一株克氏梭状芽胞杆菌jzz及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及一株克氏梭状芽胞杆菌JZZ及其应用，属于生物技术领域。
【背景技术】
[0002] 中国酿酒历史悠久，酒文化底蕴深厚。在漫长的酿酒实践中，形成了各具特色、风 格迴异的多种香型的白酒，其中，浓香型白酒具有芳香浓郁、绵柔甘浏、香味协调、入口甜、 落口绵、尾净余长等特点，成为白酒行业的主流产品。构成浓香型酒典型风格的主体成分是 己酸乙醋，运种成分含量高且香气突出。传统固态白酒酿造的一个重要特征是利用鲁泥微 生物参与发酵过程。浓香型鲁泥中关键功能菌己酸菌在香气形成中起到了至关重要的作 用。己酸菌的代谢产物己酸，在白酒中不仅起到呈香、助香、减少酒体刺激的作用，而且还可 W与粮酷发酵产生的酒精发生醋化反应，生成己酸乙醋等香味物质，从而改善浓香型白酒 的风味及口感。
[0003] 己酸菌不是生物学分类意义上的物种名称，是酿酒行业中约定俗成一个称谓，包 含多个微生物种属，运类微生物的共同特征是代谢产物有己酸，可作为己酸乙醋合成的前 体物。检索文献可知，已有大量的己酸菌分离、纯化、鉴定W及应用研究，其中，在菌种鉴定 方面，除专利201010238106报道1例己酸菌(Clostridium butyriCum)GK13菌株外，其余报 道的己酸菌均为克氏梭状芽抱杆菌(Clostridi皿kluyveri)。
[0004] 克氏梭状芽抱杆菌(Clostridium kluyveri)早在上世纪30年代就被发现，是一个 典型的具有产己酸能力的菌种。但实际生产中，由于各地的自然环境、气候条件、鲁泥理化 特性、酿酒工艺的不同，各酒企分离己酸菌的习性各不相同。己酸菌工业菌株的习性不同， 在实际生产中的表现就会有很大差异，运直接关系到酿造的产酒效果。
[0005] 在白酒酿造过程中，伴随着粮酷发酵进程发酵体系内部会发生显著变化。其中一 个因素是发酵体系溫度变化，下料时初始溫度一般为20°c左右，随着淀粉降解放热，逐渐上 升至35°C-4(TC，之后会维持在运个水平或略有下降，当然，在鲁池的不同位置，局部溫度也 会不同，有的甚至超过40°C W上，另外，由于鲁池开放式生产，受季节、早晚、阴晴的天气变 化，发酵体系溫度也将产生变化;另一因素是发酵体系中乙醇浓度变化，随着发酵进程，乙 醇浓度逐渐积累，发酵后期达到3-4%，局部可能更高。发酵体系溫度和乙醇浓度变化，要求 鲁泥功能菌具有一定程度的溫度、乙醇的耐受性。目前，尚未有较高溫度耐受性和乙醇耐受 性的高产己酸菌报道。
[0006] 己酸菌的高己酸产量是浓香型白酒酿造的一直追求目标。有的己酸菌菌株虽然高 产，但对溫度变化和乙醇浓度变化适应性不强，导致生产效果不稳定。由于发酵体系处于动 态变化之中，己酸菌对溫度、乙醇耐受性也应列入考查指标，运对于己酸菌菌株工业生产中 的稳定性W及适应传统酿造工艺具有重大意义。
【发明内容】
[0007]本发明的一个目的是提供一株克氏梭状芽抱杆菌(Clostridi皿kluyveri)JZZ。
[0008]本发明提供的克氏梭状芽抱杆菌（Clostridium kluyveriUZZ的保藏编号为 CGMCC No.11948。
[0009]本发明的菌株JZZ的分类命名为克氏梭状芽抱杆菌(Clostridium kluyveri)，该 菌株于2015年12月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、（简称 CGMCC，地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保 藏编号为CGMCC No.11948。
[0010] 本发明的另一个目的是提供上述克氏梭状芽抱杆菌或其菌悬液或其培养液或其 发酵产物或含有其的菌剂的新用途。
[0011] 本发明提供了上述克氏梭状芽抱杆菌或其菌悬液或其培养液或其发酵产物或含 有其的菌剂在如下1)-4)中任一种中的应用：
[0012] 1)生产己酸和/或己酸乙醋；
[0013] 2)制备生产己酸和/或己酸乙醋的产品；
[0014] 3)酿酒；
[0015] 4)制备酿酒的产品;所述产品具体为鲁泥。
[0016] 本发明还有一个目的是提供一种生产己酸的方法。
[0017] 本发明提供的生产己酸的方法包括如下步骤:在含有乙醇的体系中发酵培养权利 要求1所述的克氏梭状芽抱杆菌(Clostridi皿kluyveri)JZZ，收集发酵产物，得到己酸。
[0018] 上述方法中，所述发酵培养的溫度为36-40°C。
[0019] 上述方法中，所述发酵培养的溫度为37°C。
[0020] 上述方法中，所述含有乙醇的体系中的乙醇体积百分含量为2-10%;所述含有乙 醇的体系为乙酸钢液体培养基；乙酸钢液体培养基的溶剂为水，溶质及其浓度为：乙酸钢 0.5% (质量分数）、酵母膏0.1 % (质量分数）、硫酸儀0.02% (质量分数）、憐酸氨二钟0.04% (质量分数）、硫酸锭0.05 % (质量分数）、碳酸巧1 % (质量分数），乙醇2 % (质量分数）。
[0021] 上述方法中，所述含有乙醇的体系中的乙醇体积百分含量为2 %。
[0022] 上述方法中，
[0023] 所述发酵培养的时间为6-8天；
[0024] 所述发酵培养的时间具体为7天。
[0025] 上述方法中，在收集发酵产物后还包括如下步骤:有机溶剂萃取所述发酵产物，收 集有机相得到己酸。
[00%]上述方法在生产己酸和/或生产己酸乙醋和/或酿酒中的应用也属于本发明的保 护范围。
[0027] 本发明从鲁泥中分离获得一株克氏梭状芽胞杆菌JZZ。通过实验证明：该菌株为己 酸高产菌株，兼具有溫度、乙醇耐受性，其有益效果是适应了传统鲁池发酵体系的溫度变化 和乙醇浓度变化，且适应性强，能够满足传统白酒酿造工艺中生产要求，不仅提高了白酒的 品质，也提高了酿酒生产效益。
【具体实施方式】
[0028] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0029] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0030] 下述实施例中的乙酸钢培养基配制方法：
[0031] 1)乙酸钢液体培养基的溶剂为水，溶质及其浓度为：乙酸钢0.5% (质量分数）、酵 母膏0.1 % (质量分数）、硫酸儀0.02% (质量分数）、憐酸氨二钟0.04% (质量分数）、硫酸锭 0.05% (质量分数）、碳酸巧1 % (质量分数），乙醇2% (质量分数），灭菌后添加，pH为6.5。称 量溶解后，121°C灭菌30min。
[0032] 2)乙酸钢固体培养基为在乙酸钢液体培养基中加2% (质量分数)的琼脂得到的培 养基。
[0033] 实施例1、克氏梭状芽胞杆菌JZZ的获得
[0034] -、菌株的分离
[0035] 1、鲁泥的发酵培养
[0036] 将乙酸钢液体培养基装入试管中（装液量90%)，向试管中加入Ig老鲁泥(安徽金 种子酒业股份有限公司），80°C水浴热处理lOmin，密封，37°C发酵培养7d，得到发酵液。
[0037] 2、发酵液的纯化培养
[0038] 用乙酸萃取步骤1获得的发酵液，并用硫酸铜显色法初筛，蓝色为阳性;取初筛为 阳性的菌液ImL，添加到装有乙酸钢液体培养基的试管中，80°C水浴热处理lOmin，密封，37 °C培养7d;重复纯化2-3次，得到纯化后发酵液。
[0039] 3、纯化后发酵液
[0040] 将步骤2获得的纯化后发酵液进行梯度稀释，并在乙酸钢固体培养基中涂平板，37 °C培养7d后，挑取单个菌落进行发酵，并通过气相色谱对发酵培养得到的菌液中乙酸含量 进行检测。最终筛选到一株高产己酸的菌株，