Tff2基因作为颅内动脉瘤诊治标志物的用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术领域，具体地涉及人TFF2基因在颅内动脉瘤的诊断、治疗中 的用途。
【背景技术】
[0002] 卢页内动脉瘤（intracranial aneurysm, IA)是卢页内动脉壁向外突出形成的瘤样病 变，是较常见的脑血管疾病之一。人群中颅内动脉瘤的发生率为29% -59%，一旦破裂出 血，致残致死率很高。大宗病例研究表明采用显微外科手术和血管内栓塞治疗均可获得较 满意的效果。如果在IA破裂之前进行有效的预防和处理，患者的总体预后将大大改善。当 前，对颅内动脉瘤的诊断和筛选主要依赖脑血管造影（DSA)和磁共振血管造影（MRA)及CT 血管造影（CTA)。三种方法均存在费用昂贵、假阴性率高的缺点，同时作为金标准的DSA还 是一种有创性检查，难以被普通人群所接受，因此临床上迫切需要改变当前的诊治格局，以 便对IA患者作出早期诊断和筛选，并进行相应的有效处理，最终改善患者的总体预后。
【发明内容】
[0003] 为了弥补现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种可用于颅内动脉瘤早期诊 断的分子标志物。相比传统的颅内动脉瘤的诊断方法，使用基因标志物来诊断颅内动脉瘤 的具有及时性、特异性和灵敏性，从而使患者在疾病早期就能知晓疾病风险，针对风险高 低，采取相应的预防和治疗措施。
[0004] 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0005] 本发明提供了检测TFF2基因表达的产品在制备诊断颅内动脉瘤的工具中的应 用。
[0006] 进一步，所述检测TFF2基因表达的产品包括检测TFF2基因 mRNA水平的产品、和 /或检测TFF2蛋白水平的产品。
[0007] 进一步，所述检测TFF2基因表达的产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检 测、原位杂交或芯片检测TFF2基因及其表达产物的表达水平以诊断颅内动脉瘤的产品。
[0008] 进一步，所述用RT-PCR诊断颅内动脉瘤的产品至少包括一对特异扩增TFF2基因 的引物；所述用实时定量PCR诊断颅内动脉瘤的产品至少包括一对特异扩增TFF2基因的引 物；所述用免疫检测诊断颅内动脉瘤的产品包括：与TFF2蛋白特异性结合的抗体；所述用 原位杂交诊断颅内动脉瘤的产品包括：与TFF2基因的核酸序列杂交的探针；所述用芯片诊 断颅内动脉瘤的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与TFF2蛋白特异性 结合的抗体，基因芯片包括与TFF2基因的核酸序列杂交的探针。
[0009] 所述用实时定量PCR诊断颅内动脉瘤的产品至少包括的一对特异扩增TFF2基因 的引物如SEQ ID NO. 11和SEQ ID NO. 12所示。
[0010] 所述检测TFF2基因表达的产品可以是检测TFF2基因表达的试剂、也可以是包含 所述试剂的试剂盒、芯片、试纸等，也可以是使用所述试剂的高通量测序平台。
[0011] 所述诊断颅内动脉瘤的工具包括但不限于芯片、试剂盒、试纸、或高通量测序平 台；高通量测序平台是一种特殊的诊断颅内动脉瘤的工具，随着高通量测序技术的发展，对 一个人的基因表达谱的构建将成为十分便捷的工作。通过对比疾病患者和正常人群的基因 表达谱，容易分析出哪个基因的异常与疾病相关。因此，在高通量测序中获知TFF2基因的 异常与颅内动脉瘤相关也属于TFF2基因的用途，同样在本发明的保护范围之内。
[0012] 本发明还提供了一种诊断颅内动脉瘤的工具，所述工具包括检测TFF2基因表达 的试剂；所述试剂包括检测TFF2基因 mRNA的引物和/或探针、和/或检测TFF2蛋白的抗 体。
[0013] 所述工具包括但不限于芯片、试剂盒、试纸、或高通量测序平台。
[0014] 其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片；所述基因芯片包括固相载体以及固定 在固相载体的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括用于检测TFF2基因转录水平的针对 TFF2基因的寡核苷酸探针；所述蛋白质芯片包括固相载体以及固定在固相载体的TFF2蛋 白的特异性抗体；所述基因芯片可用于检测包括TFF2基因在内的多个基因（例如，与颅内 动脉瘤相关的多个基因）的表达水平。所述蛋白质芯片可用于检测包括TFF2蛋白在内的 多个蛋白质（例如与颅内动脉瘤相关的多个蛋白质）的表达水平。通过将多个与颅内动脉 瘤的标志物同时检测，可大大提高颅内动脉瘤诊断的准确率。
[0015] 其中，所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒；所述基因检测试 剂盒包括用于检测TFF2基因转录水平的试剂；所述蛋白免疫检测试剂盒包括TFF2蛋白的 特异性抗体。进一步，所述试剂包括使用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片 方法检测TFF2基因表达水平过程中所需的试剂。优选度，所述试剂包括针对TFF2基因的 引物和/或探针。根据TFF2基因的核苷酸序列信息容易设计出可以用于检测TFF2基因表 达水平的引物和探针。
[0016] 所述试纸包括检测TFF2基因表达的试剂。
[0017] 所述高通量测序平台包括检测TFF2基因表达的试剂。
[0018] 与TFF2基因的核酸序列杂交的探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其它 衍生物。所述探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核苷酸序列特异性结合， 任何长度都可以。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样，所述探针 的长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探针长度 对杂交效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最长一 般不超过30个碱基对，与目的核苷酸序列互补的长度以15-25个碱基对最佳。所述探针自 身互补序列最好少于4个碱基对，以免影响杂交效率。
[0019] 进一步，所述TFF2蛋白的特异性抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体。所述TFF2 蛋白的特异性抗体包括完整的抗体分子、抗体的任何片段或修饰（例如，，嵌合抗体、scFv、 Fab、F(ab'）2、Fv等。只要所述片段能够保留与TFF2蛋白的结合能力即可。用于蛋白质 水平的抗体的制备时本领域技术人员公知的，并且本发明可以使用任何方法来制备所述抗 体。
[0020] 在本发明的具体实施方案中，所述检测TFF2基因 mRNA的引物包括SEQ ID NO. 11 和SEQ ID NO. 12所示的引物对。
[0021] 本发明还提供了 TFF2基因和/或其表达产物的促进剂在制备治疗颅内动脉瘤的 药物中的应用。
[0022] 所述促进剂包括促进TFF2基因表达的试剂和促进TFF2基因表达产物的试剂；所 述促进TFF2基因表达的试剂包括促进基因转录的试剂、促进基因翻译的试剂、促进TFF2蛋 白含量的试剂；所述促进TFF2基因表达产物的试剂包括促进TFF2基因表达产物稳定性的 试剂、促进TFF2基因表达产物活性的试剂、促进TFF2基因表达产物功能的试剂。
[0023] 具体地，所述促进TFF2基因表达的试剂包括：含有TFF2基因的试剂、携带TFF2基 因的载体或宿主细胞所形成的试剂、含有TFF2蛋白质的试剂。
[0024] 本发明的促进剂一方面可以用于补充内源性的TFF2蛋白的缺失或不足，通过提 高TFF2蛋白的表达，从而治疗因 TFF2蛋白缺乏导致的颅内动脉瘤。另一方面可以用于促 进TFF2蛋白的活性或者功能，从而治疗颅内动脉瘤。
[0025] 本发明所述携带基因的载体是本领域已知的各种载体，如市售的载体、包括质粒、 粘粒、噬菌体、病毒等。
[0026] 在本发明中，术语"宿主细胞"包括原核细胞和真核细胞。常用的原核宿主细胞的 例子包括大肠杆菌、枯草杆菌等。常用的真核宿主细胞包括酵母细胞、昆虫细胞和哺乳动物 细胞。较佳地，该宿主细胞是真核细胞，如CHO细胞、COS细胞等。
[0027] 本发明还提供了一种用于治疗颅内动脉瘤的药物组合物，所述药物组合物包括上 面所述的TFF2基因和/或其表达产物的促进剂。
[0028] 进一步，本发明的药物还包括药学上可接受的载体，载体，这类载体包括（但并不 限于）：稀释剂、赋形剂如水等、填充剂如淀粉、蔗糖等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明 胶和聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂季铵 化合物；表面活性剂如十六烷醇；吸附载体如高岭土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙 和镁、聚乙二醇等。
[0029] 本发明的药物导入组织或者细胞的方式可以分为体外或者体内的方式。体外方式 包括将含有TFF2基因的药物或者含有TFF2蛋白质的药物导入细胞中，再将细胞移植或回 输到体内。体内方式包括直接将含