一株大叶黄杨内生细菌甲基营养型芽孢杆菌及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于微生物农药领域，尤其设及一株大叶黄杨内生细菌甲基营养型芽抱杆 菌及其应用。
【背景技术】
[0002] 植物炭痘病是一类地域分布广泛的世界性病害。从单子叶植物到双子叶植物、从 裸子植物到被子植物均有炭痘病危害的报道。该病侵染植物叶片、茎干、果实等，造成巨大 的经济损失。炭痘菌的无性阶段隶属于真菌界（E U m y C 0 t a )，半知菌亚口 (Deuteromycotina)，腔抱纲（Coelomycetes)，黑盘抱目（Melanconiales)，炭痘菌属 (Colletotrichum Corda);有性态属于真菌界化umycota)，子囊菌口（Ascomyco1:a)，核菌纲 (Pyrenomyetes)，球壳菌目（S地aeriales)，小丛壳属(Glomerella)。植物炭痘病菌W菌丝 体和分生抱子盘随病残体或者在±壤中越冬，成为病害的初侵染源，当溫湿度条件适宜时， 分生抱子萌发产生菌丝并侵染植物。炭痘病菌在寄主植物上形成分生胞子盘，产生的分生 抱子通过风雨瓣散传播进行再侵染。炭痘病严重影响农林作物和园林观赏植物的产量与品 质，危害严重时甚至引起植物死亡。
[0003] 大叶黄杨化uonymus japonicus Thunb.)是一种在我国广泛分布的常绿树种，常 常作为园林园艺观赏植物栽植于道路两旁、公园、校园、私人庭院等场所。大叶黄杨常受到 各种病虫害的侵害，其中炭痘病是一类在大叶黄杨上发生普遍、危害严重的一种真菌病害。 该病主要发生于大叶黄杨的叶片和枝梢上，感病植株叶部的病斑常呈褐色，近圆形或不规 则形，微具同屯、轮纹;枝梢部的病斑呈楠圆形或不规则形的溃瘍斑，病斑扩展后，枝梢头部 弯曲下垂枯死，后期病斑上产生小粒黑点即病菌分生胞子盘。在高溫多湿条件下，分生抱子 盘会产生胶粘状粉红色分生抱子堆。
[0004] 大叶黄杨炭痘病原菌的分生抱子在病枝、病叶或±壤中越冬，翌年借风雨传播并 侵染新叶，病菌抱子主要通过风雨、昆虫等传播，还通过栽培管理活动或带病苗木远距离传 播。该病可从伤口侵入或者自然孔口，也可直接侵入。
[0005] 目前大叶黄杨炭痘病的防治主要还依赖于化学防治，该防治方法容易导致病菌的 抗药性和环境污染等问题。植物内生菌是一类与寄主植物长期协同进化而形成的一类共生 微生物，在促进植物生长、提高植物抗逆性等方面发挥重要作用，内生菌作为微生物农药也 具有潜在的应用前景。
【发明内容】
[0006] 发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一株大叶黄杨内生 细菌甲基营养型芽抱杆菌，满足使用需求。本发明的另一目的是提供上述大叶黄杨内生细 菌甲基营养型芽抱杆菌的应用。
[0007] 技术方案:为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：
[000引一株大叶黄杨内生菌甲基营养型芽抱杆菌，其分类命名为（Bacillus methylotro地icus；)HYEB5-6,已保藏于中国典型培养物保藏中屯、，保藏编号是CCTCC NO: M2015728，保藏日期:2015年12月8日，保藏地址为湖北武汉武汉大学。
[0009] 所述的大叶黄杨内生菌甲基营养型芽抱杆菌HYEB5-6在抑制大叶黄杨炭痘菌生长 中的应用。
[0010] 所述的大叶黄杨内生菌甲基营养型芽抱杆菌HYEB5-6培养物在防治大叶黄杨炭痘 病中的应用。
[0011] 所述的大叶黄杨内生菌芽抱杆菌HYEB5-6在括抗大叶黄杨炭痘菌、交链抱菌、金黄 壳囊抱菌、希金斯刺盘抱菌、稻攝病菌、丝核菌、屯叶树壳梭抱菌和腐皮镶刀菌中的应用。
[0012] 大叶黄杨内生细菌芽抱杆菌HYEB5-6,是一株从大叶黄杨化uonymus japonicus Thunb.) -年生幼嫩的枝条中筛选获得的对大叶黄杨炭痘菌((：.旨1〇6〇39〇1'；[01(163)生长繁 殖有抑制作用的内生细菌菌株。该大叶黄杨内生细菌芽抱杆菌HYEB5-6的生物学特性如下： [OOK]菌株在NA培养基上的菌落形态表现为圆形、扁平、乳白色、表面權皱;菌体杆状、长 1.5-2μπι;具楠圆形芽抱，且芽抱中生;革兰氏染色呈阳性;有周生鞭毛；吗I噪乙酸试验和产 出S试验呈阴性，甲基红、明胶水解、淀粉水解及V.P试验均呈阳性。ΗΥΕΒ5-6菌株形态学及生 理生化特征与芽抱杆菌属具有明显的相似性。
[0014] ΗΥΕΒ5-6菌株的leSrDNA序列（SEQ ID NO. 1)与eztaxon数据库中模式菌种的 leSrDNA序列进行比对，并采用MEGA6.0软件构建HYEB5-6与高相似性菌株的系统发育树。从 系统发育树可W看出，HYEB5-6菌株与其他7株枯草芽抱杆菌同属于枯草芽抱杆菌复合种运 一分支，其中与甲基营养型芽抱杆菌(Bacillus methylotrophicus)的亲缘关系最接近（图 1)。结合该菌的生物学习性与生理生化特性，将HYEB5-6鉴定为甲基营养型芽抱杆菌 (Bacillus methylotrophicus)。
[0015] 有益效果:本发明与现有技术相比，具有如下优势：
[0016] 1)甲基营养型芽抱杆菌HY邸5-6为植物内生细菌，与其他从±壤、植株表面分离的 括抗菌相比，能更好地稳定存在于大叶黄杨体内，抑菌作用具有更好的持续性，该菌对大叶 黄杨炭痘菌(C.gloeosporioides)的生长和致病性均具有显著的抑制作用。
[0017] 2)甲基营养型芽抱杆菌肌EB5-6对其他植物病原真菌，如交链抱菌(Alternaria sp.)、金黄壳囊抱菌（C}ftospora chrysosperm)、希金斯刺盘抱菌（Colletotrichum higginsianum)、稻攝病菌(Ma即aporthe oryzae)、丝核菌（lihizoctonia sp.)、屯叶树壳梭 抱(化sicoc州m aes州li)和腐皮镶刀菌属(化sari皿solani)等均具有明显的抑菌作用。
[0018] 3)该菌株对大叶黄杨炭痘病菌等多种植物病原菌具有明显的括抗作用，为进一步 开发W该菌株为核屯、的植物病害生防菌剂提供了基础。
【附图说明】
[0019] 图1是HYEB5-616S rDNA系统进化树图；
[0020] 图2是HYEB5-6对大叶黄杨炭痘病菌菌丝生长的影响结果图；
[0021 ]图3是HYEB5-6对几种植物病原真菌生长的抑制作用结果图；图中，1-7分别为链格 抱菌，金黄色壳囊抱菌，希金斯刺盘抱菌，稻攝病菌，丝核菌，屯叶树壳梭抱菌，腐皮镶刀菌；
[0022]图4是HYEB5-6的代谢产物对大叶黄杨炭痘病菌分生抱子萌发及芽管菌丝生长的 影响结果图；图中，A.HYEB5-6代谢产物对分生抱子萌发的影响，B.HYEB5-6代谢产物对分生 抱子萌发产生的菌丝芽管的影响，C.HYEB5-6代谢产物处理后芽管菌丝膨大球的直径；
[0023] 图5是HYEB5-6的代谢产物对大叶黄杨炭痘病菌附着抱形成及附着膨压的影响结 果图；图中，A.HYEB5-6代谢产物对大叶黄杨炭痘病菌附着抱形成的影响，B.HYEB5-6代谢产 物处理对附着抱膨压的影响。
【具体实施方式】
[0024] 根据下述实施例，可W更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实 施例所描述的仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发 明。
[00巧]实施例1 :HY