一株产槐糖脂酵母菌及其制备方法与应用

文档序号:9804388阅读:1171来源:国知局
一株产槐糖脂酵母菌及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种酵母菌及其制备方法与应用,特别是涉及一种一株产槐糖脂酵母菌及其制备方法与应用。
【背景技术】
[0002]槐糖脂是酵母菌等微生物合成的具有一定表面活性的代谢产物,能够降低液体表面张力、稳定乳化液和增加泡沫等表面活性剂的一般作用外,还具有环境友好、可生物降解等优点,在环境污染生物修复、食品防腐抑菌、食品乳化、洗涤日化、生物农药、抑制肿瘤细胞等方面有广阔的应用前景。目前已经发现的产生物表面活性剂的微生物主要以细菌为主,而产生物表面活性剂的酵母菌数量较少。本发明所使用的热带假丝酵母菌能利用广谱碳源,如各种新鲜食用油脂、废弃食用油脂(地沟油)、石油(原油)为单一碳源,油脂、原油、烷烃与葡萄糖或甘蔗、甜菜糖蜜等为混合碳源合成糖脂类表面活性剂。

【发明内容】

[0003]本发明的目的在于提供一种一株产槐糖脂酵母菌及其制备方法与应用,本发明利用热带假丝酵母(Candida tropicalis)CCTCC NO: M2014349及其发酵液、发酵提取物应用于日化产品、食品抑菌保鲜、农药生产等需要乳化稳定的领域,生物医药领域以及环境污染治理等领域,并可将该菌株与其他菌株进行联合使用或将其发酵液、发酵液分离纯化产物与其他化学或生物表面活性剂进行复配使用。
[0004]本发明的目的是通过以下技术方案实现的:
一株产槐糖脂酵母菌,所述酵母菌包括热带假丝酵母(Candida tropicalis)CCTCCNO: M2014349;热带假丝酵母(Candida tropicalis)CCTCC NO: M2014349的休止细胞;热带假丝酵母(Candida tropicalis)CCTCC NO: M2014349的发酵液及其发酵液提取物;一种复合发酵菌剂,其中含有热带假丝酵母(Candida tropicalis)CCTCC NO: M2014349。
[0005]—株产槐糖脂酵母菌及其制备方法,所述酵母菌制备方法包括将保藏的菌种活化,将活化的培养物接入液体种子培养基在25-30°C,在120-180 r/min条件下振荡培养24h以制备液体种子;将制得的液体种子转接入一级发酵罐中,接种量5_10%,在通气量0.75-
1.0vvm、搅拌转数140-180r/min条件下培养20-24h,制得一级发酵菌种;再将一级发酵菌种接入二级发酵罐中,接种量5-10%,在通气量0.75-1.0 vvm,,搅拌转数140_180r/min条件下培养24h,制得二级发酵菌种;将二级发酵菌种再转接入三级发酵罐中,接种量10%,在通气量0.75-1.0^111、搅拌转数140-18(^/1^11条件下发酵培养48-8411,即制得含槐糖脂类表面活性剂的发酵液;槐糖脂类表面活性剂的分离:将发酵液在5000 r/min离心15min去菌体后,将上清液用等体积的乙酸乙酯萃取,将萃取液在低于55°C条件下减压干燥,所得物用正己烷洗涤2次,再次减压干燥,得淡黄色固体物质;在上述条件下,本菌株的糖脂类表面活性剂产量达20-30g/L。
[0006]—株产槐糖脂酵母菌应用,所述酵母菌应用范围包括如下: 1)热带假丝酵母(Candidatropicalis)CCTCC NO: M2014349及其发酵液和发酵提取物用于含石油、原油污水的处理及海洋原油污染的处理,以及油污容器、管道、器械的处理;
2)热带假丝酵母(Candidatropicalis)CCTCC NO: M2014349及其发酵液和发酵提取物用于餐厨废弃油脂如地沟油、含食用油污水、土壤和油污容器、器械的处理;
3)热带假丝酵母(Candidatropicalis)CCTCC NO: M2014349及其发酵液和发酵提取物用于海水及淡水水体、土壤重金属污染的修复;
4)利用热带假丝酵母(Candidatropicalis)CCTCC NO: M2014349及其发酵液和发酵液提取物及其复配物用于果蔬、肉类、蛋类食品的抑菌、防腐、保鲜;
5)利用热带假丝酵母(Candidatropicalis)CCTCC NO: M2014349发酵液和发酵提取物用于洗涤、日化用品生产或做配料、辅料;
6)利用热带假丝酵母(Candidatropicalis)CCTCC NO: M2014349及其发酵液和发酵提取物作为乳化剂;
7)利用热带假丝酵母(Candidatropicalis)CCTCC NO: M2014349及其发酵液和发酵提取物用于生物农药及化学农药的生产;
8)利用热带假丝酵母(Candidatropicalis)CCTCC NO: M2014349及其发酵液和发酵提取物用于饲料生产;
9)用热带假丝酵母(Candidatropicalis)CCTCC NO: M2014349及其发酵液和发酵提取物用于抗肿瘤药物的生产。
[0007]本发明的优点与效果是:
本发明涉及菌株热带假丝酵母(Candida tropicalis)CCTCC NO: M2014349可利用废弃食用油脂(地沟油)、石油(原油)为单一碳源,油脂、原油、烷烃与葡萄糖或甘蔗、甜菜糖蜜等为混合碳源合成生物表面活性剂槐糖脂及其应用。热带假丝酵母(Candida tropical is)CCTCC NO: M2014349所产槐糖脂类表面活性剂具有优良的表面活性,在100°C处理0.5小时其表面及乳化等性能没有显著变化。该菌株所产槐糖脂的乳化值可达61%,临界胶束浓度为
0.005g/L,HLB值为11,可用于0/W乳化剂,有望在一定程度上替代常规化学表面活性剂应用于生产实践。
【附图说明】
[0008]图1为热带假丝酵母(Candida tropicalis)CCTCC NO: M2014349所产生物表面活性剂的红外光谱图;
图2为热带假丝酵母(Candida tropicalis)CCTCC NO: M2014349所产生物表面活性剂的质谱图。
【具体实施方式】
[0009]下面结合实施例对本发明进行详细说明。
[0010]保藏信息:
菌株名称:Candida tropicalis DHYT52保藏日期:2014年7月21日保藏单位:中国典型培养物保藏中心保藏编号:CCTCC NO: M2014349 地址:中国.武汉.武汉大学
将专利保藏的菌种活化,将活化的培养物接入液体种子培养基在25-30 °C,在120-180r/min条件下振荡培养24h以制备液体种子;将制得的液体种子转接入一级发酵罐中(接种量5-10%),在通气量0.75-1.0vvm,,搅拌转数140_180r/min条件下培养20_24h,制得一级发酵菌种;再将一级发酵菌种接入二级发酵罐中(接种量5-10%),在通气量0.75-1.0 vvm,,搅拌转数140-180r/min条件下培养24h,制得二级发酵菌种;将二级发酵菌种再转接入三级发酵罐中(接种量10%),在通气量0.75-1.0vvm、搅拌转数140-180r/min条件下发酵培养48-84h ,即制得含槐糖脂类表面活性剂的发酵液。
[0011]槐糖脂类表面活性剂的分离:将发酵液在5000r/min离心15min去菌体后,将上清液用等体积的乙酸乙酯萃取,将萃取液在低于55°C条件下减压干燥,所得物用正己烷洗涤2次,再次减压干燥,得淡黄色固体物质。
[0012]在上述条件下,本专利菌株的糖脂类表面活性剂产量可达20_30g/L。
[0013]具体实施例1:利用热带假丝酵母(Candidatropicalis)CCTCC NO: M2014349的发酵液应用于需要处理的水体、土壤、管道器材,或与其他微生物或化合物同时使用。
[0014]将保藏的菌种活化,之后接入液体种子培养基中,在30-370C ,150 r/min条件下培养18_24h,制备液体种子,接种量为每250mL培养基接入一环,;将制得的液体种子转接入一级发酵罐中(接种量5-10%),在通气量0.75-1.0vvm,,搅拌转数140_180r/min条件下制得一级发酵菌种;将一级发酵菌种转接入二级发酵罐中(接种量5-10%),在通气量0.75-1.0vvm,,搅拌转数140-180r/min条件下制得二级发酵菌种;将二级发酵菌种再转接入三级发酵罐中(接种量5-10%),在通气量0.75-1.0vvm,,搅拌转数140-180r/min条件下发酵培养48-72小时,即制得表面活性剂发酵液。该发酵液可去菌体或不去菌体施用于原油、食用油脂污染的水体、土壤等处,或与其他微生物或化合物同时使用。在15-30 °C条件下处理3 d,该菌株菌株对质量浓度为2 g/L的水体废弃食用油脂、石油污染物的降解率高达90 %。
[0015]斜面培养基(%):葡萄糖2.0,酵母粉1.0,蛋白胨2.0,琼脂2.0,121°C灭菌20min。
[0016]种子培养基(%):葡萄糖5.0,硫酸铵 0.4,KH2P04 0.I,Na2HP04.12H20 0.1,ΜgS04.7H20 0.05,酵母粉0.2,121°C灭菌20min。
[0017]发酵培养基(%):葡萄糖5.0,大豆油(原油等)2.0-5.0(¥八),硫酸铵0.4,1012?04
0.1,Na2HP04.12H20 0.1,M gS04.7H20 0.05,酵母粉0.2,121°C灭菌2
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