检测8个miRNA表达量的系统在制备诊断或辅助诊断肝细胞癌产品中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物技术领域中检测8个miRNA表达量的系统在制备诊断或辅助诊断 肝细胞癌产品中的应用。
【背景技术】
[0002] 肝癌是指发生于肝脏的恶性肿瘤，包括原发性肝癌和转移性肝癌两种，人们日常 所说的肝癌多指原发性肝癌。原发性肝癌按病理学分型可分为肝细胞癌化epatocellular carcinoma，HCC)、肝内胆管癌及混合性肝癌，其中HCC肝癌占原发性肝癌的90%左右。原发 性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，根据最新统计，全世界每年新发肝癌患者约六十 万，居恶性肿瘤的第五位。当下，肝癌在全球的发病率都呈上升趋势。2014年世界卫生组织 (World胎alth Organization,简称WHO)发表的《全球癌症报告2014》显示，中国新增癌症 病例高居世界第一位，其中肝癌的新增病例和死亡人数均居世界首位。全世界50% W上的 新发和死亡肝癌患者发生在中国，每年中国大约有30万人因罹患肝癌死亡。如此高的致死 率是因为缺乏敏感而特异的无创性指标来进行早期诊断。肝癌起病隐匿，早期缺乏明显症 状，通常在晚期才得W确诊，而该时期由于大多存在癌细胞肝内或/及肝外转移，病人已经 丧失了手术切除病灶的机会，统计数据表明肝癌晚期患者5年内的生存率只有7%左右，而 早期肝癌的病人治疗后5年生存率能达到50%至70% 提出了癌症=级预防的概念，针 对癌症症状出现前的潜在疾患，采取早"（早发现、早诊断、早治疗)措施，阻止或减缓疾 病的发展，促进癌症康复。研究证实，"立早"措施也是目前全世界公认的提高肝癌治疗效果 的关键。
[0003] 目前肿瘤发现和诊断方法主要包括病史询问、物理诊断、常规检查、影像学检查、 内窥镜检查、病理活检和肿瘤标志物检测等。其中，病理活检是癌症确诊的金标准，但由于 有创性且一般伴有局部疼痛，一般只在手术治疗时同时进行，穿刺活检可W引起肿瘤转移， 虽然在CT精确引导下的穿刺活检定位更加准确，少有病人因为穿刺活检引起转移，但其风 险仍然存在，如肝癌的穿刺活检一部分人会有肩部疼痛和轻度胸膜炎及肝周围炎。影像学 检查是目前被广泛接受的一种检查方式，具有无痛、指向性好、诊断率高等优势，但在肿瘤 早期诊断中还具有一定的局限性，例如很难发现体积小的肿瘤;CT等放射线检查方法对患 者具有福射伤害;MRI等精密度高的仪器检查费用高，预约时间长，普及受限。特别是，影像 学检查要求有经验的技术人员做出判断，无经验的人员误诊率高。循环肿瘤生物标志物由 于具有无创性，可动态监测等优点，在无症状人群肿瘤筛查方面极具应用前景。目前临床上 用于诊断肝癌的肿瘤标志物主要为甲胎蛋白（AFP)，但约40%的肝癌不分泌AFP，使得肝癌 检测的灵敏度一般较低(20%-65%)。因此，发现新的肝癌的肿瘤标志物具有重要意义。
[0004] 己塞罗那(B化C)临床肝癌分期系统依据肝癌的大小、肝功能状态、生理状态和肿 瘤相关症状将肿瘤分为0期、A期、B期、C期和D期共五个时期。0期为超早期，此期肿瘤特点为 单个肿瘤，小于2cm;A期为早期，单个肿瘤，不大于5cm;或不多于3个肿瘤，各肿瘤都不大于 3cm;B期为中期，肿瘤个数为单个或多个，且肿瘤大于5cm;C期为晚期，此期已出现明显的血 管侵犯或则转移;D期为终末期，此期肝脏已发生严重的损伤。B化C分期将肿瘤的发展与临 床治疗有机结合，通过评估评估病人的患病情况从而采取及时有效的干预措施，提高肝癌 的治疗效果和存活率。对于O期患者，通过手术切除治愈率可W达到100% ;A期患者5年生存 率可W达到50%-75% ;B期患者3年生存率仅为50% ;C期、D期患者的生存率极低。因此，早 发现早治疗是提高肝细胞癌治愈率和生存率最行之有效的方法。
[0005] MicroRNA(简写为miRNA)是一类长度19-25个核巧酸的真核生物内源性小分子单 链RNA，在生物进化过程中相对保守，不编码蛋白质，对mRNA的表达起着重要的调控作用。
【发明内容】
[0006] 本发明所要解决的技术问题是如何诊断肝细胞癌。
[0007] 为解决上述技术问题，本发明首先提供了检测8个miRNA表达量的系统在下述1)或 2)中的应用：
[0008] 1)制备诊断或辅助诊断肝细胞癌产品；
[0009] 2)诊断或辅助诊断肝细胞癌；
[0010] 所述 8 个 miRNA 为 hsa-miR-20a、hsa-miR-21、hsa-miR-122、hsa-miR-192、hsa-miR-483-5p、hsa-miR-26a、hsa-miR-146a和hsa-miR-223。
[0011] 上述应用中，所述表达量可为绝对表达量或相对表达量。所述相对表达量可为相 对于日地-11111?159日、11日3-11111?1228和/或113日-11111?-16的相对表达量。所述表达量可为所述8个 mi RNA在血浆或血清中的表达量。
[0012] 上述应用中，所述检测8个miRNA表达量的系统可包括利用定量PCR检测所述8个 miRNA的表达量的系统。
[0013] 上述应用中，所述利用定量PCR检测所述8个miRNA的表达量的系统可包括成套引 物、成套探针和/或进行定量PCR所需的其他试剂和/或仪器；
[0014] 所述成套引物为序列表中序列1-序列16所示的单链DNA;所述成套探针的序列分 别如序列表中序列17-序列24所示。
[0015] 所述进行定量PCR所需的其他试剂可为基因表达Master MiXeMaster Mix具体可 为ABI公司产品，货号为4440046。所述进行定量PCR所需的其他试剂也可为DNA聚合酶和/或 dNTP。所述进行定量PCR所需的仪器可为ABI 7900、ABI ViiA? 7和/或ABI QuantStudio? 实时巧光定量PCR仪。
[0016] 上述应用中，所述检测8个miRNA表达量的系统还包括数据处理装置，所述数据处 理装置用于将来自待测对象的所述8个miRNA表达量转换为所述待测对象的诊断结果。所述 数据处理装置可为软件和/或模块。
[0017] 上述应用中，所述数据处理装置能通过记载Xl和X2的特征诊断肝细胞癌和非肝细 胞癌;所述Xl为至少50例肝细胞癌患者组成的肝细胞癌组的所述8个miRNA含量，所述X2为 至少50例非肝细胞癌患者组成的非肝细胞癌组的所述8个m i RNA含量。
[0018] 可通过包括下述步骤的方法将所述Xl和所述X2的特征记载在所述数据处理装置 中：将所述Xl和所述X2导入所述数据处理装置中，通过对所述Xl和所述X2进行机器学习构 建可用于诊断肝细胞癌的模型(将该模型命名为肝细胞癌诊断模型）。
[0019] 所述通过对所述Xl和所述X2进行机器学习构建可用于诊断肝细胞癌的模型可包 括Yl或Y2;
[0020] Y1、对在所述肝细胞癌组中随机选择出的部分肝细胞癌患者(如大于等于50%的 肝细胞癌患者）的所述8个miRNA含量和在所述非肝细胞癌组中随机选择出的部分非肝细胞 癌患者的所述8个miRNA含量进行机器学习构建可用于诊断肝细胞癌的模型；
[0021] Y2、将所述Yl进行m次，得到m个可用于诊断肝细胞癌的模型；在所述m个可用于诊 断肝细胞癌的模型中选择k个在所述肝细胞癌组和所述非肝细胞癌组中进行诊断的准确率 高(如大于等于0.75)的模型，将运k个模型作为诊断肝细胞癌的模型(将其命名为模型l);m > 1000;m>k> 10，k 为奇数。
[0022] 利用所述模型1对待测患者进行诊断的方法包括：如所述模型1中的所述k个可用 于诊断肝细胞癌的模型中大于50%的模型的结果为所述待测患者为肝细胞癌患者，所述待 测患者为或候选为肝细胞癌患者;如所述模型1中的所述k个可用于诊断肝细胞癌的模型中 小于50%的模型的结果为所述待测患者为肝细胞癌患者，所述待测患者为或候选为非肝细 胞癌患者。
[0023] 上述应用中，所述数据处理装置可通过决策树算法处理数据。所述决策树算法具 体可为随机森林决策树算法。
[0024] 上述