物质测定传感器的制造方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种物质测定传感器，更详细来说，本发明涉及一种利用免疫反应来 对测定对象物质进行定量时所用的物质测定传感器。
【背景技术】
[0002] 以前，作为环境中的微量物质等的检测方法或定量方法，已提出了利用免疫反应 的免疫学测定法（免疫测定（immunoassay))。作为该免疫测定的通常的测定方法，例如 已知酶联免疫吸附测定法（Enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)或免疫色谱法 (immunochromatography)等。
[0003] 这些方法需要进行利用荧光物质等对生物物质进行标识的操作，因此正在研宄能 更简易地制造的物质测定传感器。例如已提出了如下的生物传感器，该生物传感器含有：与 测定对象物质特异地反应的分子识别成分、因测定对象物质与分子识别成分的反应而体积 变化的刺激响应性高分子、及因刺激响应性高分子的体积变化而局部表面等离子体共振的 强度变化的平均粒径为〇. 2nm~200nm的金属粒子，并且金属粒子及分子识别成分是固定 在刺激响应性高分子上（例如参照专利文献1)。
[0004] 现有技术文献
[0005] 专利文献
[0006] 专利文献1 :日本专利特开2010-197046号公报
【发明内容】
[0007] [发明所欲解决的问题]
[0008] 在利用免疫反应的对象物质的定量测定中，从实用化的方面来看，期望检测感度 充分、操作容易的新颖的物质测定传感器。
[0009] 因此，本发明的目的在于提供一种新颖的物质测定传感器，其为使用热响应性高 分子的物质测定传感器，并且能以更高的感度来进行对象物质的定量测定。
[0010] [解决问题的技术手段]
[0011] 为了解决所述问题，本发明人进行了努力研宄，结果发现，通过由金属粒子、热响 应性高分子、显示出正或负的动电位的带电物质、及与测定对象物质特异地反应的标识粒 子来构成复合体，可制成高感度的传感器。
[0012] 即，本发明是通过下述（1)~（11)来达成。
[0013] (1) 一种物质测定传感器，含有：与测定对象物质特异地反应的标识粒子、热响应 性高分子、在溶液中显示出正或负的动电位的带电物质、及金属粒子，并且
[0014] 所述金属粒子是由所述标识粒子与所述带电物质与所述热响应性高分子的共聚 物所被覆。
[0015] (2)根据所述（1)所记载的物质测定传感器，其中所述金属粒子的平均粒径为 10nm~50nm〇
[0016] (3)根据所述⑴或⑵所记载的物质测定传感器，其中所述金属粒子为金（Au)、 银（Ag)、铂（Pt)及钯（Pd)中的任一种。
[0017] (4)根据所述⑴至（3)中任一项所记载的物质测定传感器，其中所述热响应性高 分子为聚（N-异丙基丙烯酰胺）及聚（乙烯基甲基醚）中的至少一种。
[0018] (5)根据所述（1)至（3)中任一项所记载的物质测定传感器，其中所述标识粒 子为抗体、抗原、肽、单链脱氧核糖核酸Oeoxyribonucleicacid，DNA)、单链核糖核酸 (Ribonucleicacid，RNA)及这些物质的衍生物中的任一种。
[0019] (6)根据所述⑴至（5)中任一项所记载的物质测定传感器，其中所述带电物质在 溶液中显示出正的动电位。
[0020] (7)根据所述（6)所记载的物质测定传感器，其中所述热响应性高分子具有氨基， 所述带电物质为胺系化合物。
[0021] (8)根据所述⑴至（7)中任一项所记载的物质测定传感器，含有0. 1质量％~ 0. 4质量％的所述标识粒子。
[0022] (9) 一种物质测定传感器的制造方法，制造根据所述⑴至⑶中任一项所记载的 物质测定传感器，并且
[0023] 在含有用来形成热响应性高分子的单体的溶液中，添加与测定对象物质特异地反 应的标识粒子、及在溶液中显示出正或负的动电位的带电物质，进行聚合而形成三元共聚 物，
[0024] 在含有所得的三元共聚物的溶液中添加含有金属粒子的溶液后，进行加热冷却， 由所述三元共聚物来被覆所述金属粒子。
[0025] (10) -种物质测定传感器的制造方法，制造根据所述（1)至（8)中任一项所记载 的物质测定传感器，并且
[0026] 在含有用来形成热响应性高分子的单体的溶液中，添加在溶液中显示出正或负的 动电位的带电物质，进行聚合而形成共聚物，
[0027] 在所得的共聚物中添加金属粒子，由所述共聚物来被覆所述金属粒子，
[0028] 在被覆所述金属粒子的共聚物中添加与测定对象物质进行特异反应的标识粒子 而进行复合化。
[0029] (11) 一种测定对象物质的测定方法，在根据所述⑴至⑶中任一项所记载的物 质测定传感器中，在所述物质测定传感器的带电物质显示出正的动电位的情况下，添加在 溶液中显示出负的动电位并且与含有测定对象物质特异地反应的标识粒子的复合化化合 物，或者，在所述物质测定传感器的带电物质显示出负的动电位的情况下，添加在溶液中显 示出正的动电位并且含有与测定对象物质特异地反应的标识粒子的复合化化合物，
[0030] 在所述物质测定传感器的热响应性高分子为在下限临界溶液温度以上不溶解而 引起相分离的热响应性高分子的情况下，对所述物质测定传感器的热响应性高分子的相转 变温度以上的温度下的透射率进行测定，或者，在所述物质测定传感器的热响应性高分子 为在上限临界溶液温度以下不溶解而引起相分离的热响应性高分子的情况下，对所述物质 测定传感器的热响应性高分子的相转变温度以下的温度下的透射率进行测定。
[0031] [发明的效果]
[0032] 根据本发明，能以高感度对促甲状腺素（ThyroidStimulatingHormone，TSH)、凝 血酶（thrombin)、外源凝集素（lectin)、伴刀豆球蛋白A(concanavalinA)、血小板源生长 因子（Platelet-DerivedGrowthFactor，roGF)等测定对象物质简单地进行计量。因此， 特别可以有效地用于利用免疫反应的测定对象物质的检测。
【附图说明】
[0033] 图1的（a)为对本发明的物质测定传感器与测定对象物质结合的状态加以说明的 图，图1的（b)为对不存在测定对象物质的情形的物质测定传感器的结合状态进行说明的 图。
[0034] 图2的（a)为表示物质测定传感器1的抗生物素蛋白（avidin)浓度变化时的温 度与透射率的关系的图表，图2的（b)为表示物质测定传感器2的抗生物素蛋白浓度变化 时的温度与透射率的关系的图表。
[0035] 图3的（a)为表示物质测定传感器3的抗生物素蛋白浓度变化时的温度与透射率 的关系的图表，图3的（b)为表示物质测定传感器4的抗生物素蛋白浓度变化时的温度与 透射率的关系的图表，图3的（c)为表示物质测定传感器5的抗生物素蛋白浓度变化时的 温度与透射率的关系的图表。
[0036] 图4的（a)为表示物质测定传感器6的抗生物素蛋白浓度变化时的温度与透射率 的关系的图表，图4的（b)为表示物质测定传感器7的抗生物素蛋白浓度变化时的温度与 透射率的关系的图表，图4的（c)为表示物质测定传感器8的抗生物素蛋白浓度变化时的 温度与透射率的关系的图表。