本发明属于化学药制剂的质量控制，具体涉及非洛地平琥珀酸美托洛尔缓释片中杂质的质量控制方法。
背景技术：
非洛地平(felodipine)为二氢吡啶类钙通道阻滞剂，临床用于高血压、稳定性心绞痛的治疗。其作用是可逆性竞争二氢吡啶结合位点，阻断血管平滑肌和人工培养的兔心房细胞的电压依赖性ca2+电流，并阻断k+诱导的鼠门静脉挛缩。
美托洛尔(metoprolol)是一种选择性的β1受体阻滞剂，其对心脏β1受体产生作用所需剂量低于其对外周血管和支气管上的β2受体产生作用所需剂量。美托洛尔的治疗可减弱与生理和心理负荷有关的儿茶酚胺的作用，降低心率、心排出量及血压。在应激状态下，肾上腺分泌的肾上腺素增加，美托洛尔不会妨碍生理性血管扩张。在治疗剂量，美托洛尔对支气管平滑肌的收缩作用弱于非选择性β受体阻滞剂，该特性使之能与β2受体激动剂合用，治疗合并有支气管哮喘或其他明显的阻塞性肺病的患者，美托洛尔对胰岛素释放及糖代谢的影响小于非选择性β受体阻滞剂，因而可用于糖尿病患者。与非选择性β受体阻滞剂相比美托洛尔对低血糖的心血管反应如心动过速的影响较小，血糖会升至正常水平的速度较快。对于高血压患者，可明显降低直立位、平卧位及运动时的血压。
非洛地平和美托洛尔两种药物已经广泛用于心血管疾病的治疗。而且多项研究表明，在高血压的治疗中，二氢吡啶类钙拮抗剂与β受体阻滞剂被认为是最有效的联合用药。钙拮抗剂能抑制β受体阻滞剂阻滞β受体所致的血管收缩作用；而β受体阻滞剂则可防止二氢吡啶类钙拮抗剂引起的心动过速和交感神经活化。阿斯利康公司已经研发了非洛地平和美托洛尔的复方缓释制剂(商品名：logimax)，用于高血压等心血管疾病的治疗。
化学药制剂中一个重要的质量控制指标是杂质含量的限量控制，以保证制剂产品的质量和临床使用有效、安全。
现有技术为单独测定非洛地平缓释片的杂质和琥珀酸美托洛尔的杂质。两者均为单一体系，琥珀酸美托洛尔是原料，为单一成分，只用考虑原料降解杂质，杂质的测定方法在美国药典有记载，方法的创新性不足；非洛地平缓释片杂质测定方法的建立需要考虑非洛地平原料的降解，还要考虑原料与辅料、原料与包材的相互反应产生的杂质。对于复方非洛地平缓释片杂质检测的报道也是分别建立非洛地平杂质和酒石酸美托洛尔杂质的检测方法。但是对于本发明中的非洛地平琥珀酸美托洛尔缓释片与现有技术中的产品(非洛地平缓释片、琥珀酸美托洛尔缓释片)并不一样，原料、辅料、配方均不同，建立杂质控制方法需要考虑原料降解、原料与原料的相互反应、原料与辅料的相互反应，原料与包材的相互反应产生的杂质，体系更为复杂，需要进行更深入的研究，故现有技术方案并不适用。没有简便的同时测定复方制剂中非洛地平、琥珀酸美托洛尔中杂质的方法。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题是提供一种方法简化、省时节能的、可操作性强的非洛地平琥珀酸美托洛尔缓释片中杂质的质量控制方法，十分有利于工业化生产的应用。
本发明希望解决的技术问题包括：
(1)在非洛地平琥珀酸美托洛尔缓释片这个复杂体系中，原料降解情况；原料之间是否产生相互作用，有新的降解产物；两个原料与辅料是否产生相互作用，有新的降解产物；两个原料与包材是否产生相互作用，有新的降解产物；本品在长期、加速条件下是否产生新的降解产物，或者原有的降解产物是否增加。
(2)非洛地平、琥珀酸美托洛尔两者的最大吸收波长不同，研究同时测定二者杂质需要首先考虑波长选择，如何选择一个可以尽量检测出两个原料及其降解产物的波长。
(3)本品中非洛地平的量为5mg，琥珀酸美托洛尔的量为47.5mg，后者的量为前者的9.5倍，如何确定在同一取样量下，测定出琥珀酸美托洛尔杂质的同时，非洛地平的杂质也能够准确测定。
(4)非洛地平、琥珀酸美托洛尔二者的极性不同，用高效液相色谱法进行测定时，在保证主峰和杂质达到基线分离的情况下，二者出峰时间差别较大，整个测定过程用时较长，效率不高，如何能尽量减少检测时间，提高效率。
本发明以如下技术方案解决上述技术问题：
非洛地平琥珀酸美托洛尔缓释片中杂质的质量控制方法包括以下步骤中的一种或多种：
取非洛地平琥珀酸美托洛尔缓释片的细粉适量(约相当于琥珀酸美托洛尔47.5mg与非洛地平5mg)，置25ml量瓶中，加乙腈10ml，超声处理5分钟使琥珀酸美托洛尔与非洛地平溶解，放冷，用流动相a稀释至刻度，摇匀，离心5分钟(10,000转/分)，取上清液作为供试品溶液。精密量取1ml，置100ml量瓶中，用溶剂[辛烷磺酸钠溶液-乙腈(60:40)]水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照高效液相色谱法(《中国药典》四部通则)试验，用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相a为辛烷磺酸钠溶液(取辛烷磺酸钠1.3g，冰醋酸1.0ml，加水溶解并稀释至1000ml)，流动相b为乙腈，梯度洗脱；流速为1.0ml/ml；检测波长为223nm。按下表进行梯度洗脱，理论板数按非洛地平峰计算不小于2000，两主峰与各自相邻杂质峰的分离度应符合要求。取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使非洛地平色谱峰高约为满量程的20％～25％。精密量取供试品溶液与对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，琥珀酸美托洛尔主峰保留时间为9min～10min，非洛地平主峰保留时间为17min～18min，供试品溶液的色谱图中：扣除相对非洛地平主峰保留时间0.25之前和2.18的色谱峰；相对非洛地平主峰保留时间0.80之前、与杂质d保留时间一致的色谱峰，归属为琥珀酸美托洛尔的杂质；其他均为非洛地平的杂质。琥珀酸美托洛尔单个杂质不得过0.5％，总杂质不得过1.0％，供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液中琥珀酸美托洛尔主峰面积0.01倍(0.01％)的峰可忽略不计；如有与杂质i保留时间(相对非洛地平主峰时间约为0.95)一致的色谱峰，不得过非洛地平标示量的1.0％，非洛地平的其他单个杂质不得过0.5％，总杂质不得过1.5％，供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液中非洛地平主峰面积0.05倍(0.05％)的峰可忽略不计。
具体实施方式
本发明的质量控制方法是经过大量的试验筛选并经过方法学验证试验得到的最佳方案，
条件筛选包括了：色谱柱、检测波长、供试液前处理、流动相等条件的筛选，最种确定本发明技术方案的液相条件。
通过方法学验证，证明本发明技术方案的方法是准确的、可重复、可重现、稳定的，方法学验证试验结果为：
实施例1：
取自制的非洛地平琥珀酸美托洛尔缓释片三批(批号：20131201、20131202、20131203)、香港购买的阿斯利康制药有限公司生产的原研产品非洛地平琥珀酸美托洛尔缓释片一批(批号：60004066)，分别取细粉适量(约相当于琥珀酸美托洛尔47.5mg与非洛地平5mg)，置25ml量瓶中，加乙腈10ml，超声处理5分钟使琥珀酸美托洛尔与非洛地平溶解，放冷，用流动相a稀释至刻度，摇匀，离心5分钟(10,000转/分)，取上清液作为供试品溶液。精密量取1ml，置100ml量瓶中，用溶剂[辛烷磺酸钠溶液-乙腈(60:40)]稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照高效液相色谱法(《中国药典》四部通则)试验，用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相a为辛烷磺酸钠溶液(取辛烷磺酸钠1.3g，冰醋酸1.0ml，加水溶解并稀释至1000ml)，流动相b为乙腈，梯度洗脱；流速为1.0ml/ml；检测波长为223nm。按下表进行梯度洗脱，理论板数按非洛地平峰计算不小于2000，两主峰与各自相邻杂质峰的分离度应符合要求。取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使非洛地平色谱峰高约为满量程的20％～25％。精密量取供试品溶液与对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，琥珀酸美托洛尔主峰保留时间为9min～10min，非洛地平主峰保留时间为17min～18min，供试品溶液的色谱图中：扣除相对非洛地平主峰保留时间0.25之前和2.18的色谱峰；相对非洛地平主峰保留时间0.80之前、与杂质d保留时间一致的色谱峰，归属为琥珀酸美托洛尔的杂质；其他均为非洛地平的杂质。琥珀酸美托洛尔单个杂质不得过0.5％，总杂质不得过1.0％，供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液中琥珀酸美托洛尔主峰面积0.01倍(0.01％)的峰可忽略不计；如有与杂质i保留时间(相对非洛地平主峰时间约为0.95)一致的色谱峰，不得过非洛地平标示量的1.0％，非洛地平的其他单个杂质不得过0.5％，总杂质不得过1.5％，供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液中非洛地平主峰面积0.05倍(0.05％)的峰可忽略不计。
加速稳定性试验(加速试验条件：温度40℃±2℃、相对湿度75％±5％)加速试验6个月的结果如下：
杂质加速试验对比结果
上述加速6个月的稳定性试验结果表明：本发明技术方案的质量控制方法，能快速、准确的、可重复性的检测出非洛地平琥珀酸美托洛尔缓释片中杂质的含量，确保非洛地平琥珀酸美托洛尔缓释片在杂质方面的可控性，避免因杂质含量增高却未检测出带来的产品质量、疗效、安全方面的隐患。