间充质干细胞的组合物的利记博彩app
【专利说明】
[0001] 关于联邦资助的研究或开发的陈述
[0002] 本发明在美国国立卫生研究院（National Institutes of Health)授予的合同号 为R01DE017449和R01DE019932的政府支持下做出。美国政府在本发明中具有一定权利。 [0003] 与相关申请的交叉引用
[0004] 本申请基于2013年6月24日提交、代理人案号为028080-0916、题为"间充质细 胞的组合物"（A Composition of Mesenchymal Cells)的美国临时申请号 61/838, 827 并 要求其优先权，所述临时申请的全部内容通过参考并入本文。
技术领域
[0005] 本公开总的来说涉及间充质干细胞疗法。本公开还涉及牙龈来源的间充质干细胞 的分离和应用。更具体来说，本公开涉及神经嵴来源的牙龈间充质干细胞和中胚层来源的 牙龈间充质干细胞的分离和应用。
[0006] 相关技术描述
[0007] 间充质干细胞（MSC)具有多能分化潜力和调节免疫应答的能力。例如，参见 Uccelli等，"健康和疾病中的间充质干细胞"（Mesenchymal stem cells in health and disease) (2008) Nat. Rev. Immunol. 8:726-736 ;Nauta 等，"间充质基质细胞的免疫调节 性质'，（Immunomodulatory properties of mesenchymal stromal cells) (2007)Blood 110:3499-3506 ;以及Aggarwal等，"人类间充质干细胞调节同种异体免疫细胞应答" (Human mesenchymal stem cells modulate allogeneic immune cell responses)(2005)Blood 105:1815 - 1822 ;这些出版物的全部内容通过参考并入本文。已显示由MSC在体外或体内 分化而成的细胞类型包括成骨细胞、软骨细胞、肌细胞、脂肪细胞、内皮细胞和β -胰岛细 胞。
[0008] 间充质干细胞的形态特征在于小的细胞体，并带有几个细长的细胞突。所述细胞 体含有大的圆形核，具有被细分散的染色质颗粒包被的明显的核仁，使核具有透明外观。细 胞体的其余部分含有少量高尔基体、粗面型内质网、线粒体和多核糖体。细长的细胞分布范 围广，邻近的细胞外基质填充有少量网状原纤维，但是不含其它类型的胶原原纤维。
[0009] MSC具有自我更新并同时维持其多能性的极大能力。验证多能性的标准试验是细 胞向成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞以及肌细胞和可能的神经元样细胞的分化。然而，培养 物分化的程度随着个体以及诱导分化的方式例如化学还是机械方式而变。已知细胞增殖和 分化的能力随着供体的年龄以及培养的时间而降低。
[0010] 已揭示，人类MSC可以通过分泌细胞因子而避免同种异体识别，干扰树突状细胞 和T-细胞的功能，并产生局部免疫抑制性微环境。还已揭示，当人类MSC暴露于以存在 γ -干扰素局部水平的升高为特征的炎性环境时，可以增强细胞的免疫调节功能。
[0011] 因此，MSC可用于组织再生和免疫疗法。例如，参见Le Blanc等，"间充质干细胞 用于甾类抗性的严重急性移植物抗宿主病的治疗：11期研究"（Mesenchymal stem cells for treatment of steroid-resistant, severe, acute graft-versus-host disease: a phase II study) (2008)Lancet371:1579-1586 ;Sun 等，"在系统性红斑狼疮小鼠和人类 中间充质干细胞移植逆转多器官功能障碍"（Mesenchymal stem cell transplantation reverses multiorgan dysfunction in systemic lupus erythematosus mice and humans) (2009) Stem Cells 27:1421-1432 ;以及 Akiyama 等，"间充质干细胞诱导的 免疫调节涉及FAS-配体/FAS介导的T细胞凋亡（Mesenchymal-stem-cell-induced immunoregulation involves FAS-Iigand-/FAS-mediated T cell apoptosis) (2012)Cell Stem Celll0:544-555 ;这些出版物的全部内容通过参考并入本文。
[0012] 口面区含有各种独特的MSC群体，包括牙髓干细胞、来自于乳牙牙髓的干细胞、牙 周韧带干细胞、根尖牙乳头干细胞和牙囊干细胞。例如，参见Gronthos等，"体外和体内 的产后人类牙髓干细胞（DPSC) "（Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo) (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:13625-13630 ;Miura 等，"SHED: 来自于人类剥离乳牙的干细胞"（SHED:stem cells from human exfoliated deciduous teeth) (2003) Proc. Natl. Acad. Sci. USAlOO :5807-5812 ;Yamaza 等，"来自于人类剥离乳牙 的干细胞的免疫调节性质"（Immunomodulatory properties of stem cells from human exfoliated deciduous teeth) (2011)Stem Cell Res. Ther. 1:5-14 ;Seo 等，"来自于人类 牙周韧带的多能产后干细胞的调查"（Investigation of multipotent postnatal stem cells from human periodontal ligament) (2004) Lancet 364:149-155 ;以及 Morsczeck 等，"从人类智齿牙囊分离前体细胞（PC) "（Isolation of precursor cel Is (PCs) from human dental follicle of wisdom teeth) (2005)Matrix Biol. 24:155-65;这些出版物的 全部内容通过参考并入本文。
[0013] 最近，分离到牙龈/粘膜来源的间充质干细胞（GMSC)并将其表征为具有多向分 化能力和免疫调节性质。例如，参见Zhang等，"源自于人类牙龈的间充质干细胞能够执 行免疫调节功能并在实验性结肠炎中改善与炎症相关的组织破坏"（Mesenchymal stem cells derived from human gingiva are capable of immunomodulatory functions and ameliorate inflammation-related tissue destruction in experimental colitis) (2009) J. Immunol. 183:7787 - 7798 ;Zhang 等，"人类牙龈来源的间充质干细胞 引起m2巨·细胞的极化并增强皮肤伤口愈合"（Human gingiva-derived mesenchymal stem cells elicit polarization of m2macrophages and enhance cutaneous wound healing) (2010) Stem Cells28:1856-1868 ;Fournier 等，"牙銀结缔组织中的多能祖细 胞"（Multipotent progenitor cells in gingival connective tissue) (2010)Tissue Eng. Part A16:2891-2899 ;Marynka_Kalmani等，"成人口腔粘膜的固有层带有新的干细 胞群体"（The lamina propria of adult human oral mucosa harbors a novel stem cell population) (2010) Stem Cells28:984-995 ;Mitrano 等，"来自于人类牙銀组织的间 充质干细胞的培养和性质研究"（Culture and characterization of mesenchymal stem cells from human gingival tissue) (2010)J.Periodontol 81:917-925 ;Su 等，"人类 牙龈来源的间充质基质细胞通过前列腺素 E(2)依赖性机制减弱接触性超敏反应"（Human gingiva derived mesenchymal stromal cells attenuate contact hypersensitivity via prostaglandin E(2)_dependent mechanisms) (2011)Stem Cells 29:1849-1860;以及 Tang等，"来自于人类正常和增生牙銀的间充质干细胞的性质研究" (Characterization of mesenchymal stem cells from human normal and hyperplastic gingiva)(2011)J Cell Physiol. 226:832-842 ;这些出版物的全部内容通过参考并入本文。
[0014] 牙龈代表了独特的口腔组织，它起到生物粘膜屏障的作用以保护上下颂骨的口腔 侦k牙龈附连到牙槽的牙槽骨。它是口腔粘膜免疫力的独特组分。牙龈和口腔粘膜中的 伤口愈合的特征在于明显减少的炎症，快速的上皮重新形成，以及与皮肤中存在的常见瘢 痕形成相反的胎儿样无瘢痕愈合。例如，参见Irwin等，"牙龈成纤维细胞的胎儿样表型 特征表现中的位点间和位点内不均勾性：对伤口愈合的潜在意义"（Inter-and intrasite heterogeneity in the expression of fetal-like phenotypic characteristics by gingival fibroblasts!potential significance for wound healing)(1994)J. Cell Sci. 107 (Pt5) :1333-1346 ;St印hens等，"皮肤和口腔成纤维细胞表现出细胞外基质重新组 织和基质金属蛋白酶活性的表型差异"(Skin and oral fibroblasts exhibit phenotypic differences in extracellualr matrix reorganization and matrix metalloproteinase activity) (2001)Br. J. Dermatol. 144:229-237 ;这些出版物的全部内容并入本文。牙龈/ 口腔粘膜与皮肤之间的这种伤口愈合差异，可能归因于口腔粘膜/牙龈免疫网络的独特的 致耐受性质。参见，例如Novak等，" 口腔粘膜的免疫赦免"(The immune privilege of the oral mucosa) (2008)Trends Mol.Med. 14:191-198;这些出版物的全部内容通过参考并入 本文。
[0015] 从发育的观点来看，颅面间质源自于神经嵴和中胚层。例如，参见Driskell等，"毛 囊毛乳头细胞一览"（Hair follicle dermal papilla cells at a glance) (2011) J. Cell Sc. i 124:1179-1182 ;该出版物的全部内容通过参考并入本文。
[0016] 从4体节期开始，颅神经嵴细胞（CNCC)向腹外侧迀移，此时它们移居到第一 鳃弓，在颅面区中产生间充质结构例如神经组织、软骨、骨骼和牙齿。参见例如Chai 等，"在牙齿和下颂形态发生期间哺乳动物颜神经嵴的命运"（Fate of the mammalian cranial neural crest during tooth and mandibular morphogenesis) (2000) Developmentl27:1671 - 1679 ;以及Chai 等，"颜面形态发生的最新进展"(Recent advances in craniofacial morphogenesis) (2006)Dev. Dyn. 235:2353 - 2375 ;这些出版物的全部内 容通过参考并入本文。
[0017] 同时，中胚层也参与口面发育。以前的研究显示，来自于口腔粘膜固有层的祖 细胞可能源自于神经嵴细胞。例如，参见Davies等，"多能的神经嵴来源的祖细胞群体 驻留在口腔粘膜固有层内"（A multipotent neural crest-derived progenitor cell population is resident within the oral mucosa lamina propria) (2010)Stem Cells Dev. 19:819-830 ;该出版物的全部内容通过参考并入本文。
[0018] 尽管MSC对大量医学应用保有极大希望，但到目前为止，大多数干细胞疗法是基 于性质明确的源自于骨髓的MSC。鉴于从骨髓提取干细胞是产率有限的困难程序，这对开发 它们的治疗应用设置了极大限制。最近，已调查了脂肪干细胞作为干细胞的潜在来源。然 而，尽管提取脂肪干细胞比骨髓干细胞更容易，但提取方法仍尚不完美，并且得到的干细胞 仅仅适合于有限范围的应用。
[0019] 因此，为了获得新的和/或改进的医学应用，对MSC的其他来源和分离它们的新方 法仍存在需求。
[0020] 发明概述
[0021] 本发明总的来说涉及间充质干细胞（MSC)疗法。本发明还涉及牙龈来源的间充质 干细胞的分离和应用。更具体来说，本发明涉及神经嵴来源的牙龈间充质干细胞的分离和 应用。
[0022] 本发明还涉及一种组合物。该组合物可以包含来自于神经嵴细胞的分离的间充质 干细胞。神经嵴细胞可以是颅神经嵴细胞。神经嵴细胞可以源自于牙龈。例如，所述组合 物可以包含分离的神经嵴来源的牙龈间充质干细胞（N-GMSC)。分离的N-GMSC