一种原鲁烷型倍半萜类化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及从香鳞毛蕨的干燥全草中分离得到的一种具 有治疗前列腺癌作用的原鲁烷型倍半萜类化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 香鳞毛蕨Dryopteris fragrans(L. )Schott.是一种野生多年生蕨类植物，系鳞毛 蕨科鳞毛蕨属。其生境极其特殊，生于海拔700-2400米的林下或高寒地区的滑石坡、森林中 的碎石坡上和火山周围的岩浆缝隙中。主要分布于黑龙江省五大连池地质公园内、塔河县 白卡兽山、呼中的大白山的高山地带及小兴安岭北部地区。其中尤以生长于五大连池的香 鳞毛蕨活性最强。民间流传香鳞毛蕨对银肩病、头皮炎、干癣、痤疮等多种皮肤病有良好的 治疗效果。
[0003] 香鳞毛蕨的化学成分主要有间苯三酚类、黄酮类以及萜类等，具有多种药理作用， 是一种药用价值很高的植物。间苯三酚类不仅是鱗毛蕨属植物的主要特征性化学成分，也 是产生药理活性的主要成分。该类化合物主要由各种脂肪链取代的绵马酸片断和绵马酚片 断通过亚甲基连接而成。芳香环上的c-或〇-被不同的取代基取代形成了不同的化合物。黄 酮类化合物发现的数量不多，代表性的有4种，分别为(^38 8；[1'111201]1〇81(10八、13、(]和 sutchuenos ide A。砲类化合物，包括倍半砲和三砲类。
[0004] 在黑龙江省北部的居民用香鳞毛蕨的水提取液涂擦患处治疗牛皮癣、皮疹、皮炎、 痤疮等，有的居民还用其水提取液洗头达到去头肩、止痒的目的。民间验方利用香鳞毛蕨已 有几十年的历史，通过多年的人体试验，证实香鳞毛蕨对老年性皮肤瘙痒、各种皮肤病的治 疗效果显著。现代药理研究表明香鳞毛蕨具有抗皮肤癣菌作用、治疗银肩病的作用、治疗痤 疮作用、止痒及抗过敏作用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从香鳞毛蕨的干燥全草中分离得到的一种具有治疗前 列腺癌作用的原鲁烷型倍半萜类化合物及其制备方法。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物(I)，
[0009]所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将香鳞毛蕨的干燥全草粉 碎，用75~85%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水 饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a) 中乙酸乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱8个柱体积，再用75%乙醇洗脱10个 柱体积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏；（c)步骤(b)中75%乙醇洗 脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为75:1、45 :1、20:1、12:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脱得到5个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1、 12:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键 合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集10~12个柱体积 洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)。
[0010]进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0011] 进一步地，所述用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为80%。
[0012] -种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I)和药学上可接受的载 体。
[0013] 所述的化合物(I)在制备治疗前列腺癌的药物中的应用。
[0014] 所述的药物组合物在制备治疗前列腺癌的药物中的应用。
[0015] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0016] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、对 人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等;用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0018] 图1为化合物(I)结构式；
[0019] 图2为化合物（I)理论ECD值与实验ECD值比较；
[0020] 图3为不同浓度化合物（I)作用72h后PC3和DU145存活率；
[0021] 图4为10.0 mg/L化合物（I)作用不同时间后PC3和DU145存活率。
【具体实施方式】
[0022] 下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0023]实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0024] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0025]制备方法：（a)将香鳞毛蕨的干燥全草（10kg)粉碎，用80 %乙醇热回流提取(25L X 3次），合并提取液，浓缩至无醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯（3LX3次)和水 饱和的正丁醇(3LX3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(431g)和正丁醇萃 取物；（b)步骤(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱8个柱体 积，再用75%乙醇洗脱10个柱体积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏 (157g);(c)步骤(b)中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为75:1(8个柱体 积）、45:1 (8个柱体积）、20:1 (8个柱体积）、12 :1 (8个柱体积）和1:1 (5个柱体积）的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤(c)中组分4(49g)用正相硅胶进一步分离，依次用 体积比为20:1(8个柱体积）、12:1(10个柱体积)和5:1(8个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2(25g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百 分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集10-12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯 的化合物（I)(35mg)。
[0026] 结构确证：白色粉末;HR-ESMS显示[M+Na]+为m/z 273.1520，结合核磁特征可得 分子式为Ci5H22〇3，不饱和度为5。核磁共振氢谱数据δΗ( ΡΡπι，DMS〇-d6，500MHz):H-1 (1 · 31， ddd，J = 8.3,8.3，10.7)，H-l(2.16，ddd，J = 4.4,9.2，10.7)，H-2(1.60，m)，H-2(1.72，m)，H-2a(l .86，m)，H-3(1.86，m)，H-4(3.96，dd，J = 5.1，9·9)，H-4a(2.18，ddd，J = 4.8,9.9， ll.l)，H-5(1.29，br，dd，J = 4.8，12.2)，H-5(1.82，ddd，J = 3.4，ll.l，12.2)，H-8(0.87，d，J = 7.0)，H-9(1.20，s)，H-10(3.41，d，J = 6.4)，H-10(3.49，dd，J = 3.4,6.4)，H-ll(0.97，s); 核磁共振碳谱数据知化口111，0150-(16，1251抱）：28.5(〇12，1-(：)，22.6((：!12,2-〇,50.7(〇1，2&-C)，37.8(CH，3-C)，73.6(CH，4-C)，42.1(CH，4a-C)，37.5(CH2,5-C)，53.8(C，6-C)，205.5(C， 7-C)，116.7(C，7a-C)，41.1(C，7b-C)，14.2(CH3,8-C)，19.1(CH 3,9-C)，76.7(CH2，10-C)， 25.1(013，11-〇;碳原子标记参见图1。1!1-匪1?谱显示三个甲基信号[6!10.87((1，1 = 7.0抱，!1- 8)，0.97(8，!1-11)和1.20(8，!1-9)]，一个含氧亚甲基信号[3!13.41((1，了 = 6.4抱，!1-10)，3.49 (dd，J = 3.4,6.4HZ，H-10)]</3C NMR谱显示15个碳信号，包括三个甲基，四个亚甲基(一个含 氧亚甲基），四个次甲基(一个含氧次甲基），以及四个季碳(一个羰基季碳，一个含氧季碳）。 HMBC谱中，Me-8 (δΗΟ · 87)与C-4 (SC73 · 6)，以及H-4 (δΗ3 · 96)与C-4a(SC42 · 1)和C-5 (SC37 · 5) 的相关性可知C-4位连有一个羟基。HMBC谱中，甲基信号Me-9(δΗΙ. 20)与亚甲基C-5，季碳〇 6(SC53.8)，含氧亚甲基C-10(SC76.7)和羰基C-7(SC205.5)的相关性表明C-6位连有一个甲 基。通过HMBC谱中含氧亚甲基质子信号(H 2-10)与含氧季碳(C-7a)的相关性可知C-10和C-7a通过醚桥连接。R0ESY谱中，H-4与Η-5(δΗ1.82)的相关性表明H-4为β构型，则C-4位羟基为 α构型。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和ROESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该 化合物如图1所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致(图2)。 [0027]实施例2:化合物（I)药理作用试验 [0028] 一、材料和仪器
[0029] 前列腺癌细胞株PC3(ArCC-CRL-1435)、前列腺癌细胞株DU145(ATCC-HTB-81)。化 合物⑴自制，HPLC归一化纯度大于98%，用二甲基亚矾(DMS0)配制成浓度为1.0g/L的储存 液备用。CCK-8试剂盒为日本同仁化学研究所产品。RPMI-1640培养基购自Gibco公司。胎牛 血清(FBS)购自Hyelone公司。青/链霉素为上海先锋药业产品。胰蛋白酶购自华美生物工程 公司。二甲基亚砜(DMS0)购自上海华舜生物工程公司。琼脂(Agarose)、二硫苏糖醇(DTT)、 苯甲基磺酞氟(PMSF)、四甲基乙二胺(TEMED)为Sigma公司产品。十二烷基磺酸钠(SDs)、三 氯甲基烷基甲烧(1'1^8)1'1^8-!1(31、1'1'；[1：01^-100为?1'0111683公司产品。丙稀酞胺、过硫酸