食品中黄曲霉毒素的测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种黄曲霉毒素的测定方法，具体地说，是涉及食品中黄曲霉毒素的 测定方法，属于医药检测技术领域。
【背景技术】
[0002] 黄曲霉毒素（AFT)是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生 物。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉寄生曲霉（a. parasiticus)产生的次生代谢产物，在湿热 地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。
[0003] 它们存在于土壤、动植物、各种坚果中，特别是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小 麦等粮油产品，是霉菌毒素中毒性最大、对人类健康危害极为突出的一类霉菌毒素。
[0004] 目前国标GB/T 18979-2003中的方法：
[0005] 1、提取：
[0006] (1)大米、玉米、小麦、花生及其制品：准确称取经过磨细（粒度小于2mm)的试样 25. Og于250mL具塞锥形瓶中，加入5. Og氯化钠及甲醇-水（7+3)至125. OmL，以均质器高 速搅拌提取2min。定量滤纸过滤，准确移取15. OmL滤液并加入30.0 mL水稀释，用玻璃纤维 滤纸过滤1-2次，至滤液澄清，备用。
[0007] (2)植物油脂：准确称取试样25. Og于250mL具塞锥形瓶中，加入5. Og氯化钠及 加入甲醇-水（7+3)至125. OmL，以均质器高速搅拌提取2min。定量滤纸过滤，准确移取 15. OmL滤液并加入30.0 mL水稀释，用玻璃纤维滤纸过滤1-2次，至滤液澄清，备用。
[0008] (3)酱油：准确称取试样50.0 g于250.0 mL具塞锥形瓶中，加入2. 5g氯化钠及加入 甲醇-水（8+2)至100.0 mL，以均质器高速搅拌提取Imin定量滤纸过滤，准确移取10.0 mL 滤液并加人40.0 mL水稀释，用玻璃纤维滤纸过滤1-2次，至滤液澄清，备用。
[0009] (4)食醋：准确称取5. Og样品，加入1.0 g氯化钠，以pH7. 0磷酸盐缓冲溶液稀释 至25. OmL，混匀，定量滤纸过滤。取10.0 mL滤液加入10.0 mL缓冲液，混匀，以玻璃纤维滤纸 过滤1-2次，至滤液澄清，备用。
[0010] 2、净化
[0011] (1)大米、玉米、小麦、花生及其制品、植物油脂：将免疫亲和柱连接于20.0 mL玻璃 注射器下。准确移取15. OmL样品提取液注入玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连 接，调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2mL-3mL空气通过柱体。 以IOmL水淋洗柱子两次，弃去全部流出液，并使2mL-3mL空气通过柱体。准确加入1.0 mL 色谱级甲醇洗脱，流速为lmL/min-2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。
[0012] (2)酱油：将免疫亲和柱连接于10.0 mL玻璃注射器下。准确移取10.0 mL酱油样 品提取液注入玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约6ml-/ min流速缓慢通过免疫亲和柱。用IOmL 0.1 %的吐温一20/PBS清洗，再以IOml水清洗柱 子两次，弃去全部流出液，并使2mL-3mL空气通过柱体。准确加人1.0 mL色谱级甲醇洗脱， 流速为lmL/min-2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。
[0013] (3)食醋：将免疫亲和柱连接于10.0 mL玻璃注射器下。准确移取10.0 mL食醋样 品提取液注入玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约6mL-/ min流速缓慢通过免疫亲和柱，用IOmL 0. 1 %的吐温-20/PBS溶液清洗，再以IOmL水清洗 柱子两次，弃去全部流出液，并使2mL-3mL空气通过柱体。准确加入1.0 mL色谱级甲醇洗脱， 流速为lmL/min-2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。
[0014] 3.高效液相色谱条件：流动相：甲醇-水（45+55);流速：0. 8mL/min ;柱后衍生 化系统：衍生溶液：0.05%碘溶液；衍生溶液流速：0.2111171^11;反应管温度 ：70°〇;反应时 间：Imin0
[0015] 采用该方法国标做实验一批检品实验成本约需160元，实验前处理耗时约I. 5h完 成一批检品，而且只是用等度洗脱没考虑色谱柱的冲洗。
【发明内容】
[0016] 针对上述问题，本发明的目的在于，提供一种检测成本低，检测时间短的食品中黄 曲霉毒素的测定方法。
[0017] -种食品中黄曲霉毒素的测定方法，其特征在于，依次包括下述步骤：
[0018] 1)测试品提取净化
[0019] A)对于大米、玉米、小麦、花生及其制品提取净化方法为：精密称取粉碎均质后的 样品2. 0g，置50ml离心管中，加入乙腈4ml，旋祸混合4min，在4000转/min下离心4min， 精密量取上清液Iml，置子含200mgHC-C18+25mg PSA预混合弹头净化管中，旋涡混合3min， 15000转/min超高速离心10min，取上清液过0. 2微米滤膜置液相进样瓶中，即得。
[0020] B)对于酱油、食醋、植物油脂提取净化方法为：精密称取混合均匀的样品2. 0g，置 50ml离心管中，精密加入乙腈4ml，旋祸混合4min，在4000转/min下离心4min，精密量取 上清液lml，置子含200mgHC-C18+25mg PSA预混合弹头净化管中，旋涡混合3min，15000转 /min超高速离心10min，取上清液过0. 2微米滤膜置液相进样瓶中，即得。
[0021] 3)将步骤1)中的提取净化后的样品分别取2 μ 1进入高效液相色谱仪-光化学衍 生仪加荧光检测器检测；
[0022] 所述的色谱相条件为
[0023] 仪器：Agilent 1290高效液相色谱仪-光化学衍生仪加荧光检测器；
[0024] 色谱柱：Z0RBAX Eclipse Plus C18 3. 5um 4· 6X IOOmm ;
[0025] 流速：lml/ml;
[0026] 柱温：40°C ;
[0027] 进样量：2μ1;
[0028] 检测器：激发波长为360nm，发射波长为450nm
[0029] 流动相：甲醇-水50 :50。
[0030] 与现有技术相比，本发明提供的技术方案具有如下技术优点：
[0031] 1)本发明提供的技术方案检测成本更低，检测成本为35元，按国标做实验一批检 品实验成本约需160元；
[0032] 2)本发明提供的技术方案检测时间短，完成一批检测品只需35min，按国标实验 前处理耗时约I. 5h。
[0033] 3)本发明提供的方法在被检测的物质出完峰后加上了高比例有机相的冲洗，能把 色谱柱上的油彻底冲洗，国标给出的方法则只是用等度洗脱没考虑色谱柱的冲洗。
【附图说明】
[0034] 图1是本发明实施例1提供方法检测色谱图；
[0035] 图2是国标提供的方法检测色谱图。
【具体实施方式】
[0036] 下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不构成对本发明的任何限制，任 何人在本发明的权利要求范围内所做的有限次的修改仍在本发明的权利要求范围内。
[0037] 实施例1
[0038] 1、提取净化
[0039] 大米、玉米、小麦、花生及其制品：精密称取粉碎均质后的样品2. 0g，置50ml离心 管中，加入乙腈4ml，旋祸混合4min，在4000转