阴离子交换-疏水性混合模式的利记博彩app
【专利说明】阴离子交换-疏水性混合模式
[0001]相关专利申请的交叉引用
[0002]本申请要求2012年3月8日提交的美国临时专利申请号61/608，418的优先权权益，其通过引用纳入本文用于所有目的。
[0003]发明背景
[0004]免疫球蛋白的液体源主要是哺乳动物体液或细胞培养收获物，来自液体源的免疫球蛋白提取物对于获得充分浓缩或纯化形式的免疫球蛋白来用于诊断和治疗用途以及一般实验室研宄而言是重要的。类似地，纯化其它种类的蛋白质和来自生物样品的其它分子也是有价值的。
【发明内容】
[0005]提供连接至配体的色谱固体支持物(支持物(Support))。在一些实施方式中，所述支持物和配体具有下式:
[0006]支持物-(X)-N(R^R2)-R3-L-Ar,其中，X是间隔子或不存在^和R2各自选自氢和包含I?6个碳的烷基；R3是包含I?6个碳的烷基或包含I?6个碳的环烷基；L是NR4、O或S ;其中R4是氢或包含I?6个碳的烷基；且Ar是芳基。
[0007]在一些实施方式中，R1和R 2是氢。
[0008]在一些实施方式中，R3是包含I?4个碳的烷基。
[0009]在一些实施方式中，R3是包含1、2、3、4、5或6个碳的烷基。
[0010]在一些实施方式中，所述芳基是苯基。在一些实施方式中，所述芳基是经取代的苯基。在一些实施方式中，所述经取代的苯基是烷基取代的苯基。
[0011]在一些实施方式中，R1和/或R 2是包含I?6个碳的烷基且Ar是烷基取代的苯基。
[0012]在一些实施方式中，所述配体是N-苯基乙二胺或其盐。在一些实施方式中，所述配体是2-苯氧基乙胺或其盐。
[0013]在一些实施方式中，X(接头/间隔子)不存在。在一些实施方式中，X是间隔子。
[0014]还提供从样品纯化生物分子的方法。在一些实施方式中，所述方法包括:使该样品接触如上文或本文中他处所述的连接至配体的色谱固体支持物；和收集纯化的生物分子。
[0015]在一些实施方式中，所述生物分子是蛋白质。在一些实施方式中，所述蛋白质是抗体。
[0016]在一些实施方式中，所述样品包含单体抗体和聚集体，并且使单体抗体与所述聚集体分离，从而导致单体抗体的纯化。
[0017]在一些实施方式中，所述纯化的生物分子是单体抗体。在一些实施方式中，所述样品的单体抗体被固定在所述色谱固体支持物上，随后被洗脱。在一些实施方式中，所述样品的单体抗体流经所述色谱固体支持物并被收集。
[0018]定义
[0019]“抗体”是指免疫球蛋白、其复合(例如，融合)形式或其片段形式。该术语可包括但不限于:源自人或其它哺乳动物细胞系的IgA、IgD、IgE、IgG和IgM类的多克隆或单克隆抗体，包括天然形式或遗传修饰形式，如人源化、人、单链、嵌合、合成、重组、杂合、突变、移接和体外产生的抗体。“抗体”也可包括复合形式，其包括但不限于含有免疫球蛋白部分的融合蛋白。“抗体”还可包括抗体片段，如Fab、F(ab’)2、Fv、scFv、Fd、dAb、Fc，无论它们是否保留抗原结合功能。
[0020]本文所用的术语“烷基”指直链或支链的，饱和的脂族基团，其具有指示数量的碳原子。例如，C1-C6烷基包括但不限于:甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基等。其它烷基基团包括但不限于:庚基、辛基、壬基、癸基等。烷基可包括任何数量的碳，例如 1-2、1-3、1-4、1-5、1-6、1-7、1-8、1-9、1-10、2-3、2-4、2-5、2-6、
3-4、3-5、3-6、4-5、4-6和5_6个。所述烷基基团通常是单价的，但可以是二价的，例如当烷基基团将两个部分连接到一起时。
[0021]本文所用的术语“环烷基”指饱和的或部分不饱和的单环、稠合二环或桥接多环组成物，其包含3?12个环原子，或指示数量的原子。单环包括，例如，环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环辛基。二环和多环包括，例如，降莰烷、十氢化萘和金刚烷。例如，C3_8环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环辛基和降莰烷。
[0022]本文中所用的术语“芳基”指单环或稠合二环、三环或更大的，芳族环组成物，其包含6?16个环碳原子。例如，芳基可以是苯基、苄基或萘基，优选苯基。“亚芳基”指源自芳基基团的二价基团。芳基基团可以是被单_，二-或三-取代有一个、两个或三个选自下组的基团:烧基、烧氧基、芳基、轻基、齒素、氛基、氣基、氣基_烧基、二氣甲基、亚烧基一■氧基和氧基-C2-C3-亚烷基；其均任选地被进一步取代，例如如上文定义的那样；或1-或2-萘基；或1-或2-菲基。亚烷基二氧基是与苯基的两个邻近碳原子连接的二价取代基，例如亚甲基二氧基或亚乙基二氧基。氧基-C2-C3-亚烷基也是与苯基的两个邻近碳原子连接的二价取代基，例如，氧乙稀或氧丙稀。氧基-C2-C3-亚烧基_苯基的一个不例是2，3- 二氛苯并呋喃-5-基。
[0023]经取代的苯基基团的示例有，例如，4-氯酚-1-基、3，4- 二氯酚-1-基、4_甲氧基酚-1-基、4-甲基酚-1-基、4-氨基甲基酚-1-基、4-甲氧基乙基氨基甲基酚-1-基、
4-羟基乙基氨基甲基酚-1-基、4-羟基乙基_(甲基)_氨基甲基酚-1-基、3-氨基甲基酚-1-基、4-N-乙酰基氨基甲基酚-1-基、4-氨基酚-1-基、3-氨基酚-1-基、2-氨基酚-1-基、4-苯基-酚-1-基、4-(咪唑-1-基)-酚-基、4-(咪唑-1-基甲基)-酚-1-基、4-(吗啉-1-基)_酚-1-基、4-(吗啉-1-基甲基)_酚-1-基、4-(2-甲氧基乙基氨基甲基)-酚-1-基和4-(吡咯烷-1-基甲基)-酚-1-基、4-(苯硫基)-酚-1-基、4-(3-苯硫基)_酚-1-基、4-(4-甲基哌嗪-1-基)_酚-1-基和4-(哌啶基)_苯基和4-(吡啶基)-苯基，其任选地在杂环中被取代。
[0024]本文中所用的术语“接头”或“间隔子”指将本发明的色谱配体连接至色谱基质的化学部分。可用于本发明的接头的长度可以是，例如，至多30个碳原子。用于将所述接头连接至本发明的化合物和生物分子的键的类型包括但不限于，酰胺、胺、酯、氨基甲酸酯、脲、硫醚、硫代氨基甲酸酯、硫代碳酸酯和硫脲。本领域技术人员会理解，其它类型的键也可用于本发明。如本文他处所述，所述配体和所述固体支持物基质之间的间隔子是任选的。
[0025]“生物分子制剂”和“生物样品”是指包含需纯化的生物来源的目标分子(“生物分子”)的任何组合物。在一些实施方式中，待纯化的目标分子是抗体或非抗体蛋白。
[0026]“结合-洗脱模式”是指色谱的操作方法，其中建立缓冲条件从而向配体(其任选地结合至固体支持物)添加样品时，目标分子以及，任选不需要的污染物结合至所述配体。随后可通过改变条件使目标从支持物洗脱来实现目标的分级分离。在一些实施方式中，污染物在目标洗脱之后仍保持结合。在一些实施方式中，污染物在目标洗脱之前流通或结合并在目标之前被洗脱。
[0027]“流通模式”是指色谱的操作方法，其中建立缓冲条件使待纯化的目标分子流通包含配体的色谱支持物，同时选择性地保留至少一些样品污染物，从而使它们被移除。
[0028]发明详述
[0029]1.介绍
[0030]本文描述一类色谱配体，其允许从样品有效纯化目标生物分子，并且发现这特别有利于从聚集目标生物分子纯化单体目标生物分子。特别地，实施例证明本文所述的配体在从抗体聚集体分离单体抗体上优于市售产品Capto Adhere?(配体:N_节基-N-甲基乙醇胺)。
[0031]I1.色谱配体
[0032]本文所述的色谱配体在一些实施方式中可以由下式表示:
[0033]-N (R1, R2) -R3-L-Ar,或其盐