高活性的肿瘤抑制剂及其制法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及肿瘤治疗领域，具体地，涉及新的YAP蛋白抑制多肽，用于治疗消化道 肿瘤。
【背景技术】
[0002] 肝癌是全球高发病率的癌症种类之一，特别是在中国，由于病毒性肝炎高发，慢性 病毒性肝炎的主要预后将发展成为肝硬化，以致肝癌。目前的医疗水平还没有掌握任何技 术和方法可以治愈肝癌，最主要的治疗方法是采取外科手术局部切除肿瘤，极少数可以进 行肝脏切除并接受肝脏移植。由于没有办法彻底清除潜在的病灶，接受手术后肝癌的复发 率极高，据统计，3年内的复发率约40 %，七年内超过90 %。
[0003] 近年来，虽然已经开发了各种不同的肿瘤治疗药物和手段，但对于肝癌等恶性肿 瘤，疗效并不理想。
[0004] 因此本领域迫切需要寻找一种有效的治疗消化道肿瘤，尤其是肝癌的方法。
【发明内容】
[0005] 本发明提供了一种创新的消化道肿瘤治疗药物，所述药物为多肽，可极其有效地 抑制YAP蛋白，进而抑制肿瘤。
[0006] 本发明提供了一种YAP蛋白抑制多肽及其用于治疗消化道肿瘤尤其是肝癌的用 途。
[0007] 本发明第一方面，提供了一种分离的多肽，所示的多肽具有式A所示的结构：
[0008] X〇-Y「Y2-Y3-Y4_Y5-Y 6-XA-XE-XF 式 A
[0009] 式中，
[0010] X。或XA为无，或1、2、3或4个氨基酸残基；
[0011] YiSAPJP、或无；
[0012] ，其中Xi选自M、F、C或Hcy;X2为任意氨基酸残基（较佳地乂2为(：、 Hcy、L、M、F);以及 X2aS L、Nle、C、Hcy、K 或 R ;
[0013] ￥3为X 3a-X3_X4,其中X3a为碱性氨基酸R或K ;X 3为任意氨基酸（较佳地X 3为K、R、 Hey、C、Orn或Dab);以及X4为任意氨基酸（较佳地为L、Nle、Hey、C)，且Y 3中至少一个氨 基酸为Hey或C ;
[0014] Y4为 P;
[0015] Υ5为Χ5,且Χ5为任意氨基酸（较佳地Χ5为A、D、或Ε);
[0016] \为s-x 6a-x6,其中1为F、C、或Hey ;和X 6为任意氨基酸残基（较佳地X 6为C、 Hcy、F、K 或 R)
[0017] ￥7为乂7-?-1，其中心为任意氨基酸残基（较佳地乂 7为(：、!1(^、1(、1?或？）；以及父73 为 C、Hey 或 P ;
[0018] XES无或细胞穿透元件；
[0019] XF为无或K ;且所述的多肽具有Yes相关蛋白（Yes-associated protein，YAP)活 性抑制作用。
[0020] 在另一优选例中，所述细胞穿透元件的末端为K(lys)。
[0021] 在另一优选例中，XAS K。
[0022] 在另一优选例中，XE为无且X &为K。
[0023] 在另一优选例中，XA为无且X ￡为K。
[0024] 在另一优选例中，YjP /或Y 3中至少一个氨基酸为Hey或C ;和Y 6或Y 7中至少一 个氨基酸为Hey或C。
[0025] 在另一优选例中，Y2中至少一个氨基酸为Hey或C。
[0026] 在另一优选例中，Y3中的X 33或X 3为Hey或C。
[0027] 在另一优选例中，Y5 (或X5)为Hey或C，或任意氨基酸残基。
[0028] 在另一优选例中，Y6中的X 63或X 6为Hey或C。
[0029] 在另一优选例中，Y7中的X 7或X 73为Hey或C。
[0030] 在另一优选例中，所述的xE为细胞穿透元件。
[0031] 在另一优选例中，所述的X2、X2a、X3、X 3a、X5、X6、X6a、心和X 7a之间任选地形成至 少一对^硫键。
[0032] 在另一优选例中，所述的X2、X2a、X3、X 3a、X5、X6、X6a、心和X 73之间任选地形成1 或2对二硫键。
[0033] 在另一优选例中，所述的二硫键在选自乂1、&、&3、&、& 3的一个氨基酸与选自父5、 X6、X6a、X7和X 7a的一个氨基酸之间形成。
[0034] 在另一优选例中，所述的二硫键位于&和X 6a之间、X 2和X 6之间、X 23和X7之间、 X3，X7之间、X3和X7a之间。
[0035] 在另一优选例中，所述的二硫键位于&与父6之间、父5与父 7之间、父2与父7之间、或 X5与X6之间。
[0036] 本发明第二方面，提供了一种分离的多肽，所述的多肽具有式V所示的结构：
[0037] X〇_Z_XA_XE _XF (V)
[0038] 式中，
[0039] X。或ΧΑ为无，或1、2、3或4个氨基酸残基；
[0040] xES无或细胞穿透元件；
[0041] xF为无或 K;
[0042] Z为具有引入的链内二硫键的YAP抑制多肽，
[0043] 并且所述Z中去除所述链内二硫键所对应的氨基酸之后具有式Va所示的基本序 列：
[0044] Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-Z11-Z12-Z13-Z14-Z15-Z16
[0045] 式 Va
[0046] 式中，
[0047] Z1 为 V、A 或无；
[0048] Z2 为 P、A 或无；
[0049] Z3为M、F、L或氯苯丙氨酸；
[0050] Z4 为 R、K、A 或无；
[0051] Z5 为 L、Nle、A 或无；
[0052] Z6 为 R、或 K;
[0053] Ζ7 为 K、R、0rn、Dab、或 A;
[0054] Z8 为 L、或 Nle;
[0055] Z9 为 P ;
[0056] Z10为任意天然或非天然氨基酸，优选D、A、V、L、I或E ;
[0057] Zll 为 S、或 T;
[0058] Z12为F、L、或氯苯丙氨酸；
[0059] Z13为F、L、氯苯丙氨酸、或无；
[0060] Z14 为 K、R、A 或无；
[0061] Z15 为 P、A 或无；
[0062] Z16 为 P、A 或无；
[0063] 其中，所述的二硫键的第一氨基酸B1位于所述基本序列中Z1至Z8所构成的第一 区段中任意两个氨基酸之间或位于所述第一区段的第一个氨基酸之前，而二硫键的第二氨 基酸B2位于所述基本序列中Z9至Z16所构成的第二区段中任意两个氨基酸之间或位于所 述第二区段的最后一个氨基酸之后。
[0064] 在另一优选例中，Z4和Z5不同时为无。
[0065] 在另一优选例中，第一氨基酸B1位于Z2和Z3之间、Z3和Z4之间、Z3和Z5之间 (此时Z4为无）、Z4和Z5之间、Z7和Z8之间；和/或
[0066] 第二氨基酸B2位于Z11和Z12之间、Z12和Z13之间、Z13和Z14之间、Z14之后 (此时Z15和Z16为无）、Z15之后（此时Z16为无）、Z16之后。
[0067] 在另一优选例中，所述式Va中Z3至Z13所示序列与SEQ ID NO. : 1中第3 - 13 位所示的序列相差不超过1、2、3、4、5个氨基酸，较佳地，不超过3、4个氨基酸。
[0068] 注：SEQ ID NO. : 1中第3-13位或对应于的Z3至Z13所构成的序列为核心序列。
[0069] 在另一优选例中，第一氨基酸B1和第二氨基酸B2之间间隔3-14个（较佳地4-12 个，更佳地4-10个，最佳地7、8、或9个）氨基酸。
[0070] 在另一优选例，所述的第一氨基酸B1和第二氨基酸B2各自独立地选自Hey或C。
[0071] 在另一优选例中，一个或多个选自Z1、Z2、Z14_Z16的氨基酸为无。
[0072] 在另一优选例中，所述的任意氨基酸包括天然或非天然氨基酸。
[0073] 在另一优选例中，所述二硫键之间的间隔距离为4、5、6、7、8、9、或10个氨基酸（不 含形成二硫键的氨基酸）。较佳地，间隔距离为5、6、7、8、或9个氨基酸。
[0074] 在另一优选例中，所述二硫键的数量为1对。
[0075] 在另一优选例中，所述式A或式V多肽含有至少一个非天然氨基酸。
[0076] 在另一优选例中，所述式A或式V多肽与SEQ ID No. :1的相同性（或同源 性）彡 50%，彡 60%，彡 70%，彡 80%，彡 90%。
[0077] 在另一优选例中，所述式A或式V多肽保留了 SEQ ID No. :1的生物活性的至少 彡 50%，彡 60%，彡 70%，彡 80%，彡 90%、彡 100%，例如 80-500%，较佳地 100-400 %。
[0078] 在另一优选例中，所述的生物活性指的是YAP-TEAD结合抑制活性。
[0079] 在另一优选例中，所述的多肽具有式I所示的结构：
[0080] Xq-VP-X! X2-LRX3-X4-P-X5-SF-X 6-X7-PP-Xa-Xe-XfK I，
[0081] 且所述的多肽满足以下特征：
[0082] (a)X。或XA为无，或1、2、3或4个氨基酸残基；
[0083] (b) Xi选自 Μ 或 F ;
[0084] (c) Χ2、Χ5、Χ6或X 7分别为任意氨基酸残基，且所述的X 2、Χ5、Χ6和X 7之间任选地形 成至少一对二硫键；
[0085] (d) Χ3或X 4为任意氨基酸；和
[0086] (e)X#无或细胞穿透元件；
[0087] &仏为无或1(;
[0088] 且所述的多肽具有Yes相关蛋白（Yes-associated protein，YAP)活性抑制作用。
[0089] 在另一优选例中，在&与X 6形成二硫键和/或在X 5与X 7之间形成二硫键。
[0090] 在另一优选例中，乂3为K或相似氨基酸，较佳地选自K、Orn、或Dab。
[0091] 在另一优选例中，乂4为L或相似氨基酸，较佳地选自L或Nle。
[0092] 在另一优选例中，所述的细胞穿透元件的长度为4-20个氨基酸，较佳地为5-15个 氨基酸。
[0093] 在另一优选例中，所述抑制YAP活性包括抑制YAP与TEAD蛋白结合。
[0094] 在另一优选例中，所述多肽抑制YAP界面3(aa86_100)与TEAD蛋白之间的结合。
[0095] 在另一优选例中，所述的多肽具有式II所示的结构：
[0096] Xo-VP-Xi x2-lrklpdsf-x6-kpp-xa-xe-x f
[0097] 式 II，
[0098] 在另一优选例中，在X2、X5、&和X 7之间形成二硫键的氨基酸残基独立地选自Cys 或 Hey。
[0099] 在另一优选例中，所述的二硫键由Cys-Hcy、Cys-Cys形成。
[0100] 在另一优选例中，所述的Χ2、Χ5、Χ^ 乂7相同或不相同。
[0101] 在另一优选例中，