新型家禽腺病毒及其疫苗的利记博彩app
【技术领域】
[0001] 本发明设及新型家禽腺病毒及其疫苗。
【背景技术】
[0002] 被称为包涵体肝炎（Inclusion body hepatitis)或家禽腺病毒感染症（Fowl adenovirus，FAdV)的疾病是因1群家禽腺病毒(FAdV)发病的传染病。FAdV属于腺病毒科 (Family Adenoviridae)，基因组（gemone)由没有分节的线形双链（double-stranded)DNA 构成。属于1群的家禽腺病毒共存在12个血清型，运些血清型之间表现出非常不同的病原 性。已知危害韩国国内养鸡业的主要血清型是4型、8型、11型，在包涵体肝炎的情况下，大部 分血清型中均被发现，在4型的情况下，已知伴有屯、包积水症，并且通常病原性最强。腺病毒 感染症是通过感染作为主要祀标的肝细胞并形成特征性的包涵体（Inclusion body)而引 起死亡的疾病。包涵体肝炎能够垂直传播或水平传播，在垂直传播的情况下，通常3~4周龄 时发病，也报道过当进行了垂直传播时7日龄之前发病的案例。单独感染时，死亡率为10% 左右，较低，但与甘保罗病或鸡传染性贫血等免疫抑制性疾病形成复合感染时，死亡率会进 一步变高。已知在感染伴有屯、包积水的血清型4型的情况下，发病率和死亡率相对变高，在 敏感性高的肉鸡中死亡率能够达到80%，因此所处状况是，对韩国国内养鸡业造成巨大经 济损失。
[0003] 该疾病于1949年首次从鸟类分离，目前已广泛分布，全世界均有发病报告。之后， 于1987年伴有屯、包积水症的血清型4型腺病毒感染症在己基斯坦被报告，后来随着全世界 性的发病报告，对养鸡业造成了严重的损害。在屯、包积水症的情况下，与W往包涵体肝炎不 同，其特征在于，在没有免疫抑制性疾病的状态下，单独感染也能够导致高发病率和死亡 率。此外，是在幼龄敏感性高的疾病，并且能够进行蛋传(egg化ansmission)，因此其是如 下疾病:种鸡群受到感染后一直无症状，但蛋传给后代维鸡而引发严重病症，从而能够对肉 鸡产业造成损害。
[0004] 根据农林畜产检疫本部的报告，对于2007年至2010年申报发生包涵体肝炎的情况 可W确认，血清型4型占46%，比率最高，之后是11型（31 % )，8b型（23%)，因此4型、m3型W 及11型所占比率高。此外，可W确认总发病报告中，72%为来自肉鸡的发病报告，蛋鸡和± 鸡占据剩余比率，包涵体肝炎所造成的灾害在肉鸡中最为严重(图1)。
[000引此外，根据农林畜产检疫本部，对于2周龄之前的鸡中因疾病的垂直传播而导致感 染的情况而言，在报告的共39件中占10件，因此所处状况是，由来源于种鸡群的包涵体肝炎 病毒的传播导致的灾害也持续出现发病报告。
[0006] 目前韩国国内的状况是，由于未实施包涵体肝炎疫苗，因此相应疾病已胚胎继代， 引起了后代维鸡中的死亡率增加，生产性降低等问题，养鸡产业正遭受着打击。因此，切实 的状况是，引入一种包涵体肝炎疫苗，其在种鸡群中，能够在抑制疾病感染的同时保持高抗 体滴度，并且有助于传递母源抗体。
[0007] 现有专利文献
[000引韩国专利公开号第1020110132316
[0009] 韩国专利公开号第1020110092316
【发明内容】
[0010] 技术课题
[0011] 本发明是依据上述必要性而提出的，本发明的目的在于，提供一种韩国国内分离 的新型家禽腺病毒。
[0012] 解决技术的方法
[001引为了实现上述目的，本发明提供W保藏号KCTC 12425BP保藏的FAdVK4家禽腺病 0
[0014] 本发明的菌株已于2013年6月12日保藏在韩国典型菌种保藏中屯、（韩国大田儒城 区科学路125,韩国生物科学和生物技术研究院，305-806)。
[0015] 在本发明的一个实施方式中，上述病毒优选为从韩国国内的鸡分离的病毒，并且 优选包含序列号1的碱基序列，但不限于此。
[0016] 此外，本发明提供包含上述本发明的家禽腺病毒和可药用的载体或稀释剂的针对 由家禽腺病毒感染引发的疾病的家禽保护用疫苗。
[0017] 在本发明的一个实施方式中，上述疫苗优选对预防或治疗包涵体肝炎有效，优选 为灭活的形态，优选进一步包含助剂，优选进一步包含一种W上对家禽具有感染性的其他 病原菌的疫苗成分，但不限于此。
[0018] 此外，本发明提供家禽腺病毒的制造方法，该制造方法包括：向易受感染的基质接 种上述本发明所定义的家禽腺病毒的步骤;b)使上述家禽腺病毒增殖的步骤;及C)收集含 有上述家禽腺病毒的物质的步骤。
[0019] 在本发明的一个实施方式中，上述基质优选为选自由鸡肝胚细胞(CEL)、鸡胚成纤 维细胞(CEF)、鸡肾细胞(CK)和非洲绿猴肾细胞(Vero)细胞株组成的组中的一种细胞，但不 限于此。
[0020] 此外，本发明提供针对由家禽腺病毒感染引发的疾病的家禽保护用疫苗的制造方 法，其特征在于，包括将通过上述本发明的方法得到的收集后的家禽腺病毒与可药用的载 体或稀释剂结合的步骤，必要时在将上述家禽腺病毒灭活后实施上述步骤。
[0021] 此外，本发明提供在家禽中控制由家禽腺病毒感染引发的疾病的方法，该方法包 括将上述本发明的疫苗施用于鸟。
[0022] 本发明的疫苗例如能够根据用于市售的活的灭活的家禽腺病毒疫苗所经常使用 的常规方法来准备。兽医学疫苗组合物的制造尤其在巧andbunch der Schutzimp化ngen in der Tiermedizin"(编写：Mays , A.等人，Verlag Paul Parey,Berlin und Hamburg, Germany, 1984)和"Vaccines or Veterinary Applications"(编写：Peters ,A.R.等人， Butterworth-Heinemann Ltd, 1993)中已被说明。
[0023] 将增殖步骤后收集的病毒灭活的目的在于，防止病毒的再生。一般而言，灭活能够 通过化学或物理方法来实施。化学灭活例如能够通过用酶、甲醒、β-丙内醋、乙締亚胺或其 衍生物处理病毒来实施。必要时，灭活的化合物在后期被中和。被甲醒灭活的物质例如可W 由硫代硫酸盐中和。物理灭活能够优选通过向病毒照射能量充分的射线、例如UV光而实施。 必要时，照射后抑能够被调整为约7的值。
[0024] 含有灭活的家禽腺病毒的疫苗例如可W包含一种W上符合该目的的前述可药用 的载体或稀释剂。优选的是，本发明的灭活的疫苗包含一种W上具有辅助活性的化合物。符 合该目的化合物或组合物包含将氨氧化侣、憐酸侣、氧化侣、矿物油、维生素 E乙酸醋等植物 油和皂巧作为主成分的水包油型或油包水型乳剂。
[0025] 灭活的疫苗主要非经口施用，即通过肌肉内或皮下内施用。
[0026] 本发明的疫苗包含有效量的家禽腺病毒作为活性成分，所述有效量是指通过抵抗 毒性病毒所引起的攻击(施用抗原），在接种疫苗的鸟类或其后代中使能够诱导免疫的家禽 腺病毒物质免疫化的量。本申请中，免疫被定义为，与未进行疫苗接种的组相比，疫苗接种 后在鸟类群体中诱导相当高水平的免疫。
[0027] 通常，灭活疫苗包含与每只鸟类104-1〇WtCID50等效的抗原。
[0028] 本发明的家禽腺病毒疫苗能够有效地用于鸡，但火鸡、珍珠鸡(guinea fowl)和鹤 譜等其他家禽也能够有效地W疫苗来接种。鸡包含食用鸡、克隆家畜和下蛋的家畜。
[0029] 有益效果
[0030] 本发明通过提供新型家禽腺病毒、包含其的疫苗及它们的制造方法，能够有效保 护家禽不受家禽腺病毒感染。
【附图说明】
[0031] 图1是2007年至2010年之间韩国国内成功分离的包涵体肝炎病毒的血清型和发病 比率。< 出处:农林畜产检疫本部〉
[0032] 图2是其他病原体感染与否的试验。
[0033] 图3是HEX0N基因部位的系统学分析。
【具体实施方式】
[0034] W下，通过非限制性的实施例来更详细说明本发明。但，下述实施例是为了例示本 发明而记载的，本发明的范围不应理解为受到下述实施例的限制。
[00巧]①韩国国内露天养殖场中的化wl Adenovirus FAdV K4株分离、鉴定，其他病原体 否定试验
[0036] 从2010年位于京畿道的肉鸡养殖场委托的肉鸡摘取肝并放入灭菌憐酸缓冲溶液 (pH7.2)，从而制作10重量％的乳液。将其在3,000g下离屯、分离15分钟使细胞和组织沉淀， 将上清液用〇.45μπι的注射器过滤器过滤。通过解化11日龄的SPF鸡胚的绒毛尿囊膜 (chorioallantoic membrane : CAM)接种法分离，并通过聚合酶链式反应（PCR)最终鉴定 FAdV K4细胞株。
[0037] ②新型FAdV露天分离株内其他病原体否定试验
[0038] 为了确认能够在鸡胚胚胎的尿囊液和绒毛尿囊膜中增殖的其他病原体的存在与 否，对传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus, IBV)、新城疫病毒(Newcastle disease,NDV)、传染性F囊病病毒（Infectious bursal disease virus, IBDV)、鸡传染性贫 血病毒（Qiicken infectious anemia virus,CIAV)、支原体(Mycoplasma)实施逆转录聚合 酶链式反应（RT-PCR)和聚合酶链式反应（PCR),从而确认除了甘保罗病病毒分离株（IBD K7)W外没有其他病原体。
[0039] ③基因组碱基序列分析