用于分析白细胞的试剂、体系及方法
【专利说明】用于分析白细胞的试剂、体系及方法
[0001] 交叉引用
[0002] 本申请要求2013年3月12日提交的美国临时专利申请第61/777, 966号的权益， 该申请通过引用整体并入本文。
[000引背景
[0004] 使用自动血液分析仪精确计数并分类全血样品中的白细胞（WBC)是一个重要的 诊断过程。通常，通过同时裂解全血样品中的红细胞（RBC，红血球（WTt虹ocyte))并保存 全血样品中的WBC来实现WBC分析。现代血液分析仪中通常需要一种或多种WBC试剂来进 行该些功能并有助于WBC的分析。
[0005] WBC计数和差异化的质量高度依赖于用来进行该分析的方法和相关试剂。配制稳 健的WBC分析试剂仍是血液学行业的最大挑战之一。原则上，稳健的WBC试剂导致准确的 WBC分析。理想地，精屯、配制的WBC试剂应有助于（1)在标准条件下彻底裂解红细胞（RBC)， 通常在约30秒或更少的时间框架中；（2)将大的红细胞片段破坏或溶解成较小的块；和
[3] 保护来自RBC裂解工艺的WBC，使得WBC能够被精确地计数并适当地分类。
[0006] 如果血样不能充分裂解，那么未裂解的RBC(即使是非常小的百分比或浓度）或较 大的RBC片段能够干扰WBC分析，因为使用传统的WBC分析技术难W从淋己细胞（最小的 WBC)中分离或区分RBC或较大的RBC。如果血液样本被过裂解，那么通过过度损坏WBC的 细胞膜会大大影响WBC的分类。因此，需要能够实现该些目标的改善的WBC的分析试剂、体 系和方法。
[0007] 发明概述
[000引本公开的各方面包括可W用于分析全血样品W鉴定、分类和/或定量样品中的白 血球（WBC)和WBC亚群的WBC分析试剂、体系和方法。本发明的WBC分析试剂通常包括至 少一种膜可渗透的巧光染料、WBC保护剂和表面活性剂。在一些实施方案中，所述WBC试剂 包括适量的渗透压调节组分来调节所述WBC试剂的渗透压至所需的范围之内。
[0009] 在一些实施方案中，本公开提供了使用自动血液分析仪进行白血细胞（WBC)分析 的方法，所述方法包括；（a)用WBC分析试剂稀释全血样品，其中所述WBC分析试剂包含：标 记样品中的多个含核细胞的膜可渗透的巧光染料；和当使用血液分析仪分析时将多个WBC 亚群彼此分离的渗透压调节组分；化）在范围为约30°C至约50°C的温度下解育步骤（a)的 稀释血样小于约25秒的解育时间；（C)将来自步骤化）的经解育的样品递送至血液分析仪 的流动池；（d)当来自步骤（C)的经解育的样品穿过流动池时，使用激发源将所述样品激 发；（e)收集来自被激发的样品的多个光散射信号和至少一个巧光发射信号；和（f)进行基 于在步骤（e)中收集的所有信号的WBC差异分析，同时基于所述至少一个巧光发射信号排 除对所述稀释血样内的不满足巧光阔值的任何颗粒的考虑。
[0010] 在一些实施方案中，所述激发源具有约350nm至约700nm的波长。在一些实施方 案中，所述巧光发射信号通过带通滤光器或长通滤光器在约360nm至约750nm的波长下收 集。在一些实施方案中，所述试剂中的膜可渗透的巧光染料为町晚澄、舰化己锭、SYT0RNA Select、SYT0 12或SYT0 14。在一些实施方案中，所述试剂中的膜可渗透的巧光染料的浓 度范围为约0. 0001%至约0. 0005%。在一些实施方案中，所述试剂中的膜可渗透的巧光染 料的浓度为约0. 01uM至约15uM。在一些实施方案中，所述渗透压调节组分为氯化锭或氯 化钢。在一些实施方案中，所述渗透压调节组分的浓度范围为约0.1%至约0.5%。在一些 实施方案中，所述试剂还包含WBC保护剂。在一些实施方案中，所述WBC保护剂为甲醒、戊 二醒、了氧基己醇、苯氧基己醇或异丙醇。在一些实施方案中，所述WBC保护剂的浓度范围 为约0.1%至约1.0%。在一些实施方案中，所述WBC分析试剂还包含表面活性剂。在一些 实施方案中，所述表面活性剂为皂角巧。在一些实施方案中，所述表面活性剂的浓度范围为 约0.01 %至约0.05%。在一些实施方案中，所述试剂还包括pH缓冲组分。在一些实施方案 中，所述抑缓冲组分为醋酸钢或碳酸氨钢。在一些实施方案中，所述抑缓冲组分的浓度范 围为约0.01%至约0.5%。在一些实施方案中，所述试剂还包含抗微生物剂。在一些实施 方案中，所述抗微生物剂为proclin。在一些实施方案中，所述抗微生物剂的浓度范围为约 0.01%至约0. 1%。在一些实施方案中，所述WBC分析试剂的抑范围为约2. 5至约12. 5抑 单位。在一些实施方案中，所述WBC分析试剂的渗透压范围为约25至约350m0sm。
[0011] 在一些实施方案中，本公开提供了用于对全血样品进行白血细胞（WBC)差异分析 的体系，所述体系包括；(a)血液分析仪，所述血液分析仪包括；被布置成激发血样中颗粒 的激发源；多个检测器，包括（1)被布置成测量来自被激发的血样的轴向光损失的轴向光 损失检测器、（2)被布置成测量来自被激发的血样的中等角度散射的中等角度散射检测器、 (3)被布置成测量来自被激发的血样的大角度偏振侧向散射的偏振侧向散射检测器、（4) 被布置成测量来自被激发的血样的大角度消偏振侧向散射的消偏振侧向散射检测器和巧） 被布置成测量自被激发的血样发射的巧光的巧光检测器；和处理器，其被配置成；（1)从多 个检测器接收（1)轴向光损失、（2)中等角度散射、（3)大角度偏振侧向散射、(4)大角度消 偏振侧向散射和（5)巧光的测量结果，W及（II)基于所有五个测量，针对发射高于巧光阔 值的巧光的颗粒进行血样的WBC差异分析；和化）用于分析所述样品中WBC的试剂，所述试 剂包含：膜可渗透的巧光染料；和渗透压调节组分；其中所述膜可渗透的巧光染料的浓度 足W有助于使用所述血液分析仪鉴定含有细胞核的样品中的一种或多种细胞；并且其中所 述渗透压调节组分的浓度足W有助于使用所述血液分析仪鉴定样品中的多个WBC亚群。
[0012] 在一些实施方案中，所述膜可渗透的巧光染料为町晚澄、舰化己锭、SYT0RNA Select、SYT0 12或SYT0 14。在一些实施方案中，所述试剂中膜可渗透的巧光染料的浓度 范围为约0. 0001%至约0. 0005%。在一些实施方案中，所述试剂中的膜可渗透的巧光染料 的浓度范围为约0. 01uM至约15uM。在一些实施方案中，所述渗透压调节组分为氯化锭或 氯化钢。在一些实施方案中，所述渗透压调节组分的浓度范围为约0.1%至约0.5%。在一 些实施方案中，所述试剂还包含WBC保护剂。在一些实施方案中，所述WBC保护剂为甲醒、 戊二醒、了氧基己醇、苯氧基己醇或异丙醇。在一些实施方案中，所述WBC保护剂的浓度范 围为约0.1%至约1.0%。在一些实施方案中，所述WBC分析试剂还包含表面活性剂。在一 些实施方案中，所述表面活性剂为皂角巧。在一些实施方案中，所述表面活性剂的浓度范围 为约0.01%至约0.05%。在一些实施方案中，所述试剂还包括抑缓冲组分。在一些实施 方案中，所述抑缓冲组分为醋酸钢或碳酸氨钢。在一些实施方案中，所述抑缓冲组分的浓 度范围为约0.01%至约0.5%。在一些实施方案中，所述试剂还包含抗微生物剂。在一些 实施方案中，所述抗微生物剂为proc1in。在一些实施方案中，所述抗微生物剂的浓度范围 为约0. 01%至约0. 1%。在一些实施方案中，所述试剂的抑范围为约2. 5至约12. 5抑单 位。在一些实施方案中，所述试剂的渗透压范围为约25至约350m0sm。
[0013] 在一些实施方案中，所述处理器被进一步配置成预筛选所接收的测量结果W排除 对不满足巧光阔值的颗粒的考虑。在一些实施方案中，轴向光损失检测器测量在0°散射处 的轴向光损失。在一些实施方案中，中等角度散射检测器测量在约3°至约15°处的光角 散射。在一些实施方案中，所述多个检测器包括一个或多个光电倍增管。在一些实施方案 中，激发源是激光器。在一些实施方案中，激光器在对应于巧光染料的波长下发射光。在一 些实施方案中，选择巧光染料W与激发源相对应。
[0014] 在一些实施方案中，所述体系还包括用于用所述试剂稀释血样的解育子体系 (subsystem)。在一些实施方案中，所述解育子体系被配置成用所述试剂解育血样少于约25 秒的时间段。在一些实施方案中，所述解育子体系被配置成用所述试剂解育血样少于约17 秒的时间段。在一些实施方案中，所述解育子体系被配置成用所述试剂解育血样少于约9 秒的时间段。在一些实施方案中，所述解育子体系被配置成在范围为约30°C至约50°C的温 度下用所述试剂解育血样。在一些实施方案中，所述解育子体系被配置成在约40°C的温度 下用所述试剂解育血样。
[0015] 在一些实施方案中，本公开提供了用于使用血液分析仪分析全血样品中的白血细 胞（WBC)的试剂，所述试剂包含：足W有助于使用所述血液分析仪鉴定含有细胞核的样品 中多个细胞的浓度的膜可渗透的巧光染料；和足W有助于使用所述血液分析仪鉴定样品中 的多个WBC亚群的浓度的渗透压调节组分。
[0016] 在一些实施方案中，所述膜可渗透的巧光染料为町晚澄、舰化己锭、SYTORNA Select、SYTO12或SYTO14。在一些实施方案中，所述试剂中的膜可渗透的巧光染料的浓 度范围为约0. 0001%至约0. 0005%。在一些实施方案中，所述试剂中的膜可渗透的巧光染 料的浓度范围为约O.OluM至约15UM。在一些实施方案中，所述渗透压调节组分为氯化 锭或氯化钢。在一些实施方案中，所述渗透压调节组分的浓度范围为约0. 1 %至约0. 5%。 在一些实施方案中，所述试剂还包含WBC保护剂。在一些实施方案中，所述WBC保护剂为甲 醒、戊二醒、了氧基己醇、苯氧基己醇或异丙醇。在一些实施方案中，所述WBC保护剂的浓度 范围为约0.1%至约1.0%。在一些实施方案中，所述WBC分析试剂还包含表面活性剂。在 一些实施方案中，所述表面活性剂为皂角巧。在一些实施方案中，所述表面活性剂的浓度范 围为约0. 01 %至约0. 05%。
[0017] 在一些实施方案中，所述试剂还包括pH缓冲组分。在一些实施方案中，所述pH缓 冲组分为醋酸钢或碳酸氨钢。在一些实施方案中，所述抑缓冲组分的浓度范围为约0. 01 % 至约0.5%。在一些实施方案中，所述试剂还包含抗微生物剂。在一些实施方案中，所述 抗微生物剂为proclin。在一些实施方案中，所述抗微生物剂的浓度范围为约0.01%至约 0.1%。在一些实施方案中，所述WBC分析试剂的抑范围为约2. 5至约12. 5抑单位。在一 些实施方案中，所述WBC分析试剂试剂的渗透压范围为约25至约350m0sm。
【附图说明】
[0018] 并入本文的附图形成了说明书的部分。结合此书面说明书，附图还起到解释本文 所述的试剂、体系和方法的原理，并使本领域技术人员能够配制并使用本文所述的试剂、体 系和方法。附图中，相似的附图标