一种白木香叶hplc指纹图谱的建立方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及中药材质量控制技术领域，具体设及一种白木香叶HPLC指纹图谱的 建立方法。
【背景技术】
[0002] 利用色谱指纹图谱获取全面的中药化学成分特征信息已广泛地应用于中药的质 量控制之中，中药色谱指纹图谱是对中药整体性的化学特征的表达和反映。目前，美国食品 药品管理局（FDA)、英国草药典、德国药用植物学会、印度草药典、加拿大药用植物学会均接 受和收载指纹图谱的质量控制方法，目前指纹图谱已成为国际公认的控制中成药、天然药 物质量的最有效的方法。中药成分绝大多数可在高效液相色谱仪上进行分析检测，因此高 效液相色谱法已成为中药指纹图谱技术的首选方法。
[0003] 白木香习称±沉香，主产于印度、马来西亚等国东南亚国家。盛产于我国岭南地 区，是我国历史悠久的名贵中药材，也是重要的"南药"资源，位列"十大南药"之一，其药用 部位来源为瑞香科植物白木香[Aquilaria sinensis (Lour. )Gilg.]含树脂的屯、材部分。现 代临床常用于消化系统、神经系统W及屯、血管系统为主的多种疾病的治疗，具有良好的效 果。各版《中国药典》对白木香均有收载，并且自2010版药典开始，白木香被规定为沉香药 材唯一的法定植物来源。
[0004] 目前白木香资源的开发利用仅限于其药用部位（含树脂屯、材）的研究，而白木香 叶作为该植物最为丰富的资源部位，其药理研究却仅处于起步阶段。白木香叶口服给药具 有显著的抗炎镇痛药理活性。通过建立白木香叶HPLC指纹图谱，可对白木香叶正了醇部位 各化学成分进行监控。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题是，为了更好的控制中药材白木香叶的质量，提供一 种白木香叶HPLC指纹图谱的建立方法。
[0006] 本发明所要解决的上述技术问题通过W下技术方案予W实现：
[0007] 一种白木香叶HPLC指纹图谱的建立方法，包括对照品溶液的制备、供试品溶液的 制备、指纹图谱的色谱条件的确定、标准指纹图谱的确定，所述的指纹图谱的色谱条件为： 采用色谱柱拟己膳-0. 1?0. 5%磯酸缓冲盐溶液为流动相进行梯度洗脱；使用紫外检 测器进行检测，检测波长为300?360nm ;
[000引所述的梯度洗脱条件为；Omin时，己膳的体积分数为10%，磯酸缓冲盐溶液的体 积分数为90% ;15min时，己膳的体积分数为15%，磯酸缓冲盐溶液的体积分数为85% ; 25min时，己膳的体积分数为15%，磯酸缓冲盐溶液的体积分数为85%;27min时，己膳的体 积分数为20%，磯酸缓冲盐溶液的体积分数为80% ;40min时，己膳的体积分数为25%，磯 酸缓冲盐溶液的体积分数为75% ;55min时，己膳的体积分数为32%，磯酸缓冲盐溶液的体 积分数为68%。
[0009] 为了使各个峰能够尽可能的分开，达到最佳的分离效果，本发明通过大量实验反 复多次对流动相比例进行调整，最终确定上述梯度洗脱条件。
[0010] 作为一种优选方案，所述的Ci8色谱柱为kromasU-C 1泡谱柱。规格为 4.6mmX 250mm，5 y m。
[00"M] 本发明分别考察了多条色谱柱，其中kromasU-Cis (4. 6mmX 250mm，5 y m)色谱柱、 Agilent-Cis(4. 6mmX250mm，5 ym)色谱柱、Therm〇-Ci8(4. 6mmX250mm，5 ym)色谱柱对分离 效果较好，结果显示（见附图1)，kromasU-Ci8色谱柱对目标峰分离效果最好。
[0012] 作为一种优选方案，所述的磯酸缓冲盐溶液质量浓度为0. 3%磯酸缓冲盐溶液。
[0013] 采用磯酸缓冲盐或高浓度的甲酸缓冲盐可明显改善白木香叶中各成分的分离洗 脱效果。但由于过高的酸度容易使缓冲盐结晶析出，造成色谱柱的堵塞，从而影响实验进程 W及色谱柱寿命，故本发明在多个缓冲盐浓度的条件下，考察缓冲盐浓度对各成分分离效 果的影响，确定最佳缓冲盐比例。结果见附图2。结果显示，浓度在0.3% W上的磯酸缓冲 盐能够改善分离效果，由于继续增加酸度可能影响色谱柱寿命，故本实验选择0. 3%磯酸缓 冲盐作为水系流动相。
[0014] 作为一种优选方案，所述的检测波长为340nm。
[0015] 根据实际情况综合考虑各色谱峰的最大吸收波长，选定出峰数较多，并且响应值 较为均衡的波长作为最佳测定波长，并在该波长下标记13个响应值较大的峰作为特征峰， 并将对照品峰进行标识。结果见附图3。综合各方面因素，最终选择340nm波长作为测定波 长。
[0016] 作为一种优选方案，柱温为25°C，流速为0. 8ml/min，进样量10 y 1。
[0017] 分别在不同的柱温条件下对该洗脱程序的分离效果进行验证。结果见附图4。结 果显示，25°C柱温（室温条件）已经可W达到较好的分离效果，故后续试验均选择在室温条 件下进行。
[001引作为一种优选方案，所述的对照品溶液为芒果巧对照品溶液，其浓度为0.2? 0. 4mg/ml 0
[0019] 作为一种最优选方案，所述的对照品溶液为芒果巧对照品溶液，其浓度为 0. 254mg/ml。
[0020] 作为一种优选方案，所述的供试品溶液，其制备方法为；精密称取干燥的白木香叶 粉末，置于锥形瓶中，加入甲醇，超声提取，过滤，滤液减压浓缩至无醇味，依次用己離W及 水饱和后的正了醇萃取，合并正了醇萃取液，浓缩定容，过0. 45 y m微孔滤膜，备用。
[0021] 作为一种最优选方案，所述的供试品溶液，其制备方法为：精密称取干燥的白木香 叶粉末3g，置于150ml锥形瓶中，加入甲醇50ml，超声30min，冷却后抽滤，滤液减压浓缩至 无醇味，依次用己離W及水饱和后的正了醇按体积比1:1各萃取3次，合并正了醇萃取液， 浓缩定容至25ml，过0. 45 y m微孔滤膜，备用。
[0022] 作为一种优选方案，该指纹图谱确定了 13个共有特征峰，W 3号峰即芒果巧峰 为参照峰，计算各共有特征峰与参照峰的相对保留时间，1到13号峰相对保留时间为： 0. 705 + 3%、0. 770 + 3%、1. 000 + 3%、1. 078 + 3%、1.