一种提高灵芝菌丝体液体发酵的胞内灵芝三萜含量的方法
【技术领域】
[0001 ]本发明属于生物技术领域，更具体地，设及一种提高灵芝菌丝体液体发酵的胞内 灵芝Ξ祗含量的方法。
【背景技术】
[0002] 灵芝(Ganoderma lucidum)是担子菌纲、多孔菌科、灵芝属大型药用真菌，在我国 已有数千年的应用历史。现代科学已经证实灵芝的化学成分有多糖类、Ξ祗类、核巧类、酱 醇类、生物碱类、巧喃类、氨基酸类等，其中最重要的药用成分是灵芝Ξ祗类，具有抗肿瘤、 保肝、调节免疫力、降血糖等作用。提高灵芝Ξ祗含量对于灵芝的广泛应用具有重要作用。
[0003] 目前研究表明，莱莉酸甲醋、乙酸、苯己比妥、咪康挫、阿司匹林、铜离子、儘离子等 能够诱导灵芝Ξ祗合成。运些工作为研究灵芝Ξ祗生物合成的调控机制提供了很好的材料 和表型。但是考虑到灵芝作为一种药食同源类中药，如果想要促进其在医学界广泛使用的 话，必须考虑到发酵的安全性和经济性。莱莉酸甲醋作为一种植物激素，因存在健康安全隐 患而尚未被实际应用；苯己比妥和咪康挫是中枢神经抑制药，阿司匹林是一种解热镇痛药， 运些药物可能的残留而对健康人产生不良影响；铜离子和儘离子是重金属，可能引起人体 中毒。因此，有必要开发效果更加理想的发酵方法和条件，提高灵芝在菌丝体阶段Ξ祗类化 合物含量。
【发明内容】
[0004] 针对现有技术的W上缺陷或改进需求，本发明提供了一种提高灵芝菌丝体液体发 酵的胞内灵芝Ξ祗含量的方法，其目的在于通过天然的木材降解物诱导灵芝菌丝体合成灵 芝Ξ祗，从而提高其产量，由此解决现有技术提高灵芝Ξ祗含量可能存在不良残留物的技 术问题。
[0005] 为实现上述目的，按照本发明的一个方面，提供了一种提高灵芝菌丝体液体发酵 的胞内灵芝Ξ祗含量的方法，其特征在于，包括W下步骤：
[0006] 扩大培养阶段，按照质量比例0.01-5 %向培养液中添加木材降解物，培养时间1-6 天。
[0007] 优选地，所述提高灵芝菌丝体液体发酵的胞内灵芝Ξ祗含量的方法，其所述木材 降解物，含有微晶纤维素，其含量占培养液的0.01%至5%。
[000引优选地，所述提高灵芝菌丝体液体发酵的胞内灵芝Ξ祗含量的方法，其所述木材 降解物，含有D-半乳糖，其含量占培养液的0.25%至1 %。
[0009] 优选地，所述提高灵芝菌丝体液体发酵的胞内灵芝Ξ祗含量的方法，其所述扩大 培养阶段为灵芝液体菌种培养开始24至72小时后。
[0010] 优选地，所述提高灵芝菌丝体液体发酵的胞内灵芝Ξ祗含量的方法，其所述灵芝 液体菌种培养所用的培养基包括:葡萄糖35克/升，蛋白腺5克/升，酵母粉5克/升，憐酸二氨 钟0.883克/升，屯水合硫酸儀0.5克/升，维生素 B1 0.05克/升。
[0011] 优选地，所述提高灵芝菌丝体液体发酵的胞内灵芝Ξ祗含量的方法，其所述灵芝 液体菌种培养接种量5 % -10 %，培养条件:转速120-15化/min摇瓶培养。
[0012] 优选地，所述提高灵芝菌丝体液体发酵的胞内灵芝Ξ祗含量的方法，其所述灵芝 液体菌种培养接种用种子液按照如下方法获取：
[0013] -级种子培养:按照体积比1:5向灵芝种子培养基中接种灵芝菌丝体，在溫度28-30°C，转速120-15化/min，培养5天获得一级种子液；
[0014] 二级种子培养，按照体积比1:10向灵芝中期培养基中接种一级种子液在溫度28-30°C，转速120-15化/min,培养2天获得所述灵芝液体菌种培养接种用种子液。
[0015] 优选地，所述提高灵芝菌丝体液体发酵的胞内灵芝Ξ祗含量的方法，其所述灵芝 种子培养基含有:葡萄糖35g/L、蛋白腺5g/L、酵母粉2.5g/L、憐酸二氨钟0.883g/L、屯水合 硫酸儀0.5g/L、W及维生素 B1 0.05g/L，pH为5.5;所述灵芝发酵培养基含有:葡萄糖35g/L、 蛋白腺5g/L、酵母粉5g/L、憐酸二氨钟0.883g/L、屯水合硫酸儀0.5g/L、W及维生素 B1 0.05g/L，pK%5.5。。
[0016] 优选地，所述提高灵芝菌丝体液体发酵的胞内灵芝Ξ祗含量的方法，其所述灵芝 种子按照如下方法获得：
[0017] 将灵芝菌种用PDA液体培养基，在溫度28-30°C且转速120-15化/min下，活化7天， 获得所述灵芝种子，所述PDA液体培养基每升含有：马铃馨浸提液1L、葡萄糖20g、W及琼脂 15邑。
[0018] 总体而言，通过本发明所构思的W上技术方案与现有技术相比，能够取得下列有 益效果：
[0019] 本发明的目的是提供一种提高灵芝菌丝体液体发酵的胞内灵芝Ξ祗含量的方法， 在灵芝菌丝体液体发酵时添加微晶纤维素来诱导灵芝产生更多的胞内灵芝Ξ祗。所使用的 诱导剂微晶纤维素安全并且价格低廉，可显著提高胞内灵芝Ξ祗的含量。
【附图说明】
[0020] 图1是本发明实施例1的测定结果；
[0021] 图2是本发明实施例2的测定结果；
[0022] 图3是本发明实施例3的测定结果；
[0023] 图4是本发明实施例4的测定结果；
[0024] 图5是本发明实施例5的测定结果；
[0025] 图6是本发明实施例6的测定结果；
[0026] 图7是本发明实施例7的测定结果。
【具体实施方式】
[0027] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，W下结合附图及实施例，对 本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用W解释本发明，并 不用于限定本发明。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所设及到的技术特征只要 彼此之间未构成冲突就可W相互组合。
[0028] 本发明提供的提高灵芝菌丝体液体发酵的胞内灵芝Ξ祗含量的方法，包括W下步 骤：
[00巧](1)种子活化:将灵芝菌种用PDA液体培养基在溫度28-30°C且转速120-15化/min 下，活化7天，获得所述灵芝种子。所述PDA液体培养基，每升含有：马铃馨浸提液1L、葡萄糖 20邑、^及琼脂15邑。
[0030] (2)-级种子培养:按照体积比1:5向灵芝种子培养基中接种灵芝菌丝体，在溫度 28-30°C，转速120-15化/min,培养5天获得一级种子液。所述灵芝种子培养基含有:葡萄糖 35g/L、蛋白腺5g/L、酵母粉2.5g/L、憐酸二氨钟0.883g/L、屯水合硫酸儀0.5g/L、W及维生 素 B1 0.05g/L。
[0031] (3)二级种子培养，按照体积比1:10向灵芝中期培养基中接种一级种子液在溫度 28-30°C，转速120-15化/min,培养2天获得所述灵芝液体菌种培养接种用种子液。所述灵芝 中期培养基含有:葡萄糖35g/L、蛋白腺5g/L、酵母粉2.5g/L、憐酸二氨钟0.883g/L、屯水合 硫酸儀〇.5g/L、W及维生素 B1 0.05g/L。
[0032] (4)灵芝液体发酵培养：向CYM培养基中接种灵芝液体菌种(3)，接种量5%-10%， 在溫度28-30°C，转速120-15化/min,进行灵芝液体发酵培养发酵，使灵芝菌丝体迅速生长 繁殖。所述CYM培养基的配方为:葡萄糖35克、蛋白腺5克、酵母粉5克、憐酸二氨钟0.883克、 屯水合硫酸儀0.5克、W及维生素 B1 0.05克，用蒸馈水定容至1升，115°C灭菌25-40分钟。
[0033] (5)扩大培养阶段:在灵芝液体菌种培养0至120小时后，按照质量比例0.01-5%向 培养液中添加木材降解物，培养1 -6天。
[0034] 所述木材降解物，含有W下成分中至少一种：
[0035] 微晶纤维素，其含量占培养液的0.5%至3.5% ;D-半乳糖，其含量占培养液的 0.25%至1%;0-鼠李糖，0.01%-1%。
[0036] 优选地，按照质量比例2 %向培养液中添加乳化剂，如%的吐溫-20，可有效提 高最终灵芝菌丝体液体发酵的胞内灵芝Ξ祗含量。
[0037] W下为实施