地表水体中若干种痕量糖皮质激素及其衍生物的检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及化学物质的检测方法，特别是设及一种采用超高效液相色谱质谱串联 法对地表水样中糖皮质激素及其衍生物（包括天然糖皮质激素、醋化糖皮质激素和面代糖 皮质激素）的检测方法。
【背景技术】
[0002] 内分泌干扰物质的一种是近几十年环境科学领域关注的重点，其可W干扰机体内 分泌系统从而对人体和动物的内分泌干扰系统造成影响，近几十年女性子宫癌发病率上 升、儿童性成熟提前、新生儿免疫力下降都被证明与内分泌干扰物质相关。糖皮质激素及其 衍生物作为内分泌干扰物质的一类，是目前广受关注的新型内分泌干扰物质，研究发现糖 皮质激素及其衍生物在ng/L的浓度水平下就可对生物的免疫、生殖和免疫系统造成损害， 严重的可导致生殖受损和发育缺陷等问题，处于糖皮质激素的暴露下的鱼类可能会引发机 体免疫反应抑制、生长抑制和生理状况恶化等情况。鉴于糖皮质激素与雌激素、雄激素和孕 激素结构的相似性，其生物效应可能会发生交叉，如有研究表明两种糖皮质激素；氨化可的 松和泼巧松可能导致雌性食蚊鱼的雄性化现象，因此有必要对地表水体中的糖皮质激素及 其衍生物展开研究。
[0003] 地表水体中的糖皮质激素及其衍生物来源较多，主要有：人类日常分泌排放和未 被利用的医疗用糖皮质激素及其衍生物药物，值得注意的是，我国糖皮质激素类药物达到 了滥用的程度，在调查的医院中使用率超过20%，个别医院超过50%。另外畜牧业由于动 物数量巨大，日常分泌排放量也十分可观，且一些糖皮质激素类药物如地塞米松被广泛使 用于畜牧业养殖，其产生的进入水体中的糖皮质激素量十分庞大，另外一些激素合成工业 的废水废渣也是不容忽视的污染来源。
[0004] 鉴于糖皮质激素及其衍生物对人类和动物机体产生的危害W及其在人类接触密 切的地表水体中的广泛存在，另外地表水体样品具有复杂的基质特征，可对检测灵敏度产 生较大干扰，且水体中糖皮质激素含量可达到极低的ng/L级别，使得地表水体中的糖皮质 激素检测方法较为匿乏。目前环境激素的检测方法主要有气相色谱串联质谱串联法、液相 色谱串联质谱串联法W及免疫分析法等，但都存在着灵敏度低、衍生化困难、不适用于大规 模操作等弊端。因此本发明利用固相萃取激素结合超高效液相色谱质谱串联技术建立灵敏 度高、简便易用、可检测多种物质的糖皮质激素及其衍生物检测方法。
【发明内容】
[0005] 为了解决现有技术存在的困难，本发明针对水环境中基质复杂，糖皮质激素及其 衍生物含量极低，检测难度大等问题，提供了一种高效、简便、经济的分析方法，实现对地表 水体样品中常见的糖皮质激素及其衍生物的测定。
[0006] -种地表水体中若干种痕量糖皮质激素及其衍生物的检测方法，包括如下步骤：
[0007] (1)水体样品的预处理；将水体样品过滤后进行固相萃取；
[0008] (2)采用超高效液相色谱-质谱串联方法对水体样品的萃取液进行检测；
[0009] (3)绘制标准曲线，并W外标法进行定量测定，通过换算得到水体样品中痕量糖皮 质激素及其衍生物的浓度。
[0010] 本发明所述的地表水体中若干种痕量糖皮质激素及其衍生物的检测方法，其中， 步骤（2)中所述超高效液相色谱-质谱串联方法中的色谱条件为：
[0011]ACQUITY?超高液相色谱仪、AgilentZorbaxSB-C18 柱（lOOmmX3mm，1. 8ym)和 Micromass-QuattroPremierXE质谱仪，使用MassLynxV4. 1 软件，柱温；40°C;样品温度； 4°C;进样体积；3uL;流动相A;甲醇，流动相B;含0.1% (体积分数）己酸的水溶液，洗 脱程序如下；〇 ~6min，A;35%一 45% ;6 ~12min，A;45%一 80% ;12 ~15min，A;80% 一 95% ;15 ~15.Imin，A;95%一 35%。
[0012] 本发明所述的地表水体中若干种痕量糖皮质激素及其衍生物的检测方法，其中， 步骤（2)中所述超高效液相色谱-质谱串联方法中的质谱条件为：
[0013] 离子源为电喷雾电离采用ESI(-)模式，毛细管电压；3.OOkV，射频透镜1电压； 27. 0V，射频透镜2电压；0. 0V，离子源温度；99°C，脱溶剂温度；450°C，脱溶剂气流量； 600L/h，碰撞梯度；1. 9,采用多选择反应监测转换模式MRM。
[0014] 本发明所述的地表水体中若干种痕量糖皮质激素及其衍生物的检测方法，其中， 所述水体样品的预处理包括如下步骤：
[0015] 采集需要检测的地表水体样品，置于栋色玻璃瓶中运回实验室，为避免固相萃取 柱的堵塞，1.化水体样品首先经过1. 2ym孔径的Whatman公司GF/C玻璃纤维滤纸过滤，接 着W3~5血/min的流速通过事先用6血己酸己醋、6血己膳和6血超纯水活化的HLB固相 萃取柱，水体样品全部通过固相萃取柱后，用12mL超纯水淋洗固相萃取柱，并用氮气吹干 除尽萃取柱内的水分，再用6mL体积比为1:1的己酸己醋/己膳洗脱HLB固相萃取柱，收集 洗脱液利用微弱氮气吹干，用100yL甲醇重新溶解定容待测，所有萃取富集过程在化内完 成。
[0016] 本发明所述的地表水体中若干种痕量糖皮质激素及其衍生物的检测方法，其中， 所述糖皮质激素及其衍生物为泼巧松、可的松、氨化可的松、泼巧松龙、氣米松、地塞米松、 曲安西龙、醋酸氣氨可的松、曲安奈德、甲泼巧龙、倍氯米松、醋酸可的松、醋酸氨化可的松、 氣米龙、醋酸地塞米松、布地奈德和丙酸氯倍他索。
[0017] 本发明所述的地表水体中若干种痕量糖皮质激素及其衍生物的检测方法，其中， 所述质谱条件中的质谱采集参数如表1所示：
[0018] 表1目标糖皮质激素及其衍生物的质谱采集参数"
[0019]
[0020]
[0021] 1)a表示该碎片离子为定量离子
[0022] 本发明所述的地表水体中若干种痕量糖皮质激素及其衍生物的检测方法，其中， 所述方法还包括：使用糖皮质激素的同位素标样codisol-d4作为过程内标用W校正实际 样品在前处理和检测过程中的损失。
[0023] 本发明地表水体中若干种痕量糖皮质激素及其衍生物的检测方法与现有技术不 同之处在于：
[0024] 本发明地表水体中若干种痕量糖皮质激素及其衍生物的检测方法针对水体样品 的复杂的基质特征和目标物质的极低浓度，针对性的采用过程简单有效的亲水亲油平衡 (HLB)固相萃取柱进行萃取，选择特异性强的MRM转换离子对，采用灵敏度高的超高效液相 色谱串联质谱法进行定量检测，并利用同位素标样codisol-d4校正实验过程中可能产生 的目标物质的损失。本发明提供了一种检出限低、回收效果好、可检测多种物质的分析方 法，能够快速分析水体中的常见糖皮质激素及其衍生物含量。
[00巧]下面结合附图对本发明的地表水体中若干种痕量糖皮质激素及其衍生物的检测 方法作进一步说明。
【附图说明】
[0026] 图1为添加量为lOug/L的泼巧松溶液的色谱图；
[0027] 图2为添加量为lOug/L的可的松和泼巧松龙（两种物质的定量转换离子对相同） 溶液的色谱图；
[0028] 图3为添加量为lOug/L的氨化可的松溶液的色谱图；
[0029] 图4为添加量为lOug/L的氣米松溶液的色谱图；
[0030] 图5为添加量为lOug/L的地塞米松溶液的色谱图；
[0031] 图6为添加量为lOug/L的曲安西龙溶液的色谱图；
[0032] 图7为添加量为lOug/L的醋酸氣氨可的松溶液的色谱图；
[0033] 图8为添加量为lOug/L的曲安奈德溶液的色谱图；
[0034] 图9为添加量为lOug/L的甲泼巧龙溶液的色谱图；
[00巧]图10为添加量为lOug/L的倍氯米松溶液的色谱图；
[0036] 图11为添加量为lOug/L的醋酸可的松溶液的色谱图；
[0037] 图12为添加量为lOug/L的醋酸氨化可的松溶液的色谱图；
[0038] 图13为添加量为lOug/L的氣米龙溶液的色谱图；
[0039] 图14为添加量为lOug/L的醋酸地塞米松溶液的色谱图；
[0040] 图15为添加量为lOug/L的布地奈德溶液的色谱图；
[0041] 图16为添加量为lOug/L的丙酸氯倍他索溶液的色谱图；
[0042]图17为实施例2中检出的糖皮质激素及其衍生物的色谱图；其中色谱图从上至下 依次为；可的松（cortisone)和泼巧松龙（pre化isolone)、氨化可的松（Hy化ocortisone)、 地塞米松值examethasone)、曲安西龙（Triamcinolone)、曲安奈德（Triamcinolone acetonide)、醋酸氨化可的松（Hy化ocortisoneacetate)。
【具体实施方式】
[0043] 实施例1
[0044] -种地表水体中痕量糖皮质激素及其衍生物含量的检测方法，该方法包括如下步 骤：
[0045] (1)地表水体样品的预处理
[0046] 采集1.化的地表水体样品经过1. 2ym孔径的Whatman公司GF/C玻璃纤维滤纸 过滤，接着W3~5血/min的流速通过事先用6血己酸己醋、6血己膳和6血超纯水活化的 亲水亲油平衡（HLB)固相萃取柱，水样全部通过固相萃取（SP巧柱后，用12mL超纯水淋洗 SPE柱，并用微弱氮气吹干除尽萃取柱内的水分，最后用6血己酸己醋/己膳（1:1，V/V)洗 脱HLB固相萃取柱，收集洗脱液利用微弱氮气吹干，用100化甲醇重新溶解定容后待测，所 有萃取富集过程须在化内完成。
[0047] (2)利用超高效液相色谱质谱串联技术对地表水样品的萃取液进行检测
[004引本发明实验仪器和条件为；AC卵ITY?超高液相色谱仪、AgilentZorbaxSB-C18 柱（100mmX3mm,l.Sum)和Micromass-QuattroPremierXE质谱仪，使用MassLynxV4. 1 软件，色谱洗脱条件；柱温；4(TC;样品温度；4°C;进样体积；3yL;流动相A;甲醇，流动相 B;含0. 1 % (体积分数）己酸的水溶液，洗脱程序如表1所示：
[0049] 表2 17种目标糖皮质激素及其衍生物的超高液相色谱分析条件
[0050]
[0051] 质谱条件；离子源为电喷雾电离采用ESI(-)模式，采用多选择反应监测转换模式 (MRM)，毛细管电压；3.OOkV，射频透镜1(RF lens 1)电压；27.0V，射频透镜2(RF lens 2) 电压；0.OV，离子源温度；99°C，