I可W通过在宿主细胞中表达来获 得。利用宿主细胞的表达可W根据常规方法进行。例如，根据山田等人（国际公开第 2005/035563号）的方法进行。ATIII的氨基酸序列或编码该序列的基因的碱基序列可W由 公知的数据库获得。作为公知的数据库，例如可W举出NCBI(http;//www.ncbi.nlm.nih. gov/)。所表达的重组蛋白可W为与天然的ATIII具有相同的氨基酸序列的蛋白质。另外， 所表达的重组蛋白只要可维持作为ATIII的功能，则也可W为天然的ATIII的变体。变体 还包括公知的ATIII的同系物或人工变异体。
[00化]此处所说的"二价金属盐"只要是在本发明所属的技术领域中作为二价金属盐被 认识的金属盐就没有特别限制。作为二价金属盐，例如可W举出二价金属氣化物、二价金属 氯化物、二价金属漠化物、二价金属舰化物、二价金属氨氧化物、二价金属氯化物、二价金属 硝酸盐、二价金属亚硝酸盐、二价金属次氯酸盐、二价金属亚氯酸盐、二价金属氯酸盐、二价 金属高氯酸盐、二价金属高铺酸盐、二价金属己酸盐、二价金属碳酸氨盐、二价金属磯酸二 氨盐、二价金属硫酸氨盐、二价金属硫化氨盐、二价金属硫氯酸盐、二价金属氧化物、二价金 属硫化物、二价金属过氧化物、二价金属硫酸盐、二价金属亚硫酸盐、二价金属硫代硫酸盐、 二价金属碳酸盐、二价金属铭酸盐、二价金属重铭酸盐、二价金属磯酸一氨盐、二价金属磯 酸盐。作为二价金属盐，可W仅使用一种，也可W组合使用两种或其W上。二价金属盐例如 优选为选自由二价金属氯化物、二价金属己酸盐及二价金属硫酸盐组成的组中的一种或两 种W上的金属盐。
[0066] 在使ATIII与本发明的前处理剂共存时，二价金属盐可W提供二价的金属离子。 "在使ATIII与本发明的前处理剂共存时"具体是指，进行后述的使蛋白质失活的处理时。 二价金属盐例如可W为溶解于水性溶剂中并提供二价的金属离子的物质。作为水性溶剂， 可W举出水或缓冲液。
[0067] 此处所说的"二价金属"只要是在本发明所属的技术领域中作为二价金属被认识 的金属就没有特别限制。"二价金属"可W指在离子化时提供二价的金属离子的金属。作为 二价金属，例如可W举出被、儀、巧、锁、领、错、簡、镶、锋、铜、隶、铁、钻、锡、铅、铺。作为二价 金属，可W仅使用一种，也可W组合使用两种或其W上。二价金属例如优选为选自由儀、巧、 铺及锋组成的组中的一种或其W上的金属。
[0068] 作为二价金属盐，具体来说，例如可W举出硫酸儀（M拆〇4)、例如氯化儀（MgCg、 己酸儀（Mg(CH3COO)2)、氯化巧（Cacg、己酸巧（Ca(CH3COO)2)、硫酸铺（MnS〇4)、硫酸锋 姑S〇4)。本发明的前处理剂例如可W仅含有硫酸儀（M拆〇4)作为二价金属盐。另外，本发 明的前处理剂例如也可W除了硫酸儀（M拆〇4)外进一步含有一种或其W上的其它二价金属 盐。
[0069] 另外，本发明的前处理剂还可W进一步含有其它成分。"其它成分"只要是在试 剂?诊断药学上允许的成分就没有特别限制，例如可W使用混配于试剂或诊断药中使用的 成分。作为此处所说的"其它成分"，例如可W举出碱金属氯化物、碱金属己酸盐、碱金属硫 酸盐、表面活性剂及各种添加剂。作为各种添加剂，例如可W举出稳定化剂、乳化剂、渗透压 调节剂、缓冲剂、等渗剂、保存剂、抑调节剂、着色剂、赋形剂、缩合剂、润滑剂、崩解剂，但不 限定于该些。
[0070] 另外，对本发明的前处理剂的剂型没有特别限制。本发明的前处理剂例如可W作 为液剂提供，也可W作为粉末剂、颗粒剂或片剂等使用时溶解用的固态制剂提供。另外，本 发明的前处理剂例如还可W作为将本发明的前处理剂保持于孔内的微孔板提供。该种微孔 板例如通过将制备成液态的本发明的前处理剂分注到孔内并使其干燥而得到。另外，在作 为液剂提供本发明的前处理剂的情况下，本发明的前处理剂可冻结状态提供，也可W W液体状态（融化状态）提供。
[0071]本发明的前处理剂中，二价金属盐可盐的状态存在，也可离子化的状态 存在，还可W作为其混合物存在。所有该些情况均符合"本发明的前处理剂含有二价金属 盐"的情况。
[0072] 关于本发明的前处理剂，除了含有二价金属盐W外，可W通过与在制造试剂或诊 断药时通常使用的方法同样的方法来制造。
[0073] 对本发明的前处理剂中的二价金属盐的浓度没有特别限制，可W根据二价金属盐 的种类或本发明的前处理剂的用量等各种条件适当设定。本发明的前处理剂中的二价金属 盐的浓度例如可W为0. 001质量％W上、0. 01质量％W上、0. 1质量％W上、1质量％W上、 5质量％W上、10质量％W上、30质量％ ^上、或50质量％ ^上。本发明的前处理剂中的二 价金属盐的浓度例如可W为100质量％W下、50质量％W下、30质量％W下、10质量％W 下、5质量％ ^下、或1质量％W下。
[0074] 对本发明的前处理剂的用量没有特别限制，可W根据二价金属盐的种类或浓度等 各种条件适当设定。本发明的前处理剂例如可W按照在使ATIII与本发明的前处理剂共 存时来自二价金属盐的二价金属离子的浓度（下文中也称为"处理时的二价金属离子浓 度"）在W下例示的浓度范围的方式来使用。"使ATIII与本发明的前处理剂共存时的浓度" 具体是指，进行后述的使蛋白质失活的处理的反应体系中的浓度。处理时的二价金属离子 浓度只要可得到本发明的前处理的效果就没有特别限制，例如优选为0. 5mMW上。处理时 的二价金属离子浓度例如优选为0. 5mM~lOOmM、更优选为0. 5mM~50mM、进一步优选为 0. 5mM~25mM、更进一步优选为5mM~25mM、特别优选为5mM~12. 5mM。需要说明的是，在 本发明的前处理剂中含有2种W上的二价金属盐的情况下，此处所说的"处理时的二价金 属离子浓度"是指来自该些二价金属盐的二价金属离子的浓度的总和。
[0075] 通过使用该种本发明的前处理剂进行ATIII的前处理，可W减少将ATIII付之整 试验时的反应干扰作用，由此能够W高精度实施ATIII的整试验。
[0076] (2)本发明的试剂盒
[0077] 本发明的试剂盒是包含本发明的前处理剂作为构成物品的整试剂盒。本发明的试 剂盒也可W包含其它的构成物品。作为此处所说的"其它的构成物品"，例如可W举出整试 剂、整反应的检测用底物、缓冲液、蒸馈水、标准物质巧t或BG等）及微孔板，但不限定于该 些。
[007引本发明中使用的整试剂只要含有参与与整试验的测定对象物质对应的级联反应 的蛋白质就没有特别限定。作为整试剂，例如可W举出整血细胞提取液（LAL(溶解物试 剂））。LAL可W将整的血液作为原料、通过常规方法获得。LAL也可W在适当分级和/ 或纯化等后再使用。整可W为任意种类的整。作为整，可W举出作为日本产整的东方整 (Tachypleustridentatus)、作为美国产整的美洲整（Ximuluspolyphemus)、W及作为东 南亚产整的圆尾整（Carcinosco巧iusro1:undicauda)和南方整（Tachypleusgigas)。例 如，作为使用了美洲整来源的溶解物的整试剂，可W举出Endospecy(注册商标化S-50M(生 化学工业株式会社）、Pyr0c虹ome(AssociatesofCapeCod,Inc. )、Pyrotell(注册商 标）_T(AssociatesofCapeCod,Inc.)、Pyrotell(注册商标）Multi-I'est(Associatesof C耶eCod,Inc. )、Kinetic-QCL(LONZAWALKERSVILLE,INC. )、Endoc虹ome-K(CharlesRiver LaboratoriesInc.)。
[0079] 另外，作为整试剂，也可W例示出人工重构的物质。重构的整试剂只要按照包含参 与与整试验的测定对象物质对应的级联反应的蛋白质的方式构成就没有特别限制。也将参 与级联反应的蛋白质统称为"因子"。此处所说的"级联反应"是指，通过整试验的测定对象 物质的存在而进行的一系列反应。例如，在存在Et等使C因子活化的物质时，进行下述一 系列反应；C因子被该物质所活化而成为活化型C因子，B因子被活化型C因子所活化而成 为活化型B因子，凝固酶原被活化型B因子所活化而成为凝固酶。目P，在化等使C因子活 化的物质为测定对象物质的情况下，重构的整试剂例如只要包含C因子、B因子及凝固酶原 作为构成级联体系的因子即可。另外，例如在存在BG等使G因子活化的物质的情况下，进 行下述一系列反应；G因子被该物质所活化而成为活化型G因子，凝固酶原被活化型G因子 所活化而成为凝固酶。目P，在BG等使G因子活化的物质为测定对象物质的情况下，重构的 整试剂例如只要包含G因子及凝固酶原作为构成级联体系的因子即可。级联反应的进行例 如可W通过使用后述的整反应的检测用底物检测凝固酶的存在来检测。
[0080] 另外，作为后述的整反应的检测用底物，在利用能够检测级联反应的中间阶段的 底物的情况下，重构的整试剂只要包含参与至该中间阶段为止的因子即可。具体来说，例如 在化等使C因子活化的物质为测定对象物质、且利用能够检测活化C因子的存在的整反应 的检测用底物的情况下，重构的整试剂只要包含C因子即可。
[0081] 重构的整试剂中包含的各因子可W为天然得到的物质，也可W为重组蛋白。
[0082] 天然的各因子可W由上述各种整的血细胞提取液（LAL)获得。该些因子可W 纯化为所期望的程度后使用。纯化例如可W通过公知的方法（化kamura T.et al.，J Biochem. 1986Mar ;99(3) ;847-57.)进行。
[0083] 另外，各因子可W通过在宿主细胞中表达而获得。利用宿主细胞的表达可W根据 常规方法进行。例如，可W根据水村等人（国际公开第2012/118226号）的方法进行。各 因子的氨基酸序列或编码该序列的基因的碱基序列可W由公知的数据库获得。作为公知的 数据库，例如可W举出NCBI (ht化；//www. ncbi. nlm. nih. gov/)。所表达的各重组蛋白可W 根据需要纯化为所期望的程度后使用。
[0084] 通过适当组合各因子，得到重构的整试剂。例如，重构的整试剂中包含的因子可W 全部为天然的因子，也可W全部为重组蛋白，还可W为它们的任意的组合。另外，重构的整 试剂例如可W通过对LAL自身、或者将LAL适当分级和/或纯化等而得到的物质适当组合 各因子而得到。
[0085] 整反应的检测用底物（下文中也简称为"检测用底物"）是指用于检测级联反应的 进行的底物。
[0086] 作为检测用底物，可W举出凝固蛋白原。凝固蛋白原是作为级联反应的最终产物 的凝固酶的检测底物。通过凝固蛋白原与凝固酶发生接触，作为凝固素而凝固。凝固反应 的进行可W通过测定反应液的浊度或观测凝胶的形成而测定。凝固蛋白原可W由整血细胞 提取液（LAL)进行回收。此外，编码凝固蛋白原的基因的碱基序列已明确（宫田等人、蛋白 质核酸酶（蛋白質核酸酶）增刊No. 29 ;P30-43 ;1986)，可W根据常规方法W基因工程学的 方式进行生产。
[0087]