本发明涉及一种纳米金铜猝灭硫化锌镉电致发光胰岛素传感器的制备方法。具体涉及一种硫化锌镉作为发光材料，利用氨基化氮掺杂介孔碳优良的导电性和大的比表面积作为基底材料增加发光体和抗体的固载量，纳米金铜作为二抗标记物，制备一种检测胰岛素的夹心型电化学发光免疫传感器，属于电化学发光检测技术领域。
背景技术：
胰岛素是胰岛细胞分泌的一种蛋白质激素，既能促进血液中的葡萄糖进入肝、肌肉和脂肪等组织细胞，又能促进葡萄糖氧化分解释放能量，供机体利用，是维持血糖在正常水平的主要激素。胰岛素分泌不足或缺乏时，会引起高血糖，甚至是糖尿病。因此，能否准确测定血液中胰岛素的浓度，对高血糖或糖尿病的早期诊断、临床和基础研究具有重要的价值。
目前检测胰岛素的分析方法主要有免疫分析法、色谱法，但是这两种方法操作繁琐，灵敏度低，因此，为了克服以上传统分析方法的缺点，本发明设计了一种特异性强，灵敏度高，操作快速简便的电致发光免疫分析方法。
本发明制备了金包裹硫化锌镉纳米材料，进一步放大了硫化锌镉的电化学发光信号，利用氨基化氮掺杂介孔碳作为载体，其具有良好的导电性和较大的比表面积，通过金氨键连接大量的金包裹硫化锌镉，在放大电化学发光信号的同时，也增加捕获抗体的固载量，同时合成了纳米金铜，利用纳米金铜与硫化锌镉之间的能量共振转移，在一定程度上猝灭硫化锌镉的电化学发光。该方法可有效用于胰岛素的分析。该方法具有成本低、灵敏度高、特异性好、检测快速等优点，而且制备过程较为简单，有效克服了目前胰岛素检测方法的不足。
技术实现要素：
本发明的目的之一是合成氨基化氮掺杂介孔碳纳米材料，介孔碳材料拥有较大的比表面积和多孔结构，有利于电解液中共反应剂的扩散，使共反应剂快速达到电极表面；相比于介孔碳，氮掺杂介孔碳具有更高的稳定性、导电性，用其构建传感器可增强电子转移速率，提高传感器的稳定性。其较大的比表面积有利于固载更多的发光体和捕获抗体，增强传感器的灵敏度。氮掺杂介孔碳表面含有大量的氨基，可用于进一步与金纳米粒子结合，将金包裹硫化镉固定在电极表面。
本发明的目的之二是制备金包裹硫化锌镉，探究了不同掺杂量的锌对硫化镉电化学发光响应的影响，相比于硫化镉，通过锌的掺杂进一步增强硫化锌镉的电化学发光性能。金纳米粒子固载在硫化锌镉表面，金纳米粒子优异的导电性能可加速电子转移速率，进一步增强硫化锌镉的电致发光；同时，金纳米粒子起到桥梁的作用，可同过金氨健结合，将金包裹硫化镉固载在电极表面，还将胰岛素捕获抗体捕获至电极表面。
本发明的目的之三是合成纳米金铜，纳米金铜的紫外吸收图谱与硫化锌镉的电致发光光谱有很好的重叠，纳米金铜作为受体，硫化锌镉作为供体，二者之间可以发生能量共振转移，从而猝灭硫化锌镉的电致发光响应；同时利用纳米金铜良好的生物相容性，用于捕获胰岛素检测抗体，进而用于构建胰岛素夹心型电致发光免疫传感器。
本发明的目的之四利用纳米金铜对硫化锌镉电致发光的猝灭效应，构建一种高效、灵敏的夹心型电致发光免疫传感器，将该夹心型电致发光免疫传感器应用于胰岛素的快速、灵敏检测，通过猝灭型传感策略实现对胰岛素的痕量检测。
本发明的技术方案如下：
1. 一种纳米金铜猝灭硫化锌镉电致发光胰岛素传感器的制备方法
（1）依次用1.0、0.3、0.05 μm的氧化铝粉末对玻碳电极进行抛光，在超纯水和乙醇中超声清洗，氮气吹干；
（2）将6 μL、浓度为0.5 ~ 5 mg/mL的金包裹硫化锌镉/氨基化氮掺杂介孔碳溶液Au@ZnxCd1-xS/NMC滴涂至电极表面，晾干；
（3）滴加6 µL浓度为5 ~ 15 µg/mL的胰岛素捕获抗体Ab1溶液，于4℃冰箱中孵化1 h，超纯水洗净，晾干；
（4）继续滴加3 μL、质量分数为1 ~ 3%的牛血清白蛋白溶液BSA，于4 ℃冰箱中孵化1 h，超纯水洗净，晾干；
（4）将6 μL浓度为0.0001 ~ 30 ng/mL的一系列不同浓度的胰岛素抗原Ag，室温下孵化1 h，超纯水洗净，晾干；
（5）将6 μL浓度为1 ~ 3 mg/mL的纳米金铜标记的胰岛素检测抗体溶液AuCu-Ab2滴在修饰电极上，室温下孵化1 h，清洗干净，即制得纳米金铜猝灭硫化锌镉电致发光胰岛素传感器，4℃下储存备用。
2. Au@ZnxCd1-xS/NMC的制备
（1）氮掺杂介孔碳NMC的制备
将0.918 ~ 2.754 g苯酚和1.808 ~ 5.424 g甲醛溶于10 ~ 40 mL浓度为0.2 mol/L的氢氧化钠溶液中，在60 ~ 80 ℃下搅拌40 min，形成溶液A，将1.230 ~ 3.690 g三聚氰胺和2.375 ~ 7.125 g甲醛加入溶液A，继续搅拌30 min，并加入40 ~ 60 g质量分数为30% 硅胶溶液，继续搅拌5 min，将混合液转移至反应釜中，70 ~ 90 ℃下反应3天，在80 ℃下真空干燥24 h；
将干燥后的产物置于管式炉中，氮气氛围中，800 ℃碳化2 ~ 4 h，得到黑色粉末，然后将黑色粉末放入20 ~ 30 mL浓度为0.2 mol/L的氢氧化钠溶液中，80 ℃下反应6 ~ 18 h，离心分离，100 ℃下真空干燥12 ~ 36 h，得到黑色产物氮掺杂介孔碳NMC；
（2）氨基化NMC的制备
将50 ~ 150 mg NMC分散于10 mL乙醇溶液中，继续加入0.1 ~ 0.3 mL的氨丙基三乙氧基硅烷，在70 ℃下反应1 ~ 2 h，洗涤干燥，得到氨基化NMC；
（3）ZnxCd1-xS的制备
将摩尔比为1:10、1:12、1:14、1:16、1:20的醋酸锌和醋酸镉溶于30 ~ 40 mL 超纯水中，缓慢搅拌并加入35 ~ 45 mL浓度为0.5 mol/mL的硫化钠溶液，室温下搅拌10 ~ 14 h，将得到的混合溶液转移至高压反应釜中，160 ℃下反应12 ~ 20 h，将产物离心洗涤，得到黄色固体ZnxCd1-xS；
（4）Au@ZnxCd1-xS的制备
将5 ~ 20 mL浓度为1 mmol/L的氯金酸溶液和1 ~ 3 mL浓度为10 mmol/L的溴化十六烷基三甲铵溶液混合，并加入2 ~ 4 mL浓度为100 mmol/L的硼氢化钠溶液，形成金溶胶；
将0.1 ~ 0.3 g半胱氨酸溶于1 ~ 3 mL乙醇中，然后加入15 ~ 25 mg ZnxCd1-xS，搅拌4 ~ 8 h，离心洗涤，得到巯基功能化的ZnxCd1-xS，将1 ~ 2 mL浓度为2 mg/mL的巯基功能化的ZnxCd1-xS溶液与2 ~ 4 mL金溶胶振荡混合4 ~ 6 h，离心洗涤，得到Au@ZnxCd1-xS；
（5）Au@ZnxCd1-xS/NMC的制备
将2 ~ 4 mL浓度为2 mg/mL的Au@ZnxCd1-xS溶液与1 ~ 2 mL浓度为2 mg/mL的氨基化NMC溶液混合，室温下振荡8 ~ 12 h，离心洗涤，得到Au@ZnxCd1-xS/NMC。
3. 纳米金铜标记的胰岛素检测抗体溶液AuCu-Ab2的制备
（1）纳米金铜AuCu的制备
将400 ~ 500 mg正十六胺溶于40 mL超纯水中，并加入1 ~ 5 mL浓度为100 mmol/L的氯化铜溶液和1 ~ 5 mL浓度为100 mmol/L氯金酸溶液，持续搅拌下20 min，溶液变为黄绿色，向黄绿色溶液中逐滴加入20 ~ 30 mL浓度为1 mol/L的葡萄糖溶液，在室温下搅拌12 h，再于100 ℃下加热20 ~ 40 min，溶液由黄绿色变成棕色，将样品离心分离，真空干燥，得到产物纳米金铜AuCu;
（2）纳米金铜标记的胰岛素检测抗体溶液AuCu-Ab2的制备
将1 mL浓度为1 ~ 3 mg/mL的AuCu溶液与0.5 ~ 1 mL浓度为10 μg/mL胰岛素检测抗体Ab2混合，震荡12 ~ 24 h，得到纳米金铜标记的胰岛素检测抗体孵化物，将其分散于1 mL浓度为40 ~ 60 mg/mL 的1-丁基-吡啶硼酸盐离子溶液中，制得纳米金铜标记的胰岛素检测抗体溶液AuCu-Ab2，于4℃下储存。
本发明的有益成果
1本发明对硫化镉进行锌的掺杂，对比同等条件下合成的硫化镉，锌掺杂硫化镉具有更好的电致发光性能。
2本发明通过将硫化锌镉巯基功能化，在其表面连接大量的金纳米粒子，进一步增强了硫化锌镉的电化学发光性能，同时金纳米粒子可通过金氨健将胰岛素捕获抗体固定在电极表面，用于捕获胰岛素。
3本发明采用了氨基化氮掺杂介孔碳，与介孔碳相比，保留了介孔碳大的比表面积，进一步增强了其导电性，另外，其表面富含大量的氨基，可通过金氨键连接大量的金包裹硫化锌镉，进而增加捕获抗体的固载量。
4本发明合成了一种纳米金铜作为二抗标记物，利用其生物兼容性好，比表面积大等优点有效地增加了检测抗体的固载量。
5本发明以硫化锌镉为发光体，以纳米金铜作为能量受体，硫化锌镉作为能量供体，二者之间可发生能量共振转移，从而在一定程度上猝灭硫化锌镉的电致发光。
6. 本发明基于纳米金铜猝灭硫化锌镉电致发光构建了一种猝灭型电化学发光传感器用于胰岛素的检测，操作简单，反应快速，信号响应范围宽，可以实现简单、快速、灵敏、特异性检测。
具体实施方式
实施例1 一种纳米金铜猝灭硫化锌镉电致发光胰岛素传感器的制备方法
（1）依次用1.0、0.3、0.05 μm的氧化铝粉末对玻碳电极进行抛光，在超纯水和乙醇中超声清洗，氮气吹干；
（2）将6 μL、浓度为0.5 mg/mL的金包裹硫化锌镉/氨基化氮掺杂介孔碳溶液Au@ZnxCd1-xS/NMC滴涂至电极表面，晾干；
（3）滴加6 µL浓度为5 µg/mL的胰岛素捕获抗体Ab1溶液，于4℃冰箱中孵化1 h，超纯水洗净，晾干；
（4）继续滴加3 μL、质量分数为1%的牛血清白蛋白溶液BSA，于4 ℃冰箱中孵化1 h，超纯水洗净，晾干；
（4）将6 μL浓度为0.0001 ~ 30 ng/mL的一系列不同浓度的胰岛素抗原Ag，室温下孵化1 h，超纯水洗净，晾干；
（5）将6 μL浓度为1 mg/mL的纳米金铜标记的胰岛素检测抗体溶液AuCu-Ab2滴在修饰电极上，室温下孵化1 h，清洗干净，即制得纳米金铜猝灭硫化锌镉电致发光胰岛素传感器，4℃下储存备用。
实施例2 一种纳米金铜猝灭硫化锌镉电致发光胰岛素传感器的制备方法
（1）依次用1.0、0.3、0.05 μm的氧化铝粉末对玻碳电极进行抛光，在超纯水和乙醇中超声清洗，氮气吹干；
（2）将6 μL、浓度为3 mg/mL的金包裹硫化锌镉/氨基化氮掺杂介孔碳溶液Au@ZnxCd1-xS/NMC滴涂至电极表面，晾干；
（3）滴加6 µL浓度为10 µg/mL的胰岛素捕获抗体Ab1溶液，于4℃冰箱中孵化1 h，超纯水洗净，晾干；
（4）继续滴加3 μL、质量分数为2%的牛血清白蛋白溶液BSA，于4 ℃冰箱中孵化1 h，超纯水洗净，晾干；
（4）将6 μL浓度为0.0001 ~ 30 ng/mL的一系列不同浓度的胰岛素抗原Ag，室温下孵化1 h，超纯水洗净，晾干；
（5）将6 μL浓度为2 mg/mL的纳米金铜标记的胰岛素检测抗体溶液AuCu-Ab2滴在修饰电极上，室温下孵化1 h，清洗干净，即制得纳米金铜猝灭硫化锌镉电致发光胰岛素传感器，4℃下储存备用。
实施例3 一种纳米金铜猝灭硫化锌镉电致发光胰岛素传感器的制备方法
（1）依次用1.0、0.3、0.05 μm的氧化铝粉末对玻碳电极进行抛光，在超纯水和乙醇中超声清洗，氮气吹干；
（2）将6 μL、浓度为5 mg/mL的金包裹硫化锌镉/氨基化氮掺杂介孔碳溶液Au@ZnxCd1-xS/NMC滴涂至电极表面，晾干；
（3）滴加6 µL浓度为15 µg/mL的胰岛素捕获抗体Ab1溶液，于4℃冰箱中孵化1 h，超纯水洗净，晾干；
（4）继续滴加3 μL、质量分数为3%的牛血清白蛋白溶液BSA，于4 ℃冰箱中孵化1 h，超纯水洗净，晾干；
（4）将6 μL浓度为0.0001 ~ 30 ng/mL的一系列不同浓度的胰岛素抗原Ag，室温下孵化1 h，超纯水洗净，晾干；
（5）将6 μL浓度为3 mg/mL的纳米金铜标记的胰岛素检测抗体溶液AuCu-Ab2滴在修饰电极上，室温下孵化1 h，清洗干净，即制得纳米金铜猝灭硫化锌镉电致发光胰岛素传感器，4℃下储存备用。
实施例4 Au@ZnxCd1-xS/NMC的制备
（1）氮掺杂介孔碳NMC的制备
将0.918 g苯酚和1.808 g甲醛溶于10 mL浓度为0.2 mol/L的氢氧化钠溶液中，在60 ℃下搅拌40 min，形成溶液A，将1.230 g三聚氰胺和2.375 g甲醛加入溶液A，继续搅拌30 min，并加入40 g质量分数为30% 硅胶溶液，继续搅拌5 min，将混合液转移至反应釜中，70 ℃下反应3天，在80 ℃下真空干燥24 h；
将干燥后的产物置于管式炉中，氮气氛围中，800 ℃碳化2 h，得到黑色粉末，然后将黑色粉末放入20 mL浓度为0.2 mol/L的氢氧化钠溶液中，80 ℃下反应6 h，离心分离，100 ℃下真空干燥12 h，得到黑色产物氮掺杂介孔碳NMC；
（2）氨基化NMC的制备
将50 mg NMC分散于10 mL乙醇溶液中，继续加入0.1 mL的氨丙基三乙氧基硅烷，在70 ℃下反应1 h，洗涤干燥，得到氨基化NMC；
（3）ZnxCd1-xS的制备
将摩尔比为1:10、1:12、1:14、1:16、1:20的醋酸锌和醋酸镉溶于30 mL 超纯水中，缓慢搅拌并加入35 mL浓度为0.5 mol/mL的硫化钠溶液，室温下搅拌10 h，将得到的混合溶液转移至高压反应釜中，160 ℃下反应12 h，将产物离心洗涤，得到黄色固体ZnxCd1-xS；
（4）Au@ZnxCd1-xS的制备
将5 mL浓度为1 mmol/L的氯金酸溶液和1 mL浓度为10 mmol/L的溴化十六烷基三甲铵溶液混合，并加入2 mL浓度为100 mmol/L的硼氢化钠溶液，形成金溶胶；
将0.1 g半胱氨酸溶于1 mL乙醇中，然后加入15 mg ZnxCd1-xS，搅拌4 ~ 8 h，离心洗涤，得到巯基功能化的ZnxCd1-xS，将1 mL浓度为2 mg/mL的巯基功能化的ZnxCd1-xS溶液与2 mL金溶胶振荡混合4 h，离心洗涤，得到Au@ZnxCd1-xS；
（5）Au@ZnxCd1-xS/NMC的制备
将2 mL浓度为2 mg/mL的Au@ZnxCd1-xS溶液与1 mL浓度为2 mg/mL的氨基化NMC溶液混合，室温下振荡8 h，离心洗涤，得到Au@ZnxCd1-xS/NMC。
实施例5 Au@ZnxCd1-xS/NMC的制备
（1）氮掺杂介孔碳NMC的制备
将1.836 g苯酚3.616 g甲醛溶于25 mL浓度为0.2 mol/L的氢氧化钠溶液中，在70 ℃下搅拌40 min，形成溶液A，将2.460 g三聚氰胺和4.75 g甲醛加入溶液A，继续搅拌30 min，并加入50 g质量分数为30% 硅胶溶液，继续搅拌5 min，将混合液转移至反应釜中，80 ℃下反应3天，在80 ℃下真空干燥24 h；
将干燥后的产物置于管式炉中，氮气氛围中，800 ℃碳化3 h，得到黑色粉末，然后将黑色粉末放入25 mL浓度为0.2 mol/L的氢氧化钠溶液中，80 ℃下反应12 h，离心分离，100 ℃下真空干燥24 h，得到黑色产物氮掺杂介孔碳NMC；
（2）氨基化NMC的制备
将100 mg NMC分散于10 mL乙醇溶液中，继续加入0.2 mL的氨丙基三乙氧基硅烷，在70 ℃下反应1.5 h，洗涤干燥，得到氨基化NMC；
（3）ZnxCd1-xS的制备
将摩尔比为1:10、1:12、1:14、1:16、1:20的醋酸锌和醋酸镉溶于35 mL 超纯水中，缓慢搅拌并加入40 mL浓度为0.5 mol/mL的硫化钠溶液，室温下搅拌12 h，将得到的混合溶液转移至高压反应釜中，160 ℃下反应16 h，将产物离心洗涤，得到黄色固体ZnxCd1-xS；
（4）Au@ZnxCd1-xS的制备
将15 mL浓度为1 mmol/L的氯金酸溶液和2 mL浓度为10 mmol/L的溴化十六烷基三甲铵溶液混合，并加入3 mL浓度为100 mmol/L的硼氢化钠溶液，形成金溶胶；
将0.2 g半胱氨酸溶于2 mL乙醇中，然后加入20 mg ZnxCd1-xS，搅拌4 ~ 8 h，离心洗涤，得到巯基功能化的ZnxCd1-xS，将1.5 mL浓度为2 mg/mL的巯基功能化的ZnxCd1-xS溶液与3 mL金溶胶振荡混合5 h，离心洗涤，得到Au@ZnxCd1-xS；
（5）Au@ZnxCd1-xS/NMC的制备
将3 mL浓度为2 mg/mL的Au@ZnxCd1-xS溶液与1.5 mL浓度为2 mg/mL的氨基化NMC溶液混合，室温下振荡10 h，离心洗涤，得到Au@ZnxCd1-xS/NMC。
实施例6 Au@ZnxCd1-xS/NMC的制备
（1）氮掺杂介孔碳NMC的制备
将2.754 g苯酚和5.424 g甲醛溶于40 mL浓度为0.2 mol/L的氢氧化钠溶液中，在80 ℃下搅拌40 min，形成溶液A，将3.690 g三聚氰胺和7.125 g甲醛加入溶液A，继续搅拌30 min，并加入60 g质量分数为30% 硅胶溶液，继续搅拌5 min，将混合液转移至反应釜中，90 ℃下反应3天，在80 ℃下真空干燥24 h；
将干燥后的产物置于管式炉中，氮气氛围中，800 ℃碳化4 h，得到黑色粉末，然后将黑色粉末放入30 mL浓度为0.2 mol/L的氢氧化钠溶液中，80 ℃下反应18 h，离心分离，100 ℃下真空干燥36 h，得到黑色产物氮掺杂介孔碳NMC；
（2）氨基化NMC的制备
将150 mg NMC分散于10 mL乙醇溶液中，继续加入0.3 mL的氨丙基三乙氧基硅烷，在70 ℃下反应2 h，洗涤干燥，得到氨基化NMC；
（3）ZnxCd1-xS的制备
将摩尔比为1:10、1:12、1:14、1:16、1:20的醋酸锌和醋酸镉溶于40 mL 超纯水中，缓慢搅拌并加入45 mL浓度为0.5 mol/mL的硫化钠溶液，室温下搅拌14 h，将得到的混合溶液转移至高压反应釜中，160 ℃下反应20 h，将产物离心洗涤，得到黄色固体ZnxCd1-xS；
（4）Au@ZnxCd1-xS的制备
将20 mL浓度为1 mmol/L的氯金酸溶液和3 mL浓度为10 mmol/L的溴化十六烷基三甲铵溶液混合，并加入4 mL浓度为100 mmol/L的硼氢化钠溶液，形成金溶胶；
将0.3 g半胱氨酸溶于3 mL乙醇中，然后加入25 mg ZnxCd1-xS，搅拌4 ~ 8 h，离心洗涤，得到巯基功能化的ZnxCd1-xS，将mL浓度为2 mg/mL的巯基功能化的ZnxCd1-xS溶液与4 mL金溶胶振荡混合6 h，离心洗涤，得到Au@ZnxCd1-xS；
（5）Au@ZnxCd1-xS/NMC的制备
将4 mL浓度为2 mg/mL的Au@ZnxCd1-xS溶液与2 mL浓度为2 mg/mL的氨基化NMC溶液混合，室温下振荡12 h，离心洗涤，得到Au@ZnxCd1-xS/NMC。
实施例7 纳米金铜标记的胰岛素检测抗体溶液AuCu-Ab2的制备
（1）纳米金铜AuCu的制备
将400 mg正十六胺溶于40 mL超纯水中，并加入1 mL浓度为100 mmol/L的氯化铜溶液和1 mL浓度为100 mmol/L氯金酸溶液，持续搅拌下20 min，溶液变为黄绿色，向黄绿色溶液中逐滴加入20 mL浓度为1 mol/L的葡萄糖溶液，在室温下搅拌12 h，再于100 ℃下加热20 min，溶液由黄绿色变成棕色，将样品离心分离，真空干燥，得到产物纳米金铜AuCu;
（2）纳米金铜标记的胰岛素检测抗体溶液AuCu-Ab2的制备
将1 mL浓度为1 mg/mL的AuCu溶液与0.5 mL浓度为10 μg/mL胰岛素检测抗体Ab2混合，震荡12 h，得到纳米金铜标记的胰岛素检测抗体孵化物，将其分散于1 mL浓度为40 mg/mL 的1-丁基-吡啶硼酸盐离子溶液中，制得纳米金铜标记的胰岛素检测抗体溶液AuCu-Ab2，于4℃下储存。
实施例8 纳米金铜标记的胰岛素检测抗体溶液AuCu-Ab2的制备
（1）纳米金铜AuCu的制备
将450 mg正十六胺溶于40 mL超纯水中，并加入3 mL浓度为100 mmol/L的氯化铜溶液和3 mL浓度为100 mmol/L氯金酸溶液，持续搅拌下20 min，溶液变为黄绿色，向黄绿色溶液中逐滴加入25 mL浓度为1 mol/L的葡萄糖溶液，在室温下搅拌12 h，再于100 ℃下加热30 min，溶液由黄绿色变成棕色，将样品离心分离，真空干燥，得到产物纳米金铜AuCu;
（2）纳米金铜标记的胰岛素检测抗体溶液AuCu-Ab2的制备
将1 mL浓度为2 mg/mL的AuCu溶液与0.8 mL浓度为10 μg/mL胰岛素检测抗体Ab2混合，震荡18 h，得到纳米金铜标记的胰岛素检测抗体孵化物，将其分散于1 mL浓度为50 mg/mL 的1-丁基-吡啶硼酸盐离子溶液中，制得纳米金铜标记的胰岛素检测抗体溶液AuCu-Ab2，于4℃下储存。
实施例9 纳米金铜标记的胰岛素检测抗体溶液AuCu-Ab2的制备
（1）纳米金铜AuCu的制备
将500 mg正十六胺溶于40 mL超纯水中，并加入5 mL浓度为100 mmol/L的氯化铜溶液和5 mL浓度为100 mmol/L氯金酸溶液，持续搅拌下20 min，溶液变为黄绿色，向黄绿色溶液中逐滴加入30 mL浓度为1 mol/L的葡萄糖溶液，在室温下搅拌12 h，再于100 ℃下加热40 min，溶液由黄绿色变成棕色，将样品离心分离，真空干燥，得到产物纳米金铜AuCu;
（2）纳米金铜标记的胰岛素检测抗体溶液AuCu-Ab2的制备
将1 mL浓度为3 mg/mL的AuCu溶液与1 mL浓度为10 μg/mL胰岛素检测抗体Ab2混合，震荡24 h，得到纳米金铜标记的胰岛素检测抗体孵化物，将其分散于1 mL浓度为60 mg/mL 的1-丁基-吡啶硼酸盐离子溶液中，制得纳米金铜标记的胰岛素检测抗体溶液AuCu-Ab2，于4℃下储存。