一种断氧化马钱子苷的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种断氧化马钱子巧的制备方法，具体设及一种从金银花中快速制备 断氧化马钱子巧的方法。
【背景技术】
[0002] 断氧化马钱子巧是从忍冬科植物忍冬化onicera japonica Thunb.)的干燥花蕾 即金银花(Flos Lonicerae japonicae)中提取精制得到的产品。断氧化马钱子巧是环締酸 祗类化合物，是金银花的一种有效成分。现代药理研究发现，环締酸祗类化合物具有神经系 统保护作用、抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、保肝利胆、降血糖、解疫镇痛等药理作用，也可用 于治疗屯、血管疾病、糖尿病及其并发症的原料药物。文献报道，断氧化马钱子巧在20mg/kg 的剂量下，对0^4致肝损伤小鼠显示显著的保肝活性，因此，断氧化马钱子巧具有很大的开 发应用前景，对断氧化马钱子巧的分离和纯化成为断氧化马钱子巧深度开发的关键技术。
[0003] 现有研究技术中，关于断氧化马钱子巧制备方法的文献很少，且对断氧化马钱子 巧的分离纯化也只限于实验室条件下研究，一般从药材提取经萃取或大孔树脂纯化到娃 胶、凝胶及反相柱层析纯化等要经过5~6步甚至更多步骤才能得到纯度较高的化合物，步 骤比较繁琐，且有机溶剂用量大。根据文献报道，如毕跃峰(毕跃峰，田野，裴珊珊，刘宏民. 金银花中裂环环締酸祗巧类化学成分研究.中草药[J]. 2008,39(1): 18~21.)利用D101、 S邱hadexLH-20、硅胶等色谱法从1.化g金银花中分离得到21mg断氧化马钱子巧;宋卫霞(宋 卫霞.金银花水溶性化学成分研究[D].中国协和医科大学，2008.)从12kg金银花中分离得 到断氧化马钱子巧13. Img;田野（田野.金银花化学成分研究[D].郑州大学.2007.)从1.化g 金银花中通过萃取、大孔树脂及反复硅胶柱色谱等方法分离得到断氧化马钱子巧21mg;李 杨（李杨，戴毅，张金博，刘明莉，姚新生.金银花中1个新的环締酸祗巧类化合物.中草药 [J].2013,44(21) :2951~2954.)通过HP-20大孔树脂、0DS、HW-40等多种柱色谱从1kg金银 花中分离得到断氧化马钱子巧186.2mg;陈雨（陈雨，赵友谊，吴双，王鸣，冯賊，梁敬佳.灰拉 毛忍冬花蕾水溶性化学成分研究.中药材[J] .2012,35(2) : 231~234.)采用D101、 S邱hadexLH-20和反复反相柱层析等方法从8kg灰拉毛忍冬花蕾中分离得到断氧化马钱子 巧121mg。然而，W上研究中普遍存在一个问题，断氧化马钱子巧都是在化学成分研究过程 中发现的，得到的断氧化马钱子巧的量非常小，重现性差，难于放大。此外，多数精制纯化过 程中用到S邱hadexLH-20填料，该填料载样量少、流速小，耗时长，大规模放大难W操作，而 且该填料价格昂贵，成本高，不适合工业化推广。
[0004] 因此，很有必要在现有技术的基础之上，研究开发一种制备效率高，速度快，生产 成本低，无需使用大量有机溶剂，具有很好应用前景的从金银花中快速制备断氧化马钱子 巧的方法。
【发明内容】
[0005] 发明目的:本发明的目的是为了解决现有技术的不足，经过大量实验筛选，提供从 金银花中快速制备断氧化马钱子巧的方法。本发明提供的制备方法，w金银花为原药材，采 用优选树脂柱吸附，并用优选浓度的乙醇洗脱，最后在优化的工艺条件下工业制备色谱纯 化，整个工艺制备效率高，尤其是制备量大，得率高，制备得到的断氧化马钱子巧纯度高，生 产成本低，可操作性强，适合大规模制备，具有很好应用前景。
[0006] 技术方案:为了实现W上目的，本发明采用如下技术方案：
[0007] -种断氧化马钱子巧的制备方法，包括W下步骤：
[000引（1)取金银花药材，加入药材8~16倍量体积浓度为70 %~85 %乙醇回流提取1~3 次，滤过，合并滤液，浓缩，上大孔树脂柱，先用水洗脱，再用浓度为20%~95%的乙醇梯度 洗脱，收集含有断氧化马钱子巧的洗脱部位；
[0009] (2)工业制备色谱分离:将断氧化马钱子巧部位用工业制备色谱制备，色谱柱W反 相C18为填料，W体积比为10~35:90~65的甲醇：水为流动相，于242nm波长下监视流出曲 线W指导产品收集，收集液经浓缩干燥后得到断氧化马钱子巧。
[0010] 作为优选方案，W上所述的从金银花中快速制备断氧化马钱子巧的方法，所述的 工业制备色谱分离的色谱条件为:色谱柱W反相Ci8为填料(30~250X250~1000mm)，流速 为10~lOOOmL/min，进样量为0.2g~20.0 g，波长为24化m，流动相为体积比为25:75的甲醇 和水，每次样品处理时间为30~60min。
[0011] 制备工艺筛选试验
[0012] 1、树脂型号的筛选
[0013] 选取巧巾经预处理的树脂各5g(D101、HP20、HPD100)置100ml具塞锥形瓶中，取金银 花提取浓缩液加入瓶中，于室溫静置24h，吸附平衡后，滤去树脂，定量移取清液，测定断氧 马钱巧的含量，计算吸附率。结果吸附率依次为72.1 %、64.3%、67.7%，因此本发明选择 D101型大孔吸附树脂，纯化效率更高。
[0014] 2、洗脱溶剂的选择
[0015] 按照优选的D101树脂平行取5份进行样品吸附后，先用水洗脱至流出液为无色后， 然后分别用10 %、20 %、30 %、40 %、60 %乙醇溶液进行洗脱，并用HPLC跟踪检测，计算洗脱 率，流出液减压浓缩并干燥，测定断氧马钱巧含量，结果见表1。
[0016] 表1不同浓度乙醇对断氧马钱巧的洗脱率和含量
[0017]
[001引由表1可知，10%乙醇洗脱液的断氧马钱巧含量最高，但洗脱不完全，30%、40%和 60%乙醇洗脱液洗脱率虽高，但杂质也多，故选择20 %乙醇作为洗脱溶剂，不仅洗脱率高， 并且洗脱液中断氧马钱巧的含量也高。
[0019] 作为优选方案，W上所述的从金银花中快速制备断氧化马钱子巧的方法，取金银 花药材，加入药材8倍量体积浓度为70 %乙醇回流提取2次，滤过，合并滤液，上D101大孔树 脂柱。
[0020] 3、工业制备色谱分离条件选择
[0021 ]采用Agilent 1260分析型高效液相色谱仪，W甲醇-水，甲醇-0.5%甲酸水，乙腊- 水和乙腊-0.5%甲酸水分别为流动相，实验结果表明，W甲醇-0.5 %甲酸水，乙腊-水和乙 腊-0.5 %甲酸水为流动相时，系统分离效果较差，洗脱速度慢，峰形不佳，因此本发明选择 甲醇-水为洗脱剂。
[0022] 确定洗脱剂后，本发明又通过大量实验对甲醇:水的具体体积比进行了大量的实 验筛选，结果表明，甲醇:水= 25:75(V/V)时，具有很好的洗脱效果，并可在40分钟内分离洗 脱得到断氧化马钱子巧。洗脱速度快，效率高。
[0023] 作为优选方案，W上所述的从金银花中快速制备断氧化马钱子巧的方法，步骤(2) 制备得到断氧化马钱子巧的纯度达98% W上，相比现有技术所得纯度更高。
[0024] 有益效果:本发明与现有技术相比具有W下优点：
[0025] 本发明提供的从金银花中快速制备断氧化马钱子巧的方法，经过系统实验筛选最 佳的提取方法和大孔树脂纯化方法，并经过大量实验优选的反相工业制备色谱纯化制备得 到高纯度的断氧化马钱子巧，本发明的优点是仅采用大孔树脂和工业制备色谱两步纯化即 可得到高纯度的断氧化马钱子巧，避免了现有技术经萃取或反复正相硅胶、凝胶及常压反 相柱层析等繁杂步骤、洗脱时间长、有机溶剂用量大、得率低等缺点，工艺合理，操作简单， 重复性好，误差小，尤其是相对常压柱层析来说，制备周期短、制备量大、产量高，得到的断 氧化马钱子巧纯度高，适合大规模制备，取得了很好的技术效果。
【附图说明】
[0026] 图1为本发明制备的断氧化马钱子巧的液相色谱图。
[0027] 图2为断氧化马钱子巧对照品的液相色谱图。
【具体实施方式】
[0028] 根据下述实施例，可W更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实 施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限 制权利要求书中所详细描述的本发明。
[00巧]实施例1
[0030] 1、一种断氧化马钱子巧的制备方法，其包括W下步骤：
[0031] (1)取金银花药材化g，加入药材8倍量体积浓度为70 %乙醇回流提取2次，每次2小 时，滤过，合并滤液，浓缩，上D101大孔树脂柱，先用水洗脱，再用浓度为20%的乙醇梯度洗 脱，收集20 %乙醇洗脱部位；
[0032] (2)工业制备色谱制备分离:将断氧化马钱子巧部位用工业制备色谱进行制备，色 谱柱为反相Ci8色谱柱(50X250mm)，流速为20mL/min，波长为242皿，