗体-1和抗脑钠肽单克隆抗体-2可以是相同的单克隆抗 体，也可以是不同的单克隆抗体。
[0012] 优选的，所述抗脑钠肽单克隆抗体-1为Abcamll Anti-BNP抗体 [EP3737 (2) ]-C-terminal，所述抗脑钠肽单克隆抗体-2为AbcamK Anti-BNP抗体
[EPR3735]，或所述抗脑钠肽单克隆抗体-1为Abeam翁Anti-BNP抗体[EPR3735]，所述抗脑 钠肽单克隆抗体 _2 为 Abeam? Anti-ΒΝΡ 抗体[EP3737 (2) ] -C-terminal。
[0013] 优选的，所述样品垫采用缓冲液处理，所述缓冲液选自PBS缓冲液、Tris-HCl缓冲 液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液和柠檬酸-磷酸盐缓冲液中的一种或多种的组合，缓冲液 的浓度为50-100mM。
[0014] 优选的，本发明所述的金标垫还经过预处理，预处理时所使用的预处理缓冲液选 自甘氨酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、硼酸盐缓冲液的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为 10-40mM〇
[0015] 更优选的，为了使得试剂盒具有更佳的灵敏度和显色效果，所述缓冲液还包括 NaCl和冠醚，所述冠醚选自二环已基-18-冠-6、15-冠醚-5、18-冠醚-6中的一种或多种 的组合，NaCl在缓冲液中的浓度为0. l-20mg/ml，冠醚在缓冲液中的浓度为0. l-20mg/ml。
[0016] 更优选的，NaCl在缓冲液中的浓度为0. 25-0. 5mg/ml，冠醚在缓冲液中的浓度为 4_8mg/ml〇
[0017] 所述预处理缓冲液的溶剂为水。
[0018] 所述预处理的具体步骤为：将金标垫在预处理液中浸泡1. 5~2h，取出放于36~ 38°C烘干。
[0019] 所述预处理缓冲液可使用本领域各种常用的pH调节剂进行pH值的调节。
[0020] 优选的，所述试剂盒还包括卡壳，所述卡壳包括背卡和上盖，所述背卡设有试纸卡 卡槽，所述试纸卡嵌于所述试纸卡卡槽内，所述上盖设有测试窗和加样孔，所述测试窗的位 置与所述检测线和质控线的位置相配合，所述加样孔的位置与所述样品垫的位置相配合。
[0021] 更优选的，所述卡壳为塑料卡壳。
[0022] 优选的，所述检测试剂盒用于检测样品中的脑钠肽，所述样品选自人全血、血清或 血浆中的一种或多种的组合。
[0023] 本发明第二方面提供所述脑钠肽胶体金检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：
[0024] 1)用胶体金标记的抗脑钠肽单克隆抗体-1溶液喷涂金标垫，制得包含抗脑钠肽 单克隆抗体-1的金标垫；
[0025] 2)在硝酸纤维素膜的检测线和质控线上分别喷涂抗脑钠肽单克隆抗体-2及羊抗 鼠免疫球蛋白IgG，制得包被后的硝酸纤维素膜；
[0026] 3)将样品垫、步骤1)制备金标垫、步骤2)制备的硝酸纤维素膜、吸水垫依次粘贴 在底板上，切裁制得检测试纸卡；最后将检测试纸卡装入卡壳制得检测试剂盒。
[0027] 优选的，本发明所述的金标垫还经过预处理，预处理时所使用的预处理缓冲液选 自甘氨酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、硼酸盐缓冲液的一种或多种的组合，缓冲液的浓度为 10-40mM〇
[0028] 更优选的，为了使得试剂盒具有更佳的灵敏度和显色效果，所述缓冲液还包括 NaCl和冠醚，所述冠醚选自二环已基-18-冠-6、15-冠醚-5、18-冠醚-6中的一种或多种 的组合，NaCl在缓冲液中的浓度为0. l-20mg/ml，冠醚在缓冲液中的浓度为0. l-20mg/ml。
[0029] 更优选的，NaCl在缓冲液中的浓度为0. 25-0. 5mg/ml，冠醚在缓冲液中的浓度为 4_8mg/ml〇
[0030] 所述预处理缓冲液的溶剂为水。
[0031] 所述预处理的具体步骤为：将金标垫在预处理液中浸泡I. 5~2h，取出放于36~ 38°C烘干。
[0032] 所述预处理缓冲液可使用本领域各种常用的pH调节剂进行pH值的调节。
[0033] 本发明第三方面提供所述脑钠肽胶体金检测试剂盒在脑钠肽检测领域的用途。
[0034] 本发明的有益效果为：
[0035] 本发明所提供的脑钠肽胶体金检测试剂盒兼具高灵敏性和高特异性，能够快速检 测脑钠肽。此外，所述检测试剂盒具有操作快速简便、结果准确、经济适用等优点。
【具体实施方式】
[0036] 以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书 所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实 施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离 本发明的精神下进行各种修饰或改变。
[0037] 在进一步描述本发明【具体实施方式】之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下 述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体 实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围；在本发明说明书和权利要求书中，除非文中 另外明确指出，单数形式"一个"、"一"和"这个"包括复数形式。
[0038] 当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端 点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和 科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、 材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本 发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实 现本发明。
[0039] 除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术 领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技 术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook 等 MOLECULAR CLONING :A LABORATORY MANUAL，Second edition，Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989and Third edition，2001;Ausubel 等，CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY,John ffiley&Sons,New York,1987and periodic updates ；the series METHODS IN ENZYM0L0GY,Academic Press,San Diego ；ffolffe,CHROMATIN STRUCTURE AND FUNCTION，