一种从披碱草中提取得到的化合物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种从披碱草中提取得到的化合物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 我国草地业发展缓慢，最直接的影响就是造成畜牧业发展也减速，因而致使每年 我国从国外进口牧草以及购买婴儿奶制品的数量逐年上升。究其原因主要是因为我国缺少 具有抗性的优异牧草品种，如有杀虫活性的牧草。每年我国牧草由于各种昆虫的危害，造成 大面积减产和生长缓慢，并且还影响奶制品的安全。虽然现阶段化学合成的杀虫药物在植 物病害防治中起着不可代替的作用，但是大家对农药毒性和农药对环境的污染问题越来越 重视，从微生物中寻找新的无毒、无污染、可持续利用的生物源杀虫剂已成为现代农药研究 开发的一个热点。
[0003] 植物源杀虫剂是指利用植物及其代谢产物来防治害虫。由于这类植物微源杀虫剂 不会对生态环境产生污染，还具有可持续性，所以，将是杀虫药物研制与生产单位重要的工 作方向。
【发明内容】
[0004] 本发明提供了一种从披碱草中提取得到的化合物，是一种新颖骨架的环肽化合 物，具有良好的杀虫活性;并且提供其制备方法和应用。
[0005] 禾草的很多草已成为具有杀虫活性的优异牧草，如醉马草，中华羊茅等，根据本申 请人分析，其抗性特点来源于自身的内生真菌为其宿主提供的此利益。如果能从 带内生真菌沙的禾草中找到具有杀虫活性的代谢物，那么可以从这些具有杀虫活性 的牧草中筛选出具有抗虫性的优良牧草，这将解决我国缺乏具有杀虫抗性的优良牧草问 题;同时，得到一种对生态环境无污染的植物源生物农药。
[0006] 本发明的第一个目的是提供一种从披碱草中提取分离得到的化合物，其结构式如 式(I)所示：
[0007]
[0008] 本发明还提供上述化合物的制备方法，所述化合物是从带内生真菌iiwWW bromicola的披碱草中提取分离得到的。
[0009] 作为优选，将带内生真菌bromicola的披碱草干燥粉碎后，先用甲醇提 取，再用乙酸乙酯萃取，然后用大孔树脂柱和反相色谱柱分离，重结晶得到的。
[0010] 作为优选，步骤如下：
[0011] (1)收集带内生真菌你 iWWbromicola的披碱草并晾干粉碎，得到干草；
[0012] (2)用工业甲醇在室温下浸泡3-7天，浸泡3-4次；作为优选，所述干草(kg)与工业 甲醇(L)的用量比为1:2-1:6;
[0013] (3)去除溶剂，得到粗浸膏；
[0014] ⑷将粗浸膏溶解后，用乙酸乙酯萃取，合并萃取液，去除溶剂，得到浸膏；
[0015] 作为优选，所述粗浸膏(g)和乙酸乙酯(mL)的用量比为1:5-1:10;
[0016] 作为优选，萃取的次数为3-5次；
[0017] (5)将浸膏以水-甲醇作溶剂过大孔树脂柱，再以反相色谱柱和重结晶分离，得到 化合物。
[0018] 作为优选，所述大孔树脂柱的规格为:外径10 · Ocm，长60 · Ocm;
[0019] 作为优选，过大孔树脂柱时水和甲醇的体积比为1:1-3:1。
[0020] 作为优选，所述反相色谱柱的规格为:外径2 · Ocm，长30 · Ocm;
[0021 ] 作为优选，过反相色谱柱时水和甲醇的体积比为3:2-5: 2。
[0022] 本发明的第三个目的是提供上述化合物在制备杀虫剂中的应用。
[0023] 作为优选，所述虫为甘蓝蚜。
[0024]本发明的第四个目的是提供一种植物源杀虫剂，所述杀虫剂的有效成分为权利要 求1所述的化合物。
[0025]本发明的第五个目的是提供上述化合物在检测披碱草抗虫性和筛选具有杀虫活 性的披碱草中的应用。
[0026 ]本申请人首次从带内生真菌bromi co la的披碱草中提取分离得到本发明 的化合物，并通过一系列的谱图（高分辨质谱、氢谱、碳谱、二维核磁)以及X射线单晶衍射分 析，最终确定了它的结构，是一种首次分离得到的新颖骨架的大环肽化合物。通过对其进行 实验，发现其有很好的杀虫效果，尤其对于甘蓝蚜有良好的杀虫效果，因此，该化合物是一 种极有前景的可持续利用的植物源农药。并且，以带有内生真菌^AAiMbromicola的披碱 草为种子，可以培育出具有杀虫活性的优势草，为草地业的发展做出贡献。
【附图说明】
[0027]附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实 施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
[0028]图1为本发明化合物的氢谱图；
[0029]图2为本发明化合物的碳谱图；
[0030]图3为本发明化合物的DEPT谱图；
[00311图4为本发明化合物的1H-1!! COSY谱图；
[0032] 图5为本发明化合物的HSQC谱图；
[0033] 图6为本发明化合物的HMBC谱图；
[0034] 图7为本发明化合物的高分辨质谱图；
[0035]图8为本发明化合物的X射线单晶衍射图。
【具体实施方式】
[0036]以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验 方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市 售。
[0037]本发明化合物的制备过程如下：
[0038] 1)播种带bromicola内生真菌的披喊草(Elymus dahuricus)种子，该 ￡)jicW(Wbromicola内生真菌选用文献Origin,Divergence,and Phylogeny of Asexual EpichloeEndophyte in Elymus Species from Western China，10(5): e0127096 · doi : 10.1371/journal, pone. 0127096中标号为NI_201306的菌株，上述披碱草是从甘肃采集的， 十月份左右将带你』^7f^bromicola内生真菌的披碱草进行收集；
[0039] 2)将步骤1)得到的披碱草放置阴凉处进行晾干，得到干草；
[0040] 3)将步骤2)得到的干草粉碎，用工业甲醇在室温下进行浸泡，每次3-7天，共浸泡 3-4次;干草(kg)与工业甲醇(L)的用量比为1:2-1:6;
[0041] 4)将步骤3)得到的浸泡液体用旋转蒸发仪去除溶剂，得到粗浸膏；
[0042] 5)将步骤4)得到的粗浸膏用蒸馏水溶解，再用乙酸乙酯进行萃取，萃取3-5次，合 并萃取液体，用旋转蒸发仪去除溶剂得到浸膏;粗浸膏(g)和乙酸乙酯(mL)的用量比为1:5-1:10；
[0043] 6)将浸膏以水-甲醇（体积比1:1-3:1)作溶剂过大孔树脂柱子(柱子规格为外径 10.0〇11，长60.0〇11 ;型号为即-20，日本三菱），再经反相色谱柱(型号1^-18，德国默克)水-甲 醇（体积比3 : 2-5 : 2)(外径2.0cm，长30.0cm)和重结晶分离得到本发明的化合物： dahurelmusin A〇
[0044] 实施例1本发明的化合物的制备实施例
[0045] 1)播种带你/(^_/〇(^131'0111；[(301&内生真菌的披喊草^171]1118(1&11111'；[(3118)种子，该 i^ic/zioi^bromicola内生真菌选用文献Origin,Divergence,and Phylogeny of Asexual Epichloe Endophyte in Elymus Species from Western China，10(5): e0127096 · doi : 10.1371/journal, pone. 0127096中标号为NI_201306的菌株，上述披碱草是从甘肃采集的， 十月份左右将带你 idioP bromicola内生真菌的披碱草进行收集；
[0046] 2)将步骤1)得到的披碱草放置阴凉处进行晾干，得到干草4.0kg;
[0047] 3)将步骤2)得到的干草粉碎，用16L工业甲醇在室温下进行浸泡，每次6天，共浸泡 3次；
[0048] 4)将步骤3)得到的浸泡液体用旋转蒸发仪去除溶剂，得到粗浸膏40g;
[0049] 5)将步骤4)得到的粗浸膏用350mL蒸馏水溶解，再用350mL的乙酸乙酯进行萃取， 萃取3次，合并萃取液体，用旋转蒸发仪去除溶剂得到浸膏25.0g;
[0050] 6)将浸膏以水-甲醇（体积比1:1)作溶剂过大孔树脂柱子（柱子规格为外径 10.0〇11，长60.0〇11 ;型号为即-20，日本三菱），再经反相色谱柱(型号1^-18，德国默克)水-甲 醇(体积比3:2)(外径2.0cm，长30.0cm)和重结晶分离得到本发明的化合物:dahurelmusin 八，重量为9.211^。
[0051 ]实施例2本发明的化合物的制备实施例
[0052] 1)播种带 bromicola 内生真菌的披喊草（Elymus dahuricus)种子，该 i^j'cA_/Wbromicola内生真菌选用文献Origin,Divergence,and Phylogeny of Asexual EpichloeEndophyte in Elymus Species from Western China，10(5): e0127096 · doi : 10.1371/journal, pone. 0127096中标号为NI_201306的菌株，上述披碱草是从甘肃采集的， 十月份左右将带拉^'dif^bromicola内生真菌的披碱草进行收集；
[0053] 2)将步骤1)得到的披碱草放置阴凉处进行晾干，得到干草4.0kg;
[0054] 3)将步骤2)得到的干草粉碎，用8L工业甲醇在室温下进行浸泡，每次7天，共浸泡4 次；
[0055] 4)将步骤3)得到的浸泡液体用旋转蒸发仪去除溶剂，得到粗浸膏40g;
[0056] 5)将步骤4)得到的粗浸膏用300mL蒸馏水溶解，再用200mL的乙酸乙酯进行萃取， 萃取5次，合并萃取液体，用旋转蒸发仪去除溶剂得到浸膏25.0g;
[0057] 6)将浸膏以水-甲醇（体积比3:1)作溶剂过大孔树脂柱子（柱子规格为外径 10.0〇11，长60.0〇11 ;型号为即-20，日本三菱），再经反相色谱柱(型号1^-18，德国默克)水-甲 醇(体积比5:2)(外径2.0〇11，长30.0〇11)和重结晶分离得到本发明的化合物 :(^1111代11]1118；[11 八，重量为9.011^。
[0058] 实施例3本发明的化合物的制备实施例
[0059] 1)播种带崩iaWc^bromicola内生真菌的披喊草（Elymus dahuricus)种子，该 内生真菌选用文献Origin,Divergence,and Phylogeny of Asexual Epichloe Endophyte in Elymus Species from Western China，10(5): e0127096 · doi : 10.1371/journal, pone. 0127096中标号为NI_201306的菌株，上述披碱草是从甘肃采集的， 十月份左右将带你 bromicolaR生真菌的披碱草进行收集；
[0060] 2)将步骤1)得到的披碱草放置阴凉处进行晾干，得到干草4.0kg;
[0061] 3)将步骤2)得到的干草粉碎，用24L工业甲醇在室温下进行浸泡，每次3天，共浸泡 3次；
[0062] 4)将步骤3)得到的浸泡液体用旋转蒸发仪去除溶剂，得到粗浸膏40g;
[0063] 5)将步骤4)得到的粗浸膏用380mL蒸