Epb41l4b基因在帕金森病诊治中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及生物技术领域，具体地设及人EPB41L4B基因在帕金森病诊断、治疗中 的用途。
【背景技术】
[0002] 帕金森病（Parkinson'Sdisease,PD)是一种中老年常见的进行性神经系统变性 疾病，临床上W震颤、运动迟缓、肌强直和姿势步态异常为主要特征。病理特征不仅包括引 起核屯、的运动障碍症状的黑质-纹状体多己胺能系统变性，而且包括中枢、外周和自主神 经系统的多祀点侵犯，并伴有广泛的路易小体和路易轴突的形成。帕金森疾病中黑质神经 细胞死亡的原因尚不完全清楚，普遍认为与环境毒素、基因突变、遗传因素、氧化应激、免疫 系统异常、铁离子聚集和神经兴奋毒性增强等诸多机制有关。随着人口老龄化的加剧和人 们生活节奏的增快，WPD为代表的中枢神经退行性疾病已经成为仅次于屯、血管疾病、恶性 肿瘤W及中风之后的主要致死性疾病，给患者W及全社会都造成十分严重的负担。帕金森 病是一种慢性进展性疾病，具有高度异质性，目前尚不能治愈。严重者可全身僵硬，生活不 能自理，甚至长期邸床，最终多死于肺炎等并发症。
[0003] 帕金森病的诊断主要是实验室检查辅助WCT、MRI、SPECT、PET等影像表现，由于 缺乏疾病特异性生物标志物和有效的实验室辅助检测方法，所W帕金森病在临床前期无法 检测。当该病发展到临床期时，患者中脑多己胺神经元蚁变已达70%。因此早诊早治是目 前改善帕金森病患者长期生存的最佳途径。帕金森病的辅助检测方法如99mTc-TR0DAT-l 等作为示踪剂行多己胺转运体功能显像可支持诊断，但是检查费用较贵，难W在临床大规 模地推广。因此寻找一种特异和敏感的诊断方法愈发重要。
【发明内容】
[0004] 为了弥补现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种可用于帕金森病诊断的分 子标志物EPB41L4B基因。相比传统的帕金森病的诊断方法，使用基因标志物来诊断帕金森 病具有及时性、特异性和灵敏性，从而使患者在早期就能知晓疾病风险，针对风险高低，采 取相应的预防和治疗措施。 阳〇化]为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0006] 本发明提供了一种EPB41L4B基因在制备诊断帕金森病的产品中的应用。
[0007] 进一步，上面所提到的诊断产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位 杂交或忍片检测EPB41L4B基因及其表达产物的表达水平W诊断帕金森病的产品。
[0008] 进一步，所述用RT-PCR诊断帕金森病的产品至少包括一对特异扩增EPB41L4B基 因的引物；所述用实时定量PCR诊断帕金森病的产品至少包括一对特异扩增EPB41L4B基 因的引物；所述用免疫检测诊断帕金森病的产品包括：与EPB41L4B蛋白特异性结合的抗 体；所述用原位杂交诊断帕金森病的产品包括：与EPB41L4B基因的核酸序列杂交的探针； 所述用忍片诊断帕金森病的产品包括：蛋白质忍片和基因忍片；其中，蛋白质忍片包括与 EPB41L4B蛋白特异性结合的抗体，基因忍片包括与EPB41L4B基因的核酸序列杂交的探针。
[0009] 优选地，所述产品包括忍片、试剂盒。
[0010] 本发明还提供了一种诊断帕金森病的产品，所述产品包括但不限于忍片、试剂盒。
[0011] 其中，所述忍片包括基因忍片、蛋白质忍片；所述基因忍片包括固相载体W及固定 在固相载体上的寡核巧酸探针，所述寡核巧酸探针包括用于检测EPB41L4B基因转录水平 的针对EPB41L4B基因的寡核巧酸探针；所述蛋白质忍片包括固相载体W及固定在固相载 体上的EPB41L4B蛋白的特异性抗体。所述基因忍片可用于检测包括人EPB41L4B基因在内 的多个基因（例如与帕金森病相关的多个基因）的表达水平。所述蛋白质忍片可用于检测 包括人EPB41L4B蛋白在内的多个蛋白质（例如与帕金森病相关的多个蛋白质）的表达水 平。通过将多个帕金森病的标志物同时检测，可大大提高帕金森诊断的准确率。
[0012] 其中，所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒；所述基因检测 试剂盒包括用于检测EPB41L4B基因转录水平的试剂；所述蛋白免疫检测试剂盒包括 EPB41L4B蛋白的特异性抗体。
[0013] 进一步，所述试剂包括使用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或忍片方 法检测EPB41L4B基因表达水平的试剂。优选地，所述试剂包括针对EPB41L4B基因的引物 和/或探针。根据EPB41L4B核巧酸序列信息设计出可W用于检测EPB41L4B基因表达水平 的引物和探针。
[0014] 进一步，与EPB41L4B基因的核酸序列杂交的探针可W是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合 体、PNA或其它衍生物。所述探针的长度没有限制，只要能完成特异性杂交、与目的核巧酸序 列特异性结合，任何长度都可W。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。 同样，所述探针的长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不 同的探针长度对杂交效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱 基对，最长一般不超过30个碱基对，与目的核巧酸序列互补的长度W 15-25个碱基对最佳。 所述探针自身互补序列最好少于4个碱基对，W免影响杂交效率。
[0015] 进一步，所述EPB41L4B蛋白的特异性抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体。所述 EPB41L4B蛋白的特异性抗体包括完整的抗体分子、抗体的任何片段或修饰。例如，嵌合抗 体、scFv、F油、F(油'）2、Fv等。只要所述片段能够保留与EPB41L4B蛋白的结合能力即可。 用于蛋白质水平的抗体的制备是本领域技术人员公知的，并且本发明可W使用任何方法来 制备所述抗体。
[0016] 本发明还提供了EPB41L4B基因及其表达产物在制备治疗帕金森病的药物中的应 用。 阳017] 进一步，上面所述的药物包括含有EPB41L4B基因和/或其表达产物的抑制剂。
[0018] 进一步，所述抑制剂包括抑制EPB41L4B基因表达的物质、影响EPB41L4B基因表达 产物稳定性的物质、和/或抑制EPB41L4B基因表达产物活性的物质。
[0019] 进一步，本发明所述的治疗帕金森病的药物包括：通过干扰RNA抑制EPB41L4B基 因表达的双链核糖核酸，或基于EPB41L4B抗原蛋白的肿瘤疫苗、或用于抑制EPB41L4B蛋白 活性的蛋白质。
[0020] 优选地，所述抑制剂为针对EPB41L4B的siRNA。
[0021] 本发明还提供了上面所述的抑制剂在制备治疗帕金森病的药物中的应用。
[0022] 在本发明中，所述RNA干扰（RNAinterference,RNAi)是指内源性或外源性双链 RNA(double-strandedRNA，dsRNA)介导的细胞内mRNA发生特异性降解，从而导致祀基因 的表达沉默，产生相应的功能表型缺失的现象。RNAi技术是一种典型的负调控机制，使用该 技术可W特异性剔除或关闭特定基因的表达，该技术已被广泛用于探索基因功能、基因治 疗及新药开发领域。W细胞为基础的RNAi筛选在功能基因学研究方面具有许多优势，主要 表现在大多数细胞类型都能使用RNAi方法，并且相对较容易下调或沉默目的基因的表达。 阳02引为了确保EPB41L4B基因能够被高效剔除或沉默，根据EPB41L4B基因的mRNA 序列设计了siRNA特异性片段。siRNA的设计根据已发表的通用设计原则巧化ashir et.al2001，Schwarzet.al2003，趾vorovaet.al2003，Reynoldset.al2004， Hsiehet.al2004，Ui-Teiet.al2004)，通过在线工具完成设计，该在线工具为： siRNASelectionProgramofWhiteheadInstitute(BingbingYuanet.al2004，http:// jura.wi.mit.edu/bi°C/siRNAext/)和M/CK-iTTMRNA