RXR在筛选用于治疗由于鼠的γ-疱疹病毒易感引起的疾病的药物中的用图
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物医药领域，特别是涉及RXR在筛选用于治疗由于鼠的Y-疱疹病毒68易感引起的疾病的药物中的用途。
[0002]
【背景技术】
[0003]在病毒感染期间免疫激活导致视黄醇X受体下调，后简称(RXR)，RXR属于核受体，在细胞以及整个机体代谢中都是必不可少的。然而，RXR在抵御病毒感染的宿主防御中的作用仍然是未知的。核受体(NRs)代表一个大家族的转录因子参与的广谱生物学时间，例如发育、生殖以及代谢。(Robinson-Rechavi等2003)许多NR的超家族成员已经成为炎症和免疫反应的关键调节因子(Daynes和Jones, 2002 ; Joseph等2003 ;0gawa等2005),它们使巨噬细胞和树突状细胞感受其脂质环境并塑造其免疫反应。(Nagy等2012) RXR占据在核受体的中心位置，因为他们可以与其他家族成员一起形成异二聚体，因此参与多种生理过程包括细胞分化，免疫反应以及脂质代谢和糖代谢(kefebvre等2010 ；Roszer等2013)。RXR也能够形成同二聚体激活其靶基因(A等人2004 ;Zhang等1992)最近研究进展表明，RXR是巨噬细胞的关键调节因子，在免疫和代谢性紊乱中起到关键作用。RXR有三种同型异构体，RXR (NR2BDRXR (NR2B2), RXR (NR2B3)。每个同型异构体存在于特定的几个亚型中，在发育过程中具有特异的组织分布和表达模式。(Roszer等2013)以往的研究表明，在骨髓细胞中最丰富的受体，或者说至少是功能最重要的受体是RXR (Mangelsdorf等1992)。维生素A衍生物9顺维甲酸(9cRA)是第一个发现的RXR的天然配体(Perez等2012)内源性脂肪酸如二十二碳六烯酸(DHA)、油酸和植烷酸也是RXR的配体(Dawson和Xia, 2012)，许多RXR特异性合成配体例如LG100268 (LG268), AGN194204和贝沙罗汀也被称为视黄醇，被用于研究和临床应用(Perez等2012)。
[0004]巨噬细胞在固有免疫中起到关键作用，不仅仅在宿主防御病原体，细胞碎片清除，组织损伤后重塑，组织脂质代谢的整合器作用，但也可以产生一些列分泌产物，这些分泌产物可以影响其他免疫细胞的活性以及其迁移(Glass和01efsky2012 ；Nagy等2012)。在组织中巨噬细胞的长期活化状态以及其病原体的保留可以创造一种炎症微环境，这反过来又有助于动脉粥样硬化、胰岛素抵抗和神经退行性疾病。(Glass和01efsky2012 ；Roszer等2013).因此，在巨噬细胞的免疫和代谢过程的精密调节是非常重要的。在巨噬细胞中，诸如Toll样受体的模式识别受体活化可以激发快速的炎症或通过产生前炎性因子I型干扰素来激发抗病毒反应。(Newton和Dixit2012;Takeuchi和Akira, 2010)多个核受体家族成员已被证实可以抑制TLR诱导的体内和体外的炎症反应，其中包括维生素D受体VDRs,过氧化物酶增值激活受体PPARs，肝脏X受体LXRs和糖皮质激素受体(Castrillo和Tontonoz2004;Nagpal 等 2001 ；Nagy 等 2012;Ogawa 等 2005),同时，由病原体激活的 TLRs也可以调节巨噬细胞核受体靶基因。例如TLR3/4配体可以强烈抑制包括ABCAl和ABCGl的LXR靶基因从而阻断来着巨噬细胞胆固醇外流。(Castrillo等2003).越来越多的证据表明，核受体与过氧化物酶增值激活受体之间的相互作用可以调节炎症反应和细胞代谢(Castrillo等2003 ; Nagy等2012 ;Roszer等2013)。然而，核受体与宿主抗病毒反应之间的相互作用还需要进一步的研究。
[0005]细胞抗病毒反应的活化涉及许多信号转导途径可以产生I型干扰素。简单的说，病毒核酸激活TLR3、TLR7/8、TLR9或细胞内受体如维甲酸诱导基因I样受体家族、黑色素瘤分化相关抗原5，可以激活通路导致人TANK结合激酶I的激活，磷酸化，人干扰素调节因子3的迁移进入细胞核以及干扰素的转录等一系列变化。(Newton和Dixit2012 ；Takeuchi和Akira，2009，2010).干扰素诱导多种抗病毒基因表达。许多基因比如说干扰素刺激基因15、干扰素诱导的鸟苷酸结合蛋白I寡腺苷酸合成酶2可以直接抑制病毒的生长周期过程(Sadler和Williams2008)。其他诸如人干扰素调节因子1、人干扰素调节因子7、以及病毒核酸感受器(RIG-1和MDA5)进一步健全了干扰素反应。(Takeuchi和Akira，2009)。我们以前研究发现，RXR在病毒干扰过程中通过干扰素调节因子3依赖性但干扰素非依赖性通路表达下调。(Chow等2006)进一步的证据表明:病毒感染的小鼠在诸如阿司匹林的药物刺激下对肝毒性更加敏感，会产生一种类似于人类雷氏综合症的症状，这可能是因为药物代谢导致RXR下游的酶表达抑制的原因。(Chow等2006)尽管有这些有趣的研究现象，为什么在固有免疫反应病毒感染中RXR的表达下降，还有RXR的下调是否会影响病毒感染过程中的宿主防御，这些都尚不清楚。
[0006]环氧合酶I和环氧合酶2(C0X1和C0X2)是前列腺素生物合成的关键酶。COXl在许多组织中持续表达，C0X2是可诱导的酶，二者均可以促使前列腺素E2产生(Vane等1998)。PGE2的产生增加会导致大多数检测病毒的复制增加(巨细胞病毒、水泡型口炎病毒、牛白细胞增多病毒、单纯疱疹病毒-1、人类疱疹病毒_6、伪狂犬病毒、小鼠肝炎病毒-68) (Ray等2004 ；Steer和Corbett, 2003; Symensma等2003)。最近的研究表明前列腺素E2通过激活前列腺素E2受体EP2和EP4受体来激活PI3K - Akt- GSK3通路从而抑制干扰素α和干扰素β。(Fabricius等2010 ；Xu等2008)。尽管前列腺素E2的产生增加主要是由于病毒感染过程中环氧合酶2的产生增加(Steer和Corbett2003)。药理学以及遗传相关证据也表明，由环氧合酶I调节产生的前列腺素E2在调节I型干扰素产生和宿主抗病毒反应中起到关键作用。(Carey等2005 ；Chen等2012 ；Ray等2004)。；比如环氧合酶I特异性抑制剂增加伪狂犬病毒PFV的复制(Ray等2004)给予环氧合酶I敲除但未给予环氧合酶2敲除的小鼠更能抵抗流感病毒的侵袭(Carey等2005)环氧合酶I启动子通过高度乙酰化在组蛋白去乙酰化缺陷的巨噬细胞中产生干扰素抑制(Chen等2012)尽管多个研究表明，环氧合酶I调节I型干扰素的抑制，但是通过宿主抗病毒反应调节环氧合酶I的研究仍然极少。
[0007]
【发明内容】
[0008]鼠Y疱疹病毒68是双链DNA病毒，感染机体后能入侵多种细胞，包括巨噬细胞、淋巴细胞、呈纤维细胞等，在宿主细胞中长期潜伏感染。视黄醇X受体(Retinoid Xreceptor),后简称(RXR), RXR属于核受体(nuclear receptors),在细胞以及整个机体代谢中都是必不可少的。然而，RXR在抵御病毒感染的宿主防御中的作用仍然是未知的。
[0009]鉴于以上所述现有技术，本发明第一方面提供RXR在筛选用于治疗感染鼠Y疱疹病毒68 (mouse gamma-herpessvirus 68)(登录号)的药物中的用途。
[0010]优选的，所述用途为鼠Y疱疹病毒68易感细胞模型构建中的用途，具体为RXR过度表达所引起的鼠Y疱疹病毒68毒易感。
[0011]更优选的，所述易感细胞模型为胚胎癌细胞模型。
[0012]进一步优选的，所述细胞模型为癌细胞模型。
[0013]所述筛选药物可理解为，将待筛选的药物分别给予构建后的鼠Y疱疹病毒68易感细胞模型与正常细胞模型，并对细胞模型进行比较，从而对所述待筛选的药物进行生物活性、药理作用及药用价值的评估。
[0014]由于RXR过度表达对于鼠Y疱疹病毒68易感，且RXR表达水平可能调控鼠Y疱疹病毒68感染的宿主易感性，并阻碍细菌廓清，所以RXR过度表达可用于构建鼠Y疱疹病毒68易感胚胎癌细胞模型,在筛选用于治疗感染鼠Y疱瘆病毒68的药物中具有实际应用价值。
[0015]本发明进一步提供RXR过度表达所引起的鼠Y疱疹病毒68易感胚胎癌细胞金模型的构建方法，所述方法具体为:对野生型RXR和缺乏F9胚胎癌细胞预处理，给予注射鼠Y疱疹病毒68 (*PFU/μ L)，再通过菌斑实验计数上清液中不同特定时间点的病毒滴度。
[0016]所述注射鼠Y疱瘆病毒68的具体方法为:给予骨髓源性巨嗷细胞lg/ml poly I:C病毒转染，或给予骨髓源性巨噬细胞感染poly dA:dT4小时QRT-PCR检测RXR mRNA表达。
[0017]本发明证实了 RXR表达水平可调控鼠Y疱疹病毒68感染的宿主易感性并进一步阐述了相关免疫机理。
[0018]本发明发明人发现RXR介导的固有免疫响应在鼠Y疱疹病毒68感染过程中的的宿主防御中不可或缺；并率先证明了在鼠Y疱疹病毒68感染的宿主防御中，RXR-Cox-1依赖性途径有着关键性的作用。
[0019]本发明第二方面提供RXR在筛选用于治疗感染水泡型口炎病毒(vesicularstomatitis virus)(登录号)的药物中的用途。
[0020]优选的，所述用途为水泡型口炎病毒易感细胞模型构建中的用途，具体为RXR+/+所引起的感染水泡型口炎病毒易感。
[0021]更优选的，所述易感细胞模型为胚胎癌细胞模型。
[0022]进一步优选的，所述细胞模型为癌细胞模型。
[0023]本发明进一步提供RXR过度表达所引起的感染水泡型口炎病毒易感细胞模型的构建方法，所述方法具体为:对野生型RXR和缺乏F9胚胎癌细胞预处理，给予注射水泡型口炎病毒，再通过噬菌斑实验计数上清液中不同特定时间点的病毒滴度。
[0024]所述细菌感染的具体方法为:给予骨髓源性巨嗷细胞lg/ml poly 1:C病毒转染，或给予骨髓源性巨噬细胞感染poly dA:dT4小时QRT-PCR检测RXR mRNA表达。
[0025]由于MHV68易感细胞展现出与VSV易感细胞