方法
【专利说明】方法
[0001] 本发明涉及一种鉴定化合物的方法，所述化合物与编码一种或多种参与检测和感 知脂肪酸的受体的一种或多种多肽结合或调节所述多肽活性。
[0002] 众所周知许多猫伴侣动物和犬伴侣动物挑剔它们的食物。动物将经常拒吃它已经 吃过一段时间的食料(foodstuff)，或拒绝吃任何超过最低量的食料。部分这种现象可能受 原料感官概况的微妙差异驱使。这些差异可能无法由人类消费者感知，但是归因于嗅觉系 统和味觉系统的差异，猫伴侣动物和犬伴侣动物可以充分觉察这些差异。这些感官差异可 以归因于所用原料的自然变异或当物料供应短缺并且不得不用替代品替换时。这可令主人 非常沮丧并且可导致主人感觉动物不快乐并且不享受其食物。如果不消费动物可获得的足 量食物，动物还可能无法摄入其需要量的必需营养素。因此，可以清楚地看到，需要一种方 式以鼓励伴侣动物吃为其提供的食料。已经提出许多解决方案以克服这个问题。大部分市 售宠物食物以一系列不同的风味和/或质地提供。但是，伴侣动物主人将知道，伴侣动物经 常会由于不明原因突然拒绝主人觉得是动物最偏好的风味。通过向伴侣动物提供不同食料 的选择，已经对伴侣动物的风味偏好性进行了大量研究。
[0003] 哺乳动物中的味觉感知受动物舌头的味蕾上的味觉受体(taste receptor)控制 并且通常认为涉及5种味觉感知;咸味、甜味、苦味、酸味和鲜味。食物的口味由哪种受体受 到刺激决定。虽然一些味觉受体在物种之间有同源性，每种受体类型的普遍程度、频率和活 性取决于物种，因为如所预计那样，食草动物将需要不同于食肉动物的口味刺激。猫和犬味 觉受体与人味觉受体有一些同源性，尽管，如已知那样，猫科动物和犬科动物中的不同受体 具有与人类中不同的激活和/或偏好性水平。
[0004]通常认为对食物中脂肪的感知已经归因于口感并且在一定程度归因于嗅觉。但 是，在人类和啮齿类领域，最近已经鉴定脂肪酸味觉受体(卡尔托尼（Cartoni)等人，2010; 加林多(Galindo)等人，2012;马丁(Martin)等人,2011)，这表明味觉反应还参与脂肪感知 和检测。
[0005] 预测GPR120(也称作6?1?129、03?六1?1、？61?4、？?六1?4)是6蛋白偶联的细胞表面受体， 含有参与检测特定脂肪酸的7个跨膜结构域(transmembrane domain)(以及胞外部分)和参 与信号转导的G蛋白结合的胞内部分。认为GPR120结合游离形式的中链至长链脂肪酸，如油 酸和亚油酸。已经预测在人类中结肠内分泌细胞上存在GP120受体的两种同工型（isoform) (剪接变体)GPR120L和GPR120S。已经提出长同工型在感知口味方面没有功能性地发出信 号。
[0006] GPR1 20在多种哺乳动物组织中表达，并且已经已知参与刺激胆囊收缩素 (cholecystokinin，CCK)从STC-1 (肠分泌细胞系)分泌，此外已经报道GPR120对分泌胰高血 糖素样肽（glucogon-1 ike pept ide，GLP-1)具有刺激作用。GPR120还在脑下垂体 (pituitary gland)中表达并且因此已经探索其参与应激调节的可能性。GPR120是不饱和 长链脂肪酸的已知受体并参与GLP-1分泌、胰岛素敏化以及抗炎效应和抗肥胖效应。已经提 出GPR120激动剂或拮抗剂可以用作治疗多种代谢性疾病如糖尿病的潜在疗法。但是，尚待 探索GPR120的潜在适口性增强作用。
[0007] EP1688138A1 (武田制药有限公司（Takeda Pharmaceutical Company Limited)) 是涉及调节人衍生性14273受体(GPR120受体)功能的特异性作用剂的欧洲专利申请。该文 献描述了刺激GPR120的低分子量合成激动剂或拮抗剂。这些物质据称可用于治疗暴食、糖 尿病或肥胖症。描述了能够抑制GPR120的替代性作用剂及其治疗厌食症的用途。该申请限 于人类和小鼠 GPR120受体并涉及在治疗性背景下化合物的鉴定和用途。
[0008] 专利申请公开W02007/134613(瑞欧-科学公司（Rheo-Science A/S))涉及多种哺 乳动物组织中的GPR120受体表达。该申请提出化合物用于调节GPR120的表达以治疗、缓解、 预防或诊断人类中糖尿病和/或肥胖症的用途，即治疗性应用。
[0009] 欧洲专利申请EP1932920A1 (卫材研究与开发管理有限公司（Eisai R&D Management Co Ltd))公开了一种用于确定某物质是否改变人GPR120介导的细胞刺激活性 以用于治疗性应用的方法。
[0010] 专利申请公开W02011/159297A1(麦他波勒克斯公司（Metabolex Inc))描述了人 和大鼠的GPR120激动剂以及它们治疗代谢性疾病(包括糖尿病和与血糖控制不良相关的疾 病）的用途。该申请描述了将GPR120激动剂施用至小鼠以确定对胰岛素、胰高血糖素样肽1 和多种其他激素分泌的影响。显示GPR120激动剂可以在小鼠中响应于腹内葡萄糖负荷而降 低血糖。
[0011] 巴拉特?希姆普卡德（Bharat Shimpukade)等人（药物化学杂志（Journal of Medicinal Chemistry)，专利和选择的GPR120激动剂的发现(Discovery of a Patent and Selective GPR120Agonist)，2012年5月 10 日；59(9) :4511-4515)公开了一种用于治疗性用 途的人GPR120激动剂。
[0012] 孙启（Qi Sun)等人（分子药理学(Molecular Pharmacology)，基于对接模拟的 GPR120激动剂的结构-活性关系（Structure-Activity Relationships of GPR120Agonists Based on a Docking Simulation)，2010年 11 月；78(5) :804-810)描述了 用于治疗目的人GPR120激动剂。
[0013] 原高史（Takafumi Hara)等人（纽宁-斯密特博格药理学文献(Naunyn-Schmied Arch Pharmacol )，游离脂肪酸受体GPR120和GPR40的新型选择配体(Novel Selective Ligands for Free Fatty Acid Receptors GPR120and GPR40)，2009年9月；380(3):247-255)尝试鉴定人GPR120受体的新治疗性配体。但是，这些作者仅能够鉴定部分激动剂。
[0014] 铃木孝义（Takayoshi Suzuki)等人（药物化学杂志（Journal of Medicinal C h e m i s t r y )，源自P P A R y激动剂的G蛋白偶联受体1 2 0 -选择性激动剂的鉴定 (Identification of G Protein-Coupled Receptor 12〇-Selective Agonists Derived from PPARy Agonists)，2008年 12月 11 日；51 (23): 7640-7644)描述了发现GPR120选择性激 动剂的需求，原因是这些选择性激动剂可以作为治疗剂使用。
[0015] CD36 (还称作FAT、GP3B、GP4、GPIV、SCARB3、血小板反应蛋白受体）不属于G蛋白偶 联受体家族(它属于B类清除受体家族），参照人类中其他已知的脂肪酸味觉受体，这不同寻 常。
[0016] 已知家养猫科动物挑剔食物，并且许多主人觉察到猫将在特定的日子仅吃某些食 料。因此，确保猫充分响应于特定食料的能力确保食料总是得到动物接受，并且还确保主人 感觉到动物快乐和健康。
[0017] 犬科动物也可能挑剔，或在某些动物的情况下，在食物选择方面不加区分。通过改 善食料的味觉感知，可以鼓励犬科动物更可靠和更一致地吃特定食料。
[0018] 目前，通过喂食试验鉴定猫和犬对口味刺激的偏好性，就成本、时间和结果而言， 所述喂食试验可能无效率。另外，鉴定新口味刺激是困难的，因为许多化合物可能需要使用 动物偏好性试验测试并处理，以确定哪种化合物可以可靠地吸引猫科动物和犬科动物。相 对大量的每种测试化合物对这类方法是必需的。
[0019] 因此，需要可靠、更高效的筛选方法以鉴定可以结合于并刺激(或其他调节)动物、 尤其是犬科动物和猫科动物中某些味觉受体的口味化合物。
[0020] 因此，在一个方面，本发明提供一种用于鉴定与多肽结合和/或调节所述多肽活性 的化合物的方法，所述多肽包含；
[0021 ] (i)猫或犬GPR120或者猫或犬CD36受体的序列；
[0022] (ii)如SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:7中所述的氨基酸序 列；
[0023] (iii)与SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO:3具有至少90%同一性的氨基酸序列；
[0024] (iv)与SEQ ID N0:5或SEQ ID N0:7具有至少90%同一性的氨基酸序列；