一种检测微囊藻毒素的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及分析检测技术领域，尤其涉及一种检测微囊藻毒素的方法。
【背景技术】
[0002] 近年来，藻类作为人类保健食品添加剂已得到了大力发展，与其相关的食品安全 问题也因此提上日程。但藻类中可能含有一种次生代谢产物一微囊藻毒素，该微囊藻毒素 为七肽单环肝毒素，能够强烈抑制蛋白磷酸酶的活性，是强烈的肝脏肿瘤促进剂，其对水体 环境和人群健康的危害已成为全球关注的重大环境问题之一。因此，准确检测藻类中微囊 藻毒素的含量显得尤为重要。
[0003] 目前，现有技术中常用的液相色谱检测法，通常选用腈、水和有机酸的混合液作为 流动相进行检测，但该流动相容易因外界环境的干扰或因有机相的挥发而导致自身pH改 变，因此现有技术的流动相提供的检测环境稳定性较差，而且，微囊藻毒素通常以痕量形式 存在，更易于受到检测环境的影响，导致检测结果不准确，此外，流动相中腈的毒性较大，对 人体及环境危害相对较大。
【发明内容】
[0004] 本发明实施例提供了一种检测微囊藻毒素的方法，检测结果准确，且环境友好。
[0005] 为达到上述目的，本发明提供一种检测微囊藻毒素的方法，所述方法包括：
[0006] 对样品中的微囊藻毒素进行提取；
[0007] 对提取后所得的微囊藻毒素进行预处理；
[0008] 以醇和有机酸盐缓冲液的混合液为流动相对所述预处理后的微囊藻毒素进行液 相色谱检测。
[0009] 其中，所述醇包括甲醇、乙醇、异丙醇中的任意一种或几种；所述有机酸盐缓冲液 包括甲酸盐水溶液、醋酸盐水溶液或磷酸盐水溶液中的任意一种。
[0010] 优选地，所述醇为甲醇，所述有机酸盐缓冲液为磷酸盐水溶液。
[0011] 具体地，所述甲醇与所述磷酸盐水溶液的体积比为50:50~60:40 ;所述流动相的 pH 为 2. 5 ~3. 5。
[0012] 优选地，所述流动相中，所述甲醇与所述磷酸盐水溶液的体积比为57:43 ;所述流 动相的pH为3。
[0013] 优选地，以醇和有机酸盐缓冲液的混合液为流动相对所述预处理后的微囊藻毒素 进行液相色谱检测时，可检测到的微囊藻毒素的浓度为〇. 01~10 y g/L。
[0014] 其中，所述对样品中的微囊藻毒素进行提取包括：
[0015] a、将样品溶于有机酸溶液；
[0016] b、超声振荡提取，得到微囊藻毒素。
[0017] 优选地，所述有机酸溶液的浓度为3%~10%，所述有机酸溶液与样品的比例为 30mL/g ~70mL/g。
[0018] 进一步地，所述对提取后所得的微囊藻毒素进行预处理具体包括：对提取后所得 的微囊藻毒素进行萃取富集。
[0019] 具体地，所述对提取后所得的微囊藻毒素进行萃取富集包括：
[0020] A、对提取后所得的微囊藻毒素进行萃取；
[0021] B、对萃取过程中吸附的微囊藻毒素进行洗脱，其中，所述洗脱为先用水进行洗脱， 再用醇溶液进行梯度洗脱。
[0022] 优选地，所述用醇溶液进行梯度洗脱时，所述醇溶液的浓度范围为20%~100%， 所述梯度洗脱达到回收率不低于90%。
[0023] 优选地，所述用醇溶液进行梯度洗脱时，以等体积的醇溶液进行梯度洗脱。
[0024] 本发明实施例提供了一种检测微囊藻毒素的方法，应用液相色谱法对微囊藻毒素 进行检测分析，在分析过程中使用醇和有机酸盐缓冲液的混合液作为流动相，相比现有技 术中以腈、水和有机酸的混合液为流动相，一方面，该流动相不会因外界环境的干扰或因有 机相的挥发而导致自身pH改变，且有机酸盐缓冲液抑制了溶质的质子化，为检测微囊藻毒 素提供稳定的pH环境，有效避免检测环境对微囊藻毒素的检测结果的影响，提高了检测结 果的准确性，另一方面，醇对微囊藻毒素具有很好的溶解性且环境友好。
【附图说明】
[0025] 图1为本发明实施例提供的一种检测微囊藻毒素的方法的流程示意图；
[0026] 图2为本发明实施例提供的微囊藻毒素-RR(MC-RR)标准品的色谱图；
[0027] 图3为本发明实施例提供的微囊藻毒素-LR(MC-LR)标准品的色谱图；
[0028] 图4为本发明实施例提供的来自藻粉中的微囊藻毒素样品的色谱图。
【具体实施方式】
[0029] 下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完 整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于 本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他 实施例，都属于本发明保护的范围。
[0030] 下面结合附图对本发明实施例提供的一种检测微囊藻毒素的方法进行详细描述。 如图1所示，该方法具体可以包括：
[0031] S1、对样品中的微囊藻毒素进行提取；
[0032] S2、对提取后所得的微囊藻毒素进行预处理；
[0033] S3、以醇和有机酸盐缓冲液的混合液为流动相对预处理后的微囊藻毒素进行液相 色谱检测。
[0034] 本发明实施例提供的检测微囊藻毒素的方法，应用液相色谱法对微囊藻毒素进行 检测分析，分析过程中使用醇和有机酸盐缓冲液的混合液作为流动相，对比现有技术中以 腈、水和有机酸的混合液为流动相，一方面，该流动相不会因外界环境的干扰或因有机相的 挥发而导致自身pH改变，且有机酸盐缓冲液抑制了溶质的质子化，为检测微囊藻毒素提供 稳定的pH环境，有效避免检测环境对微囊藻毒素的检测结果的影响，提高了检测结果的准 确性，另一方面，醇对微囊藻毒素具有很好的溶解性且环境友好。
[0035] 步骤S1中，对样品中的微囊藻毒素进行提取可以包括：
[0036]a、将样品溶于有机酸溶液；
[0037] b、超声振荡提取，得到微囊藻毒素。
[0038] 具体地，上述步骤可以为：称取一定质量的样品溶于有机酸溶液中，随之置于超声 波提取设备中超声振荡提取，一段时间后离心，取上清液。重复上述操作步骤3次，以达到 提取率不低于95%，此外，为获得更高的提取率，也可以多次重复上述操作步骤。随后将多 次离心后的上清液合并，低温保存，得到含有微囊藻毒素的溶液，该低温主要指零下温度， 例如-10、-15、_20°C。
[0039]需要说明的是，本发明对样品的来源不作具体限定，样品可以是任意的含有微囊 藻毒素的待测物，例如，样品可以取自藻粉，也可以取自水体环境，如饮用水，还可以取自食 品、保健品等。在本发明实施例中，样品优选可以取自藻粉，藻粉预先经过冷冻干燥处理。
[0040] 有机酸溶液例如可以是甲酸、乙酸等，或者可以是酒石酸、枸椽酸、苹果酸等。有机 酸溶液具有一定的酸性，能够将微囊藻毒素由细胞内溶出，同时，相比无机酸溶液，有机酸 溶液的酸性较为温和，不会将细胞内的脂质等杂质溶出，以免造成后续过滤或分离困难。
[0041]有机酸溶液的浓度可以为3%~10%，例如3%、5%、6%、7%、8%、10%。这一浓 度范围内的有机酸溶液能够有效溶解胞外微囊藻毒素，并能够使细胞壁溶解破裂，促进微 囊藻毒素从细胞中释放。
[0042]有机酸溶液