一种高得率酶法辅助提取二苯乙烯苷的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明公开了一种高得率酶法辅助提取二苯乙烯苷的制备方法，属于二苯乙烯苷制备技术领域。
【背景技术】
[0002]二苯乙烯苷又称芪多酚，属于多羟基芪类化合物，二苯乙烯苷是何首乌药材中特有的生物活性成分，是何首乌药材的专属性指标组分，易溶于水、甲醇、乙醇。药理研究表明，二苯乙烯苷具有抗氧化清除自由基、抗衰老、降低胆固醇、保肝及神经保护作用，可开发研制治疗老年性痴呆、降血脂和抗动脉粥样硬化的新药物。
[0003]现有从何首乌中分离制备二苯乙烯苷的方法:首先采用稀乙醇为提取溶剂对何首乌药材进行回流提取，然后使用乙酸乙酯对提取液进行萃取，再对乙酸乙酯萃取层依次进行娃胶柱层析和Sephadex LH-20柱层析分离，最后制备得到含量为85%的二苯乙稀苷。该方法的主要缺点在于:①采用高温回流提取二苯乙烯苷，在高温条件下二苯乙烯苷易被氧化和糖苷键断裂，该提取方法对二苯乙烯苷造成破坏;②采用常压柱色谱多次分离，过程繁琐、耗时长，溶剂耗量大，提高了制备成本;③组分在常压柱子中停留时间过长而产生死吸附，样本损失大，回收率较低。
[0004]除此以外，目前人工合成的二苯乙烯苷极具困难，且成本昂贵，合成出的二苯乙烯苷性能不够稳定，且纯度不高，目前从植物中提取二苯乙烯苷是一种常见的方法，但是大部分从植物中提取还都采用了大量的有机溶剂进行提取，不仅操作繁琐，价格昂贵，且制得的二苯乙烯苷的纯度依旧不高，且存在有机物残留的问题。
[0005]因此，制得一种高纯度，无有机溶剂的二苯乙烯苷是很有必要的事情。
【发明内容】
[0006]本发明主要解决的技术问题:针对目前传统方法在从植物中提取二苯乙烯苷的过程中，往往都是在高温下进行，使得二苯乙烯苷易被氧化并造成糖苷链断裂，另外在提取时，还采用大量的有机溶剂，不仅操作繁琐，价格昂贵，残留的有机溶剂还会污染环境，使制得的二苯乙烯苷纯度较低的现状，提供了一种以何首乌为原料，先经高压均质再利用复合酶剂酶解以提高提取率，再通过微波醇提后，旋蒸浓缩，最后干燥研磨，从而得到高得率酶法辅助提取二苯乙烯苷。该方法操作简便，在提取的过程中无需添加大量有机溶液，避免了有机物残留，而且操作环境温和，避免了高温导致二苯乙烯苷氧化和糖苷链断裂的问题，最终使得二苯乙烯苷提取率达95 %以上，纯度高达99 %以上，适合大规模生产应用。
[0007 ]为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是:
(1)称取I?2kg何首乌洗净后晾干放入气流粉碎机中，以3m3/min空气耗量和0.70?
0.SOMPa空气压力进行粉碎，将得到何首乌粉末按固液比为1: 2倒入蒸馏水中，放置在磁力搅拌机上，以200?300r/min转速搅拌混合10?20min，得到何首乌粉末悬浊液；
(2)将上述得到的何首乌粉末悬浊液移入高压均质机，以2.0?3.0L/h流速和100?IlOMPa压力进行高压均质处理5?8min，量取1.0?1.2L均质后的何首乌混合液装入体积为2L的陶瓷酶解罐中，加入酶解底物总质量0.2?0.5%复合酶剂，用浓度为0.5mol/L醋酸溶液调节pH至4.0?5.0，放置在恒温箱中于35?45°C下密封酶解60?80min ；
(3)酶解完成后过滤分离去除滤渣，得到酶解液，将酶解液装入管式超滤装置中，利用10万分子量的醋酸纤维素膜作为超滤膜，并在0.1?0.2MPa的驱动压力和20?30°C的条件下进行超滤，收集滤液；
(4)将上述超滤后的滤液和无水乙醇按体积比为1:1进行混合，放入微波提取仪中，以200?250W功率加热至40?50°C，保温微波醇提I?2h，醇提完成后将混合液放入旋转蒸发器，加热升温至45?55°C，旋蒸回收无水乙醇并浓缩处理直至混合液体积变为原体积的1/8?1/6，得到浓缩液；
(5)将上述得到的浓缩液放入真空冻干机，以TC/min速率进行降温直至冷阱温度达至IJ-40?-30°C，冷冻干燥30?40min，干燥后再放入玛瑙研钵中研磨成粉并过200目标准筛，包装，即得二苯乙烯苷。
[0008]步骤(2)中所述的复合酶剂是由纤维素酶和中性蛋白酶按质量比为2:1复配制得。
[0009]本发明的应用方法是:将本发明制得的二苯乙烯苷粉末制成二苯乙烯苷胶囊，其中每个胶囊中装有I?3g二苯乙烯苷粉末，食用时，配以250?350mL温开水送服，每日三餐后服用一次，每次服用I?3粒，长期使用10?15天，测得人体胆固醇降低，抵抗力得到了提高，且抗衰老的效果显著。
[0010]本发明的有益效果是:该方法操作简便，在提取的过程中无需添加大量有机溶液，避免了有机物残留，而且操作环境温和，避免了高温导致二苯乙烯苷氧化和糖苷链断裂的问题，最终使得二苯乙烯苷提取率达95 %以上，纯度高达99 %以上，适合大规模生产应用。
【具体实施方式】
[0011]首先称取I?2kg何首乌洗净后晾干放入气流粉碎机中，以3m3/min空气耗量和
0.70?0.80MPa空气压力进行粉碎，将得到何首乌粉末按固液比为1: 2倒入蒸馏水中，放置在磁力搅拌机上，以200?300r/min转速搅拌混合10?20min，得到何首乌粉末悬池液;然后将上述得到的何首乌粉末悬浊液移入高压均质机，以2.0?3.0L/h流速和100?I 1MPa压力进行高压均质处理5?8min，量取1.0?1.2L均质后的何首乌混合液装入体积为2L的陶瓷酶解罐中，加入酶解底物总质量0.2?0.5%复合酶剂，用浓度为0.5mol/L醋酸溶液调节pH至4.0?5.0，放置在恒温箱中于35?45°C下密封酶解60?80min;酶解完成后过滤分离去除滤渣，得到酶解液，将酶解液装入管式超滤装置中，利用10万分子量的醋酸纤维素膜作为超滤膜，并在0.1?0.2MPa的驱动压力和20?30°C的条件下进行超滤，收集滤液;接下来将上述超滤后的滤液和无水乙醇按体积比为I: I进行混合，放入微波提取仪中，以200?250W功率加热至40?50°C，保温微波醇提I?2h，醇提完成后将混合液放入旋转蒸发器，加热升温至45?55 °C，旋蒸回收无水乙醇并浓缩处理直至混合液体积变为原体积的1/8?1/6，得到浓缩液;最后将上述得到的浓缩液放入真空冻干机，以l°C/min速率进行降温直至冷阱温度达至IJ-40?-30°C，冷冻干燥30?40min，干燥后再放入玛瑙研钵中研磨成粉并过200目标准筛，包装，即得二苯乙烯苷。
[0012]实例I 首先称取Ikg何首乌洗净后晾干放入气流粉碎机中，以3m3/min空气耗量和0.70MPa空气压力进行粉碎，将得到何首乌粉末按固液比为1:2倒入蒸馏水中，放置在磁力搅拌机上，以200r/min转速搅拌混合lOmin，得到何首乌粉末悬浊液;然后将上述得到的何首乌粉末悬浊液移入高压均质机，以2.0L/h流速和10MPa压力进行高压均质处理5min，量取1.0L均质后的何首乌混合液装入体积为2L的陶瓷酶解罐中，加入酶解底物总质量0.2%复合酶剂，用浓度为0.5mol/L醋酸溶液调节pH至4.0，放置在恒温箱中于35 °C下密封酶解60min;酶解完成后过滤分离去除滤渣，得到酶解液，将酶解液装入