一种苯酞类二聚体化合物的提取方法和用图
【技术领域】：
[0001] 本发明设及天然药物的分离制备方法及应用，具体设及从当归中提取分离的=种 苯献类二聚体化合物及其用途。
【背景技术】：
[0002] 当归是最常用的中药之一，来源于伞形科植物当归Angelica sinensis(01iv.) Diels的干燥根。当归含有挥发油、有机酸、多糖、黄酬等多种类型的化学成分，其药理作用 广泛，设及机体多个系统。大量的药理研究报道表明，当归及其主要化学成分对机体的造血 系统、循环系统、神经系统、免疫系统等多个系统具有药理作用;其主要生物活性包括造血、 抗血小板聚集、抗屯、律失常、抗福射、抗肿瘤、镇痛、调节平滑肌W及对脏器的保护作用。
[0003] 苯献类化合物作为一大类天然化合物主要存在于伞形科，目前进行的苯献类的植 物研究多数集中于芹菜，蔓本(迂蔓本，新疆蔓本），当归（日本当归，欧当归），川号(茶号，日 本川号）。该类化合物主要包括苯献单体及苯献二聚体类化合物，苯献单体类化合物的结构 母核为苯并巧喃内醋结构，具有12个碳，是蔓本属植物次生代谢产物的代表性成分之一;苯 献二聚体是苯献单体经环加成得到的，单体结构、聚合方式及聚合位置的不同产生了其结 构的多样性。目前关于苯献类单体活性的报道较多，却罕见苯献二聚体类化合物的活性报 道。
[0004] 具有抗肿瘤活性的天然植物已经成为人们开发新药的重要来源，因此人们正在不 断寻找活性较好，结构新颖的新型天然化合物。本发明从当归中分离得到=种苯献类二聚 体化合物，药理试验研究表明，该类化合物具有显著的抗肿瘤活性，经文献检索，迄今为止 未见该=种化合物在此方面的活性报道。
【发明内容】
：
[0005] 本发明的目的在于提供一种新的苯献类二聚体化合物。
[0006] 本发明的另一个目的在于提供一种苯献类二聚体化合物的制备方法，W及所述方 法制备得到的化合物的用途。
[0007] 本发明提供的一种苯献类二聚体化合物，其特征在于结构式为1、11或III:
[nn0Rl III
[0009] 本发明提供的一种苯献类二聚体化合物的制备方法，其特征在于包括W下步骤：
[0010] (1)粗提物的制备
[0011] 采用超临界C〇2萃取当归饮片，萃取条件:溫度:50°C ;压力：20MP;0)2流量:1化g/h; 物料粒度:20目；萃取时间：3h;
[0012] (2)化合物的分离纯化
[OOU]将上述粗提物用200~300目的硅胶拌样，进行硅胶柱层析，W石油酸-乙酸乙醋系 统梯度洗脱，根据薄层层析情况合并流分；
[0014] 石油酸：乙酸乙醋= 1:9洗脱部位的组分经硅胶柱层析，凝胶柱层析分离，然后经 制备高效液相分离，流动相为甲醇:水= 7:3,收集出峰时间为45.59min的物质，得到新化合 物I (C2姐28〇4)，命名为Tokinolide C，收集出峰时间为61.15min的物质，得到化合物II (Tokinolide A)；
[0015] 石油酸：乙酸乙醋= 2:8洗脱部位的组分经硅胶柱层析分离，然后经S邱hadex LH-20层析纯化，用氯仿：甲醇= 2:1(体积比）的溶剂洗脱，得到化合物III(Riligustilide)。
[0016] 实验结果显示:所述方法制得的苯献类二聚体化合物I、II或HI在1~SOiiM浓度范 围内，对不同的肿瘤细胞均有一定的抑制作用，且存在明显的浓度依赖性。因此，其可在制 备抗肿瘤药物中的应用。
[0017] 本发明有益效果在于：
[0018] 本发明提供的苯献类二聚体化合物可从当归等药材中分离得到，也可经本领域技 术人员熟知的化学方法合成得到，具有良好的开发前景;本发明苯献类二聚体化合物对多 种肿瘤细胞株的抑制作用也表明其可W进一步作为新的抗肿瘤药物进行研究开发。
【附图说明】：
[0019]图1.化合物I的Ihnmr谱(氨谱）。
[0020] 图2.化合物I的I3CNMR谱(碳谱）。
[0021] 图3.化合物I的丽QC谱。
[0022] 图4.化合物I的HMBC谱。
[0023] 图5.化合物I的NOESY谱。
[0024] 图 6.化合物 I 的 HR-ESI-MS 谱。
[0025] 图7.化emDraw3D模拟化合物I的优势构型及NOESY谱主要的相关信号
[0026] 图8.分离流程图
【具体实施方式】：
[0027] 实施例1.=种苯献类二聚体化合物的提取分离，具体步骤为：
[002引 （1)超临界C02萃取7.3kg当归饮片，萃取条件为一溫度:50°C ;压力：20MP;0)2流量： 1化g/h;物料粒度:20目；萃取时间：3h。得栋红色浸膏81.2g。该浸膏用Ikg正相硅胶柱层析 分离，依次使用石油酸-乙酸乙醋（1:99、2:98、5:95、7:93、1:9、3:17、2:8、3:7、5:5、0:1)梯 度洗脱，根据薄层层析情况合并成28个流分，显色剂为10%硫酸甲醇溶液。
[0029] (2)取组分化.14(石油酸：乙酸乙醋= 1:9洗脱部位）进行硅胶柱层析，收集石油 酸：乙酸乙醋= 1:19的洗脱部位，然后经凝胶柱层析分离，用氯仿：甲醇= 2:1(体积比）的溶 剂洗脱，浓缩合并紫外灯下暗斑较纯的组分。所得浸膏经反相C18制备柱分离，流动相为甲 醇：水=7 : 3，收集出峰时间为45.59min的物质，得到新化合物I (C2姐28化）30mg，命名为 Tokinolide C，收集出峰时间为61.15min的物质，得到化合物II(Tokinolide A)35mg。
[0030] (3)取组分化.17(石油酸：乙酸乙醋= 2:8洗脱部位）进行硅胶柱层析，收集石油 酸：乙酸乙醋=3:17的洗脱部位，然后经S邱hadex LH-20层析分离，用氯仿：甲醇=2:1 (体 积比）的溶剂洗脱，浓缩合并紫外灯下暗斑较纯的组分，得到化合物III(Riligustilide) 56mg〇
[0031] 实施例2.对实施例1所得的化合物I-HI的理化性质及化学结构的定性鉴定
[0032] 化合物I:黄色油状物，易溶于氯仿，难溶于甲醇。高分辨HR-ESI-MS给出离子峰m/ z:783.3898[2M+Na] +，403.1881[M+Na] +，381.2057[M+H]+提示该化合物的分子量为 380,分 子式为C2姐28〇4 dUV光谱在280.7皿处有强吸收峰。Ihnmr谱给出两个甲基信号SO. 96 (3H，t，J = 7.4Hz，H-ll)，0.92(3H，t，J = 7.4Hz，H-l^)，低场区有四个締氨信号，分别为S6.11(lH， ddd，J = 9.9Hz，H-6'），5.77(lH，dd，J = 1.7,9.9Hz，H-7'），5.24(lH，t，J = 7.9Hz，H-8)，4.88 (1H，t，J = 7.9Hz，H-8 '），S6.11与化.77两氨偶合常数均为J = 9.9Hz，提示该化合物含一顺 式双键。S5.24及M.88的締氨给出的信号为S重峰，且偶合常数J = 7.9Hz，提示两运个締氨 均与键-C出-相连。I3CNMR低场区有两个幾基信号5168.73和6176.92,八