一种茶籽糖蛋白及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药领域，具体涉及一种茶籽糖蛋白及其制备方法和该糖蛋白作为抗 疲劳药物的应用。
【背景技术】
[0002] 糖蛋白是一类由糖类和蛋白质或多肽以共价键连接而形成的结合蛋白，具有重要 的生理作用。天然糖蛋白具有调节免疫、抗肿瘤、抗炎、降血糖、降血脂、抗氧化、防衰老等功 效。
[0003] 茶籽中的多糖成分大多以糖蛋白的形式存在。茶籽多糖是由阿拉伯糖、半乳糖、甘 露糖、葡萄糖等多种组成的杂多糖，茶籽蛋白质则含有17种氨基酸，其中8种为人体必需氨 基酸。茶籽多糖的提取方法主要有酸降解法、氧化降解法和酶降解法，但这些方法均破坏了 其中蛋白质活性。茶籽蛋白的提取方法主要有等电点法、离子交换法及超滤法，但这些方法 对蛋白提取率不足50 %，且没有获取多糖组分。
[0004] 疲劳是一种亚健康状态，其发生主要归因于能源物质耗竭、代谢紊乱、体内环境失 调等。糖蛋白不仅能提供运动所需能量，还能够清除自由基，达到抗疲劳的目的。
[0005] 茶籽糖蛋白的缓冲盐提取方法及其作为抗疲劳药物的应用未见报道。
【发明内容】
[0006] 为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种茶籽糖蛋白的 制备方法。
[0007] 本发明的另一目的在于提供通过上述制备方法得到的茶籽糖蛋白。
[0008] 本发明的再一目的在于提供所述的茶籽糖蛋白在抗疲劳药物中的应用。
[0009] 本发明的目的通过下述技术方案实现：一种茶籽糖蛋白的制备方法，包括如下步 骤：
[0010] (1)将脱脂茶籽柏用乙醇水溶液回流提取，过滤，得到滤渣和乙醇水提取液；然后 将滤渣蒸出乙醇至无醇味，备用；
[0011] (2)将步骤（1)的滤渣用磷酸缓冲液保温浸泡，过滤，得到滤液；所述磷酸缓冲液 的pH为8~10;所述磷酸缓冲液的浓度为0. 05~0. 1M;
[0012] (3)将滤液用2000Da的超滤膜超滤，再将超滤膜上的截留部分冷冻干燥，得到茶 轩糖蛋白。
[0013] 步骤（1)中所述脱脂茶籽柏为脱脂油茶籽柏或脱脂茶叶籽柏；
[0014] 步骤⑴中所述乙醇水溶液与脱脂茶籽柏的液固比为（10~20)mL:lg;所述提取 条件为于60~80°C下提取0. 5~3小时。
[0015] 步骤⑴所述乙醇水溶液的体积百分比浓度为80~90%。
[0016] 步骤（2)所述磷酸缓冲液与步骤⑴的脱脂茶籽柏的液固比为（15~30)mL:lg。
[0017] 步骤（2)所述保温浸泡的条件为于50~60°C保温1~3h。
[0018] 步骤（3)所述冷冻干燥的条件为-30~-50°C冷冻干燥4~8小时。
[0019] -种茶籽糖蛋白由上述方法制备得到，其糖含量为40~70%、蛋白含量30~ 60%〇
[0020] 所述茶籽糖蛋白应用于制备抗疲劳的药物制剂。
[0021] 所述药物制剂为口服制剂（粉剂或液体）或注射制剂等剂型中的任何一种；
[0022] 所述药物制剂为含有茶籽糖蛋白的单方或复方制剂。
[0023] 本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
[0024] (1)本发明采用同一原料先经80~90%乙醇水溶液提取除去了脱脂原料中皂素 和其他脂溶性成分，再经磷酸盐缓冲液提取滤渣中糖蛋白，可显著提高糖蛋白的纯度；
[0025] (2)本发明采用碱性磷酸缓冲液提取糖蛋白，既保持pH稳定，从而保留了糖蛋白 的活性，又将糖蛋白溶解，使之充分被提取出来；再通过超滤膜除去盐分，从而使产品纯度 和活性显者提尚；
[0026] (3)由于茶籽糖蛋白利用速度较慢而能够较长时间进行能量补充，维持血糖水平， 且渗透压比单糖低，更适合作为运动补充剂，因此本发明茶籽糖蛋白可作抗疲劳药物或功 能性添加剂；
[0027] (4)本发明制备工艺简单，反应条件温和，产品质量稳定，便于工业化生产。
【具体实施方式】
[0028] 下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。 [00 29] 实施例1
[0030] 取1kg的市售脱脂茶叶籽柏，加入12L的体积分数85%的乙醇水溶液，于65°C回 流提取1小时，过滤，然后将滤渣于80°C蒸出乙醇至无醇味；再将滤渣用20LpH为8的0. 1M 磷酸缓冲液浸泡并于55°C保温3h，过滤，得到浸泡过滤后的滤液；将浸泡过滤后的滤液用 2000Da的超滤膜超滤，将超滤膜上的截留部分冷冻干燥（_50°C冷冻干燥4小时），得到茶籽 糖蛋白180g。
[0031] 实施例2
[0032] 取1kg的市售脱脂油茶籽柏，加入10L的体积分数80%的乙醇水溶液，于70°C回 流提取3小时，过滤，然后将滤渣于80°C蒸出乙醇至无醇味；再将滤渣用30LpH为10的 0. 05M磷酸缓冲液浸泡并于60°C保温3h，过滤，得到浸泡过滤后的滤液；将浸泡过滤后的滤 液用2000Da的超滤膜超滤，将超滤膜上的截留部分冷冻干燥（-30°C冷冻干燥8小时），得 到茶籽糖蛋白190g。
[0033] 实施例3
[0034] 取1kg的市售脱脂茶叶籽柏，加入20L的体积分数82 %的乙醇水溶液，65°C回流提 取2小时，过滤，然后将滤渣于80°C蒸出乙醇至无醇味；再将滤渣用15LpH为9的0. 1M磷 酸缓冲液浸泡，60°C保温2h，过滤，得到浸泡过滤后的滤液；将浸泡过滤后的滤液用2000Da 的超滤膜超滤，将超滤膜上的截留部分冷冻干燥（-40°C冷冻干燥6小时），得到茶籽糖蛋白 165g〇
[0035] 实施例4
[0036] 取1kg的市售脱脂油茶籽柏，加入15L的体积分数90%的乙醇水溶液，60°C回流 提取2小时，过滤，然后将滤渣于80°C蒸出乙醇至无醇味；再将滤渣用15LpH为8. 5的 0. 08M磷酸缓冲液浸泡，50°C保温2h，过滤，得到浸泡过滤后的滤液；将浸泡过滤后的滤液 用2000Da的超滤膜超滤，将超滤膜上的截留部分冷冻干燥（_35°C冷冻干燥7小时），得到 茶籽糖蛋白165g。
[0037] 实施例5
[0038] 取1kg的市售脱脂茶叶籽柏，加入10L的体积分数87%的乙醇水溶液，70°C回流 提取2. 5小时，过滤，然后将滤渣于80°C蒸出乙醇至无醇味；再将滤渣用25LpH为9. 5的 〇. 1M磷酸缓冲液浸泡并于55°C保温2h，过滤，得到浸泡过滤后的滤液；将浸泡过滤后的滤 液用2000Da的超滤膜超滤，将超滤膜上的截留部分冷冻干燥（_45°C冷冻干燥5小时），得 到茶籽糖蛋白187g。
[0039] 实施例6
[0040] 取1kg的市售脱脂油茶籽柏，加入15L的体积分数90%的乙醇水溶液，65°C回流 提取1. 5小时，过滤，然后将滤渣于80°C蒸出乙醇至无醇味；再将滤渣用20LpH为8. 5的 0. 05M磷酸缓冲液浸泡，60°C保温3h，过滤，得到浸泡过滤