一种钌配合物及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明具体涉及一种钌配合物及其应用。
【背景技术】
[0002] 癌症是目前威胁人类健康和生命安全的最主要的疾病之一。全球每年约有1270万 人被确诊为癌症患者，全世界每年死于癌症的人数占总死亡人数的13%。我国每年约有150 万人死于癌症，且呈现逐年上升趋势。自从顺铂被发现有抗癌活性以来，铂类金属抗癌药物 的应用和研究得到迅速发展。其中铂类药物抗肿瘤作用机制主要是以DNA为主要靶标，破坏 DNA的复制及抑制细胞分裂等作用来抑制肿瘤细胞生长。但是铂类药物长期使用具有毒副 作用大，耐药性强及抗癌谱窄等缺点。因此，寻找高效、高选择和副作用小的抗癌药物是抗 癌药物开发的主要方向。
[0003] 钌配合物与顺铂相比，具有相对低的毒性，高选择性，在体内易吸收并很快被排泄 及克服铂类药物的细胞耐药性等特点，被认为最有前途的抗肿瘤药物之一(Coord. Chem. Rev.，2002，232，69)。到目前为止，两种钌配合物NAMI和KP1019已经进入二期临床试验 阶段，前者对鼠类的转移瘤有明显的抑制作用，后者对结肠癌有明显的治疗效果，能够抑制 一些顺铂不起作用的肿瘤生长。但是目前钌配合物的抗肿瘤机制主要是以DNA为靶标或者 以线粒体为靶点的诱导肿瘤细胞凋亡的抗肿瘤机制。该类钌配合物存在毒副作用大和低选 择性等缺点。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种钌配合物的制备及其应用。
[0005] 本发明所采取的技术方案是： 一种钌配合物，由阳离子和阴离子组成，所述阳离子为[Ru(phen)2(HIPMP)]2+，结构式 如下：
[0006] 优选的，所述阴离子为无机盐离子。
[0007] 优选的，所述无机盐阴离子为(C104r或C1'
[0008] 所述钌配合物的制备方法，包括下列步骤： 1) 将1，10-邻菲罗啉-5,6_二酮、乙酸铵和5-甲基水杨醛，在惰性气体保护下充分反应 得到中间产物HIPMP; 2) 将步骤1)得到的中间产物HIPMP与(?8-[Κιι(ρ1ιθη)2(：?2]·2Η2〇,在惰性气体保护下充 分反应，冷却至室温后慢慢滴加阴离子无机盐的饱和溶液产生沉淀，沉淀进一步纯化干燥 得钌配合物。
[0009] 优选的，步骤1)中反应所加入的1，10-邻菲罗啉-5，6_二酮、乙酸铵和5-甲基水杨 醛物质的量比为1:20:1。
[0010]优选的，步骤1)中反应所用的溶剂为冰醋酸。
[0011]优选的，步骤1)的反应以加热回流的方法进行。
[0012]优选的，步骤1)反应得到的中间产物HIPMP进一步纯化，包括下列步骤：用少量的 乙醇溶解，用硅胶装柱，乙醇作为淋洗剂，收集黄色组分，旋转蒸发得到HIPMP黄色粉末。 [0013] 优选的，步骤2)中反应所加入的HIPMP与cis-[Ru(phen)2Cl2].2H 20的物质的量比 为 1:1〇
[0014]优选的，步骤2)中反应所用的溶剂为乙醇或乙二醇。
[0015]优选的，步骤2)中反应所用的溶剂为乙醇。
[0016] 优选的，步骤2)的反应以加热回流的方法进行。
[0017] 优选的，步骤2)中的无机盐阴离子为(C104r或C厂。
[0018] 优选的，步骤2)cis-[Ru(phen)2Cl2] · 2H20和HIPMP按照物质的量比为1:1加入到 乙醇中，惰性气体保护下加热回流8小时，得红色清液，冷却至室温后慢慢滴加 NaCKk饱和 溶液或者直接旋蒸，产生棕红色沉淀。
[0019] 上述任一项所述钌配合物在抗肿瘤药物中的应用。
[0020]优选的，所述癌症包括宫颈癌、肝癌、肺癌或鼻咽癌。
[0021]本发明的有益效果是： 本专利公开的钌配合物，是一种具有强的抑制肿瘤细胞毒性的、以内质网为靶点诱导 肿瘤细胞凋亡的钌配合物，对于研究高效的钌抗肿瘤药物有重要的意义。
[0022]本发明的钌配合物是一种结构新颖的具有抗癌作用的、含对甲苯酚结构单核钌 (II)配合物。
[0023] 本发明的单核钌（II)配合物具有很好的抗癌活性，尤其对人宫颈癌细胞、肝癌细 胞、肺癌细胞或鼻咽癌细胞等癌症治疗效果显著。
[0024] 本发明的单核钌（II)配合物诱导肿瘤细胞凋亡主要涉及内源性的内质网通路。
[0025] 本发明的单核钌(II)配合物具有较低的正常细胞毒性和高选择性。
【附图说明】
[0026] 图1为配合物[Ru(phen)2(HIPMP)](Cl〇4)2的合成路线图； 图2为钌配合物对肿瘤细胞增殖抑制实验图； 图3为钌配合物诱导HeLa细胞凋亡流式检测图； 图4为HeLa 细胞与f了配合物培育2h后与ER-Tracker、Mito-Tracker和LYSO-Tracke;r共 染后细胞成像图； 图5为钌配合物对内质网通道蛋白表达的影响图。
【具体实施方式】
[0027]下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。
[0028] 实施例1单核钌配合物[Ru(phen)2(HIPMP)](Cl〇4)2的合成 (1) 将1，10-邻菲罗啉-5，6_二酮、乙酸铵和5-甲基水杨醛按照物质的量比为1:20:1，溶 于适量冰醋酸中，惰性气体保护下混合加热回流4小时，混合物冷却至室温后加入水，用25% 氨水中和，抽滤，得到黄色沉淀用水和乙醚洗涤，得到相应粗产物。粗产物用少量的乙醇溶 解，用硅胶（60-100目）装柱，乙醇作为淋洗剂，收集黄色组分，旋转蒸发得到黄色粉末2_ (lH_imidaz〇-[4，5_f] [ 1，10]phenanthrolin-2_yl )-4_methylphenol (即中间产物 HIPMP) 〇 产率：83%。厶的1· Calcd for C2QH14N4O: C，73.61; Η, 4.32; N，17.17. Found: C， 73.14; H, 4.61; N, 17.32%. FAB-MS: m/z = 327 (M+l)； (2) cis-[Ru(phen)2Cl2] · 2H20和HIPMP按照物质的量比为1:1加入到适量乙醇中，惰性 气体保护下加热回流8小时，得红色清液，冷却至室温后慢慢滴加 NaCl〇4饱和溶液，产生棕 红色沉淀。抽滤，产物过柱用乙腈与乙醇体积比为10 :1的混合液冲洗，真空干燥得终产物 [Ru(phen)2(HIPMP)](Cl〇4)2。合成路线图见图 1。
[0029] 合成产率为70%。Anal. Calcd for C44H3QN8CI2O9RU: C, 53.56; H, 3.06; N， 11.36%; Found: C, 53.87; H, 2.92; N, 11.58%. ES-MS [CH3CN, m/z]: 788.2 ([M-2Cl04-H] + ), 394.1 ([M-2Cl04]2+). 4 MIR (400 MHz, DMS〇-d6) ppm: 9.18 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 9.03 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.78 (d, J = 3.8 Hz, 2H), 8.77 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 8.40 (s, 4H), 8.16 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 8.12 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 8.08 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 8.04 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 7.88(d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.78 (m, 2H), 7.78 (dd, J = 8.0 Hz, 2H), 7.39 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.14 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 2.36 (s, 3H).〇
[0030] 实施例2单核钌（II)配合物对肿瘤细胞HeLa、A549、HepG2和CNE-1增殖的抑制作 用 细胞毒性实验:采用MTT法研究了配合物的体外毒性实验。首先将实验细胞置于37°C， 5.0% C02培养箱中生长至对数期，0.25%胰酶消化收集细胞，调整细胞悬液浓度，使细胞密 度大约在1 X 104个/mL，每孔100 mL接种于96孔板，细胞密度约为3-5 X 103个/孔，置于37 °C、 5% C02的培养箱中培养24 h。换液，加入不同浓度梯度的药物，每个浓度做3个平行样，设置 空白调零组（培养基、MTT、DMS0)，空白组（培养基、细胞、相同浓度的药物溶解介质、MTT、 DMS0)，阳性对照组(培养基、细胞、不同浓度的顺铂、MTT、DMS0)。置于37°C、5% C02的培养 箱中继续培养48 h。吸去上清，每孔加入90 μL新鲜培养液，再加入10 μL MTT溶液（5 mg/mL，即0.5% MTT)，继续培养4 h。终止培养，弃去孔内培养液，每孔加入150 μL DMS0,置 于摇床上低速振荡30 min，使结晶物充分溶解。酶联免疫检测仪检测490 nm波长的各孔的 吸光度值0D。
[0031] 相关的细胞增殖的抑制率及半数抑制浓度（IC5Q)用下面的公式进行计算:生长抑 制率=(〇版《-〇與#)/(ODij^-ODsa)，所有0D值均减去空白调零组0D值。将抑制率与药物浓度 作图，得出剂量反应曲线，从中计算出IC 5Q值。单核钌配合物[Ru(phen)2(HIPMP)](Cl