从红豆杉中高效快速提取紫杉醇、三尖杉宁碱和10-dabⅲ的方法
【专利说明】从红豆杉中高效快速提取紫杉醇、三尖杉宁碱和10-DABm的方法
技术领域
[0001]本发明涉及从植物中分离提取有效成分的技术领域，具体涉及一种从红豆杉中高效快速提取紫杉醇、三尖杉宁碱和1-DABm的方法。
【背景技术】
[0002]紫杉烷类化合物是提取于高等裸子植物红豆杉的树皮、根和叶等部位的一类化合物，主要含有紫杉醇、三尖杉宁碱、10-DABm、7-木糖基紫杉醇等，有许多已被证明具有细胞毒性和抗肿瘤活性，而用来提取紫杉醇等的天然红豆杉资源有限，因而天然紫杉醇原料药的生产和供应受到限制，远远不能满足紫杉醇临床的应用。现在人们大规模种植红豆杉树，从中提取紫杉醇、三尖杉宁碱、1-DABm、7_木糖基紫杉醇等紫杉烷类物质，如何充分利用资源红豆杉资源，从中得到更多的有效物质具有重要意义。现有提取紫杉烷类有效成分的方法，如授权公告号为CN103408512B的“一种从红豆杉中高效提取紫杉烷类有效成分的方法”专利，公开的提取紫杉烷类有效成分的方法是:先通过水提取，再通过醇提取，再用传统纯化方法纯化即可得到紫杉醇、10-DABm、7木糖基紫杉醇、三尖杉宁碱非水溶性等紫杉烷类物质单体。该方法的主要缺点是:①提取时间较长，在4?48小时;②经提取罐下部滤板过滤后的滤液中含有很多细小颗粒，进入树脂柱会堵塞树脂柱，降低树脂柱的循环使用次数；③采用有机弱酸水溶液进行提取增加了后续处理有机弱酸水溶液的步骤。
[0003]因此，需要一种从红豆杉中高效快速提取紫杉醇、三尖杉宁碱和1-DABm的方法，具有制备工艺和生产设备以及操作步骤简单，提取时间较短，材料可循环，且使用时间长等特点。
【发明内容】
[0004]有鉴于此，本发明的目的在于提供一种从红豆杉中高效快速提取紫杉醇、三尖杉宁碱和1-DABm的方法，具有制备工艺和生产设备以及操作步骤简单，提取时间较短，材料可循环，且使用时间长等特点。
[0005]本发明的从红豆杉中高效快速提取紫杉醇、三尖杉宁碱和1-DABm的方法，包括以下步骤:
[0006]a.将红豆杉粉末溶于1-DABm提取剂进行超声提取后经离心分离收集离心清液I，将离心清液I经大孔树脂饱和吸附后进行洗脱收集洗脱液I进行浓缩，得到1-DABm浸膏，经大孔树脂处理后的离心清液I经超声提取后收集滤渣和滤液；
[0007]b.将步骤a中收集的滤渣溶于紫杉醇提取剂先后经超声提取和离心分离后收集离心清液Π，将离心清液Π经大孔树脂饱和吸附后进行洗脱收集洗脱液Π进行浓缩，得到含有紫杉醇、三尖杉宁碱的浸膏；
[0008]进一步，步骤a中，红豆杉粉末与1-DABm提取剂的质量体积比为1:5?100;
[0009]进一步，步骤a中，第一次超声提取的超声频率为为20?50KHz，提取时间为2-6小时；
[0010]进一步，将步骤a中第二次超声提取后的滤液作为1-DABm提取剂循坏使用；
[0011]进一步，步骤a中，所述1-DABm提取剂为水;采用浓度为40?60%的甲醇或40?60%的乙醇作为洗脱剂进行洗脱;在转速为6000?20000r/min的管式离心机中进行离心分离处理；
[0012]进一步，步骤b中，按照红豆杉粉末与紫杉醇提取剂的质量体积比为1:5?100的比例，向滤渣加入紫杉醇提取剂，所述紫杉醇提取剂为浓度20?50 %的甲醇或20?50 %的乙醇；
[0013]进一步，步骤b中，超声提取频率为20?50KHz，时间为2-6小时；
[0014]进一步，步骤b中，采用浓度为60?99.5 %的甲醇或60?99.5 %的乙醇进行洗脱；
[0015]进一步，步骤b中，在转速为6000?20000r/min的管式离心机中进行离心分离处理得到离心清液Π ;经大孔树脂处理后的离心清液Π经超声提取后收集滤液作为紫杉醇提取剂循环使用；
[0016]进一步，将曼地亚红豆杉枝叶进行阴干然后粉碎至0.1?2mm，就制得红豆杉粉末；将步骤a中的1-DABm浸膏和步骤b中的紫杉醇、三尖杉宁碱浸膏纯化制得紫杉醇、三尖杉宁碱和10-DABm。
[0017]本发明的有益效果:本发明的从红豆杉中高效快速提取紫杉醇、三尖杉宁碱和10-DABm 的方法，以曼地亚红豆杉枝叶为原料，采用超声波与树脂吸附联合的方法分别提取紫杉醇、三尖杉宁碱与1-DABm，紫杉醇的提取率98%以上，三尖杉宁碱提取率98%以上，10-DABm 提取率 98% 以上， 1-DABm浸膏中 1-DABm含量2% ?5% ， 紫杉醇 、三尖杉宁碱浸膏中紫杉醇含量2%?5%、三尖杉宁碱含量2%?5%，采用本方法提取时间短、效率高、不堵塞树脂柱;提取剂可循环利用，节约资源，绿色环保;所采用的溶剂可回收利用，对环境污染小。本发明方法所用生产设备简单，生产条件易实施，操作方便适合工业化生产。
【附图说明】
[0018]下面结合附图和实施例对本发明作进一步描述:
[0019]图1为本发明的工艺流程图。
【具体实施方式】
[0020]本发明的从红豆杉中高效快速提取紫杉醇、三尖杉宁碱和1-DABm的方法，包括以下步骤:
[0021]a.将红豆杉粉末溶于1-DABm提取剂进行超声提取后经离心分离收集离心清液I，将离心清液I经大孔树脂饱和吸附后进行洗脱收集洗脱液I进行浓缩，得到1-DABm浸膏，经大孔树脂处理后的离心清液I经超声提取后收集滤渣和滤液；
[0022]b.将步骤a中收集的滤渣溶于紫杉醇提取剂先后经超声提取和离心分离后收集离心清液Π，将离心清液Π经大孔树脂饱和吸附后进行洗脱收集洗脱液Π进行浓缩，得到含有紫杉醇、三尖杉宁碱的浸膏;采用超声波与树脂吸附联合的方法分别提取紫杉醇、三尖杉宁碱与1-DABm，紫杉醇的提取率98%以上，三尖杉宁碱提取率98%以上，1-DABm提取率98%以上，1-DABm浸膏中1-DABm含量2%?5%，紫杉醇、三尖杉宁碱浸膏中紫杉醇含量2%?5%、三尖杉宁碱含量2%?5 %，采用本方法提取时间短、效率高、不堵塞树脂柱。本实施例及下述实施例的大孔树脂可采用AB-8或DlOl或HPD300大孔树脂。
[0023]本实施例中，步骤a中，红豆杉粉末与1-DABm提取剂的质量体积比为1:5?100;红豆杉粉末与提取剂的用量比保证了提取的效果，增大提取率，本实施例以及下述实施例中的红豆杉粉末与1-DABm提取剂的质量体积比为红豆杉粉末的质量(kg)与1-DABm提取剂的体积(L)之比。
[0024]本实施例中，步骤a中，第一次超声提取的超声频率为20?50KHz，提取时间为2-6小时;通过适当的超声的空化效应、热效应和机械作用并结合离心分离和大孔树脂吸附，提高提取率的同时，又便于过滤，避免堵塞树脂柱，降低树脂柱的循环使用次数。
[0025]本实施例中，将步骤a中第二次超声提取后的滤液作为1-DABm提取剂循环使用；可作为下一批物料的提取剂，以此循环使用，节约经济成本。
[0026]本实施例中，步骤a中，所述1-DABm提取剂为水;采用浓度为40?60%的甲醇或40?60%的乙醇作为洗脱剂进行洗脱;在转速为6000?20000r/min的管式离心机中进行离心分离处理;提取液经过超声提取罐下的滤板进行过滤后进入管式离心机中进行离心，得到离心清液和沉降物，沉降物作为废渣处理;洗脱剂回收循环使用。
[0027]本实施例中，步骤b中，按照红豆杉粉末与紫杉醇提取剂的质量体积比为1:5?100的比例，向滤渣加入紫杉醇提取剂，所述紫杉醇提取剂为浓度20?50%的甲醇或20?50%的乙醇;紫杉醇提取剂的用量参照与步骤a中所使用的红豆杉粉末量的配比关系确定，紫杉醇提取剂与滤渣的用量比直接影响紫杉醇、三尖杉宁碱的提取率，以及提取紫杉醇、三尖杉宁碱的纯度问题。
[0028]本实施例中，步骤b中，超声提取频率为20?50KHz，时间为2-6小时;滤渣与紫杉醇的用量比结合超声频率和超声时间，有效保证紫杉醇、三尖杉宁碱的提取效率，本实施例以及上述实施例中，红豆杉粉末与提取剂的用量过大或过小，超声的频率过大或过小，超声时间的过长或过短均不利于有效成分的提取，比如，超声时间过长，会造成杂质的溶出，超声时间过短，又影响提取率，超声频率过大影响有效成分，超声频率过小又会造成提取率的下降，本发明正是通过有机的控制红豆杉粉末与提取剂的用量、超声提取的时间，并结合离心分离和大孔树脂吸附以达到提高提取率，保证有效成分的纯度的目的。
[0029]本实施例中，步骤b中，采用浓度为60?99.5 %的甲醇或60?99.5 %的乙醇进行洗脱。
[0030]本实施例中，步骤b中，在转速为6000?20000r/mi