多西紫杉醇维瑞肽偶合物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物医药领域，涉及多西紫杉醇的多肽偶合物及其制备方法，具体涉 及多西紫杉醇维瑞肽偶合物及其制备方法和在治疗肿瘤方面的应用。
【背景技术】
[0002] 多西紫杉醇(D〇CetaXel，DTX)是以欧洲红豆杉的针叶萃取物为基础半合成得到的 继紫杉醇后又一新型的抗癌药物。该药物的作用机制是提高微管蛋白聚合作用和抑制微管 解聚作用，阻滞细胞于G和Μ期，从而抑制癌细胞的有丝分裂和增值(F.V.Fossellaetal.， PhaseIIstudyofdocetaxelforadvancedormetastaticplatinum-refractory non-small-celllungcancer.JournalofClinicalOncology，1995，13,645-651) 〇与紫 杉醇相比，在体外抗肿瘤活性实验中，已证实多西紫杉醇的活性是紫杉醇的1.3~12倍 (S.Noguchi,Predictivefactorsforresponsetodocetaxelinhumanbreast cancers·CancerScience，2006，97，813-820)，目前已获得Π)Α批准用于临床上治疗乳腺 癌、卵巢癌、非小细胞肺癌和前列腺癌等。但是多西紫杉醇与普通化药一样，存在选择性低、 毒副作用大、水溶性差的缺点，严重影响了药物药效；由于多西紫杉醇在体内分布广泛，尤 其是在正常器官和组织中有较多的分布，不仅给患者带来了痛苦，更降低了药物生物利用 度。此外，多西紫杉醇在水中的溶解性较差(小于lyg/ml)，极大的影响了药效的发挥，目前 上市的剂型多利用非离子型表面活性剂吐温-80增溶，经13%的乙醇稀释后注射使用。但是 吐温-80具有溶血性且粘度较大，在临床应用中，以发现该制剂具有外周神经毒性和肌肉 骨豁毒性，以及中性粒细胞减少等一系列过敏反应(J.Baker，etal.，Docetaxel_related sideeffectsandtheirmanagement.EuropeanJournalofOncologyNursing,2009, 13,49-59)。因此，解决多西紫杉醇的选择性低、水溶性差等问题，控制该药物释放速率及提 高靶向性，对于提高多西紫杉醇抗癌活性具有重要意义。
[0003]当前，因靶向化疗比全身化疗具有高效低毒的特点，而成为当前癌症治疗的研究 热点，Schally等将阿霉素连接在生长抑素类似物上，合成了偶联药物AN-238,通过多种动 物实验模型发现，AN-238对高表达SSTR的肿瘤组织具有靶向性和毒性，对正常细胞具有低 毒性，甚至在表达相对较低密度SSTR的肿瘤模型中比它们相应的细胞毒素基团更有效且毒 性更低。Moody等将喜树碱偶联在生长素类似物上，通过小细胞肺癌NCI-H69细胞的体外实 验，证实偶联物既保留了与SSTR2(生长抑素受体)高度的亲和力，又保持了其生长抑素类似 物的活性。将化疗药物与生长抑素类似物连接，对于表达SSTR的肿瘤具有广阔的治疗前景 与极高的医学价值。
[0004] 维瑞肽是化学合成的生长抑素的八肽类似物，与SSTR2、SSTR3及SSTR5具有更强的 结合力，选用维瑞肽与化疗药物偶联可以有效实现靶向治疗肿瘤细胞。此外，维瑞肽作为生 长抑素类似物，本身也具有直接和间接的抗肿瘤作用。
[0005]随着多西紫杉醇的临床广泛应用，其在临床显现的不良反应如:骨髓抑制、神经毒 性等越来越明显，可以解决多西紫杉醇水溶性差、选择性低、毒副作用大的缺点，临床亟需 一种新型的靶向抗癌化合物为广大的肿瘤患者减轻了经济与精神负担。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供多西紫杉醇维瑞肽偶合物，所述的多西紫杉醇维瑞肽偶 合物是新型的靶向抗癌药物，从根本上解决了多西紫杉醇选择性低、毒副作用大、水溶性差 等缺点，具有选择性高、水溶性好、毒副作用小、药效高等优异性能。
[0007]本发明的另一目的是提供上述多西紫杉醇维瑞肽偶合物的制备方法。
[0008] 本发明的又一目的是提供上述多西紫杉醇维瑞肽偶合物在制备抗肿瘤药物中的 应用。
[0009] 本发明公开了多西紫杉醇维瑞肽偶合物，所述的偶合物是由多西紫杉醇在2'位羟 基通过链接序列与维瑞肽氨基相连而得。
[0010] 所述的多西紫杉醇的结构式为：
[0012 ] 所述的连接序列为:H00C-(CH2)n-COOH;
[0013]其中，n= 2-12。
[0014]所述小分子多肽维瑞肽的结构式为：
[0016] 所述的多西紫杉醇维瑞肽偶合物为:DTX-1_维瑞肽偶合物、DTX-5-维瑞肽偶合物、 (DTX) 2_维瑞肽偶合物中的一种。
[0017] 进一步，所述的DTX-1-维瑞肽偶合物的结构式为：
[0019]进一步，所述的DTX-5-维瑞肽偶合物的结构式如下：
[0021]进一步，所述的(DTX)2_维瑞肽偶合物的结构式如下：
[0023]本发明还公开了上述多西紫杉醇维瑞肽偶合物的制备方法，所述技术方案如下： [0024] (1)中间体DTX-Linker的化学合成，合成路线如下：
[0026] 具体操作方法如下：
[0027] 1)将多西紫杉醇溶于无水二氯甲烷，加入4-二甲基氨基吡啶(DMAP)，丁二酸酐，在 一定条件下反应一段时间后加入乙酸乙酯，并用盐酸调至PH3-4,反应液依次用水萃取3次、 饱和食盐水萃取1次，最后用无水硫酸钠干燥，过滤后减压回收乙酸乙酯；
[0028] 2)所得残余物用丙酮-乙醚重结晶，即得到目标产物多西紫杉醇_2'_丁二酸酯纯 品（中间体DTX-Linker)。
[0029]上述操作的有益效果是:选用的无水二氯甲烷溶剂为关键性溶剂，该溶剂可以使 多西紫杉醇完全溶解，并促进与丁二酸酐充分的接触，提高反应效率，副产物少。
[0030]进一步，所述的操作方法中，所述的步骤1)中无水二氯甲烷溶剂与4-二甲基氨基 吡啶(DMAP)的体积比范围为（11:1)-(15:1)，其中无水二氯甲烷与DMAP的最佳体积比是12: 1〇
[0031]进一步，所述的操作方法中，所述的步骤1)中反应条件为:反应温度为：（0-10)°C， 转速为：（200-800)r/min，搅拌时间为：（18-36)h，其中反应温度为8°C、转速为450r/min，搅 拌时间为24h为最佳，此反应条件的有益效果是，多西紫杉醇与丁二酸酐的反应更加充分， 目标产物收率高。
[0032] (2)多西紫杉醇维瑞肽偶合物的化学合成
[0033]将DTX-Linker与维瑞肽反应合成不同类型的多西紫杉醇-维瑞肽偶合物即：DTX-1-维瑞肽偶合物、DTX-5-维瑞肽偶合物、（DTX)2-维瑞肽偶合物，整体的工艺路线图见说明 书附图1。
[0034]进一步，所述的DTX-1-维瑞肽偶合物的合成路线如下：
[0036]具体实验操作方法为：
[0037] 1)选用特殊的固相合成树脂，用_Trt基团保护的巯基(-SH)在I2/DIEA条件下可在 固相合成树脂上形成分子内二硫键，用侧链保护的维瑞肽树脂在特定的脱除剂作用下，选 择性脱除N-端的Fmoc-氨基保护基，得到-Lys5-侧链氨基受保护、N-端侧链氨基酸游离的维 瑞肽树脂，并将其置于固相合成反应器中，用无水二氯甲烷浸洗后抽取溶剂并通入干燥氮 气；
[0038] 2)将多西紫杉醇_2'_丁二酸酯(DTX-Linker)溶于无水二氯甲烷，加入特定的高 效偶合试剂，低速搅拌l〇min后，滴入上述通有氮气的固相合成反应器中，在特定条件下反 应一段时间；
[0039] 3)将反应后溶液减压浓缩，将浓缩液依次用二甲基甲酰胺洗涤6次，用二氯甲烷洗 涤5次，用乙醚、石油醚、环己烷、正己烷中的一种或任意比例的混合溶剂洗涤3次，再次减压 浓缩除去多余溶剂即得到DTX-Linker-NH-维瑞肽-固相合成树脂；
[0040] 4)目标产物从固相合成树脂上解离步骤如下：将干燥树脂加入一定的溶剂中，搅 拌1小时后过滤；
[0041] 5)目标产物纯化步骤如下:过滤物再用无水二氯甲烷洗涤过滤，合并上述滤液后 减压浓缩，浓缩物用溶剂萃取，抽滤收集溶剂不溶的固体，干燥后得到纯净的目标产物DTX-1-维瑞肽偶合物。
[0042] 进一步，所述操作方法中，所述步骤1)中N-端氨基保护基脱除剂为吡啶的N，N_二 甲基甲酰溶液，吡啶的质量分数为15%-35 %，其中最佳质量比为20% ;采用上述脱除剂的 有益效果为：在脱除N-端保护基的同时，其它保护基不受影响，确保了目标产物的高效合 成。
[0043]进一步，所述操作方法中，其特征在于:所述的反应步骤1)中的特定脱除剂为P比啶 的N，N-二甲基甲酰溶液，其中吡啶的质量分数为15 % -35 %，以20 %为最佳。
[0044] 进一步，所述操作方法中，所述的步骤2)中溶解DTX-Linker的溶剂二氯甲烷可用 无水二氯乙烷替换，其中无水二氯乙烷与无水二氯甲烷的替换摩尔比为：（1:1)-(3:1);特 定的高效偶合试剂为恥(^、01(：、01(：、0此4按一定比例的混合溶剂，其中￥麗^隱*=(5 :1)-(10:1),Vdic：Vdiea=(3:1)-(8:1)〇
[0045] 进一步，所述操作方法中，所述的步骤2)中反应条件为:反应温度为：（20-35 )°C， 搅拌速度为：（200-800 )r/min，搅拌时间为：（5-30 )min，其中最佳反应条件为:反应温度为 25°C，搅拌速度为540r/min，搅拌时间为lOmin。
[0046] 进一步，所述操作方法中，所述步骤4)中解离溶剂为2%-10%三氟乙酸的二氯甲 烷溶液，其中最佳质量比为5%;所述步骤4)中解离反应条件如下:反应温度为：（20-25)°C， 搅拌速度为：（300-800)r/min，搅拌时间为：（0.8-1.5)h，其中最佳条件为:其中最佳反应条 件为:反应温度23°C，搅拌速度为:450r/min，搅拌时间为：1.Oh，本操作的有益效果是:将目 标产物从树脂上切除，同时避免了目标产物结构遭到破坏，确