(6s)-5-甲基四氢叶酸或其盐组合物及其制备和应用
【技术领域】
[0001] 本发明为药物制剂领域，具体涉及一种(6S)-5-甲基四氢叶酸或其盐的组合物和 制备方法，高纯度（6S)-5_甲基四氢叶酸或其盐的固体溶液组合物及其制备方法，以及 (6S)-5-甲基四氢叶酸及其盐的应用。其应用包括使用上述(6S)-5-甲基四氢叶酸或其盐的 组合物或者固体溶液;添加药学上可以接受的还原性物质作为稳定剂，该安全用法提供了 (6S)-5-甲基四氢叶酸制品优良的安全性能。
【背景技术】
[0002] 近年来，5-甲基四氢叶酸及其盐对于人体生理活性的研究越来越多。人们将其作 为人体叶酸的补充剂用于预防和/或治疗神经学上的疾病;联合5_氟尿嘧啶或者甲氨蝶呤 应用于肿瘤治疗；以及应用于病理生理学的血管和心血管疾病;应用于重度抑郁，重度老年 性痴呆的治疗和辅助治疗等等，展现了良好的应用前景。
[0003] 然而，5-甲基四氢叶酸或其盐非常不稳定，极易降解，特别是对氧和水分高度敏 感。因此5-甲基四氢叶酸或其盐的组合物例如药物制剂普遍存在稳定性较差，容易变色，色 泽加深、含量明显下降，降解产物增加的问题。
[0004] 关于5-甲基四氢叶酸或者其活性单一异构体(6S)-5_甲基四氢叶酸的氧化降解， 已有很多论文涉及。不幸的是，根据本发明人的一项研究，之前很多关于5-甲基四氢叶酸初 级氧化产物的论述是片面甚至是错误的。这些结论误导人们降低了对5-甲基四氢叶酸质量 的要求。按照Ratanasthien K等人在Serum folates in man中（Ratanasthien K.，Blair J.A.,Leeming R.J.,Cooke ff.T.and Melikian V.(1977)..J.Clin.Path.30:438-448)； Blair J.A等人在Autoxidation of 5-Methyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid(Blair J.A.,Pearson A.J.and Robb A.J.(1975)..J.C.S.Perkin II,p.18-21.)中；欧洲食品安 全局在Opinion of the Scientific Panel on Food Additives,Flavourings, Processing Aids and Materials in Contact with Food on a request from the Commission related to Calcium L-Methylfolate Question(The EFSA Journal (2004) 135,1-20)的论述，5-甲基四氢叶酸在氧化剂作用下首先氧化为5-甲基二氢叶酸。
[0006] 在其它文献中，初级氧化产物被定性为4-羟基-5-甲基四氢叶酸。人们根据结构推 断这个产物是没有毒副作用的。
[0007] 发明人开发出高效的方法，首先制备出了高纯度5-甲基四氢叶酸初级氧化产物， 并进行了一系列研究(PCT/CN2013/073959)，结果发现：出乎意料的，5-甲基四氢叶酸或其 盐类的初级氧化产物为JK12A，结构式如下：
[0009] JK12A是指5-甲基四氢叶酸的初氧化产物，本发明的检测条件下，依具体条件的差 异，其和主峰的相对保留时间在0.36左右，相关文献中被称为5-甲基-二氢叶酸或者4-羟 基-5-甲基-四氢叶酸。
[0010] 这是一个全新结构的产物.这个发现推翻了之前的，包含上述文献中的结论。一般 说来，结构上的较大变化，将会引起生理活性的较大变化。随后的研究发现，JK12A对T淋巴 细胞增殖具有显著的抑制作用。一般认为，这将引起人类免疫力的降低。
[0013]对JK12A的一项急性毒性研究发现，在2000晕克每公斤的剂量下，受试小白鼠在1 分钟内均当场死亡，但解剖发现肝脏肾脏没有显著变化，可能该化合物有其他毒性靶标，且 急性毒性显著。
[0014]发明人的研究发现，5-甲基四氢蝶酸是5-甲基四氢叶酸产物中的另外一个常见杂 质，类似于JK12A的形成，该杂质经氧化后变成了如下结构的JK1303:
[0016] 随后的研究发现JK1303有严重的肾脏毒性。对小鼠按照1000毫克/公斤剂量进行 单次给药给予JK1303，14天后小鼠肾小管严重坏死，解剖发现其肾小管出现大量空泡。5-甲 基四氢蝶酸的初级氧化产物的毒性同样发生了非常显著的变化。
[0017] 以上的实验表明，在包含5-甲基四氢叶酸及其盐的产品中，由5-甲基四氢叶酸及 其盐氧化降解产生的杂质JK12A，5-甲基蝶酸的氧化产物JK1303对人体都是显著有害的，不 能够也不应该被忽视。因此开发5-甲基四氢叶酸或其盐的安全可靠的应用方案，非常必要。
[0018] 专利CN102612358公布了一种包含5-甲基四氢叶酸盐稳定颗粒剂，通过将结晶5-甲基四氢叶酸盐用蜡包埋以增加其稳定性。
[0019] 专利CN102813656公布了一种包含5-甲基四氢叶酸盐稳定组合物，包含一种或者 多种不含巯基的氨基酸以增加稳定性。
[0020] 专利US6441168公布了通过将5-甲基四氢叶酸钙制备成某一晶型来显著增强其稳 定性。但是该晶型颗粒度比较大，溶解缓慢，在制剂生产过程中往往需要先碾磨，这往往也 会增大5-甲基四氢叶酸被氧化的风险。
[0021 ] 专利CN2012086794公布了一种(6S)-5-甲基四氢叶酸钙的新晶型，该晶型一方面 化学稳定性良好，同时溶解性能也有显著提高，从而在制剂过程中不需要碾磨。然而JK12A 等杂质含量仍然较高，且随着时间推移这些杂质的量也逐渐增加。
[0022]还有文献报道，用纤维素、虫胶等材料制备微胶囊包埋5-甲基四氢叶酸，以提高制 剂产品中活性成分-5-甲基四氢叶酸的稳定性。
[0023]然而，所有这些措施仍然不能把JK12A控制到足够安全的水平。经实验检测，目前 市售的5-甲基四氢叶酸原料药级产品中，结晶形态的5-甲基四氢叶酸总杂质一般在1-4%， JK12A达到0.3-3.0% ;市售无定形产品中，总杂质甚至高达10%以上，严重威胁到人们的用 药安全，这些事实表明，当前所有这些原料药产品中包含的JK12A在内的杂质没有被正确对 待。高度的化学不稳定性，也使得应用中难以精确控制剂量。比如，在〇. 451毫克这个常见剂 量下，不稳定使得实际剂量很容易出现较大偏差。
【发明内容】
[0024] 本发明的目的是在现在技术的基础上，提供一种含有高纯度(6S)-5_甲基四氢叶 酸或其盐的组合物及其制备方法。
[0025] 本发明的另一目的是提供一种含有(6S)-5_甲基四氢叶酸或其盐和稳定剂的固体 溶液及其制备方法。
[0026] 本发明第三个目的是提供一种含有高纯度(6S)-5_甲基四氢叶酸或其盐或者含有 上述固体溶液的药物组合物。
[0027] 本发明第四个目的是提供高纯度(6S)-5_甲基四氢叶酸或其盐或者含有(6S)-5-甲基四氢叶酸或其盐和稳定剂的固体溶液在医药方面的用途。
[0028] 本发明的目的可以通过以下措施达到：
[0029] -种含有(6S)-5_甲基四氢叶酸或其盐的组合物，该组合物中（6S)-5_甲基四氢叶 酸或其盐的含量不小于98.0%，其中相关杂质JK12A的含量不大于0.1 %，5_甲基四氢蝶酸 不得检出；
[0031] 本发明的含有(6S)-5_甲基四氢叶酸或其盐的组合物中的主要物质为(6S)-5_甲 基四氢叶酸或其盐。该组合物中（6S)-5-甲基四氢叶酸或其盐的含量为(6S)-5-甲基四氢叶 酸或其盐的质量含量或HPLC含量，一般为质量含量。
[0032] 在一种方案中，该组合物中（6S)-5_甲基四氢叶酸或其盐的含量不小于99.0%，其 中相关杂质JK12A的含量不大于0.1 %，5-甲基四氢蝶酸不得检出。
[0033] 在另一种方案中，该组合物中（6S)-5_甲基四氢叶酸或其盐的含量不小于99.5%， 其中相关杂质JK12A的含量不大于0.1%，5_甲基四氢蝶酸不得检出。
[0034] 在另一种方案中，该组合物中（6S)-5_甲基四氢叶酸或其盐的含量不小于99.8%， 其中相关杂质JK12A的含量不大于0.05%，5_甲基四氢蝶酸不得检出。
[0035] 本发明中的（6S)-5_甲基四氢叶酸盐选自钾盐、钠盐、钙盐、镁盐、钡盐、锌盐、D-葡 糖胺盐、D-半乳糖胺盐或精氨酸盐，优选钙盐、D-葡糖胺盐、D-半乳糖胺盐或精氨酸盐。
[0036 ] -种上述(6S)-5-甲基四氢叶酸或其盐的组合物的制备方法，其包括方法A或方法 B;其中，
[0037] 方法A为:将(6S) -5-甲基四氢叶酸盐粗品与逆变还原剂在水中于pH值6~8、温度 50~90°C下直接进行反应，或者在超声条件下进行反应，反应后即得到(6S)-5_甲基四氢叶 酸盐组合物；
[0038] 方法B为:将(6S)-5_甲基四氢叶酸粗品、逆变还原剂和相应盐在水中于pH值6~8、 温度50~90°C下进行反应，或者在超声条件下进行反应，反应后即得到(6S)-5-甲基四氢叶 酸盐组合物；
[0039]